Northern印迹和总RNA杂交实验——Northern印迹分析
试剂、试剂盒甲醛凝胶溶液RNA 电泳缓冲液仪器、耗材凝胶模梳齿凝胶用具实验步骤1. 用肥皂和水彻底清洗凝胶模，梳齿和凝胶用具。2. 准备甲醛凝胶溶液。甲醛凝胶溶液（300 ml 1％ 琼脂糖凝胶）：琼脂糖，3.0 g10x RNA 电泳缓冲液，30 ml Milli-Q 或用玻璃器皿蒸馏过的水，222 ml37% 甲醛，48 ml加热熔解琼脂糖。冷却到 55℃（用温度计检査）后加甲醛。在通风橱中倒胶。10x RNA 电泳缓冲液（配 500 ml）：0.2 mol/L MOPS，pH 7.4 1 mol/L MOPS，pH 7.4 100 ml10 mmol/L EDTA，pH 7.4 0.5 mol/L EDTA，pH 7 10 mlMilli-Q H......阅读全文
Northern印迹和总RNA杂交实验——Northern印迹分析
试剂、试剂盒甲醛凝胶溶液RNA 电泳缓冲液仪器、耗材凝胶模梳齿凝胶用具实验步骤1. 用肥皂和水彻底清洗凝胶模，梳齿和凝胶用具。2. 准备甲醛凝胶溶液。甲醛凝胶溶液（300 ml 1％ 琼脂糖凝胶）：琼脂糖，3.0 g10x RNA 电泳缓冲液，30 ml Milli-Q 或用玻璃器皿蒸馏过的
Northern印迹和总RNA杂交实验
试剂、试剂盒 甲醛凝胶溶液RNA 电泳缓冲液仪器、耗材 凝胶模梳齿凝胶用具实验步骤 1. 用肥皂和水彻底清洗凝胶模，梳齿和凝胶用具。2. 准备甲醛凝胶溶液。甲醛凝胶溶液（300 ml 1％ 琼脂糖凝胶）：琼脂糖，3.0 g10x RNA 电泳缓冲液，30 ml Milli-Q 或用玻璃器皿蒸
Northern印迹和总RNA杂交实验
Northern印迹分析 杂交和放射自显影 试剂、试剂盒 甲醛凝胶溶液 RNA 电泳缓冲液
Northern印迹和总RNA杂交实验
Northern印迹分析杂交和放射自显影试剂、试剂盒甲醛凝胶溶液 RNA 电泳缓冲液
Northern印迹和总RNA杂交实验——杂交和放射自显影
实验材料mRNA试剂、试剂盒甲酰胺SSPEDenhardt 试剂SDS仪器、耗材滤膜实验步骤1. 滤膜进行 1~2 小时预杂交。在 42℃：50% 甲酰胺5x SSPE2 x Denhardt 试剂0.1% SDS或者在 68℃：6x SSC2x Denhardt 试剂0.1% SDS2. 把已变性
Northern印迹的制备和Northern印迹
Northern印迹的制备 预备： 1.按下述步骤，每泳道加10～20μg总RNA或 0.5～1μgpoly(A)+RNA进行甲醛/ 琼脂糖凝胶电泳，将凝胶放在紫外线透照仪上，旁边置一标尺进行拍照。 a. 总RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃温育5min：
Northern－印迹分析实验
试剂、试剂盒 琼脂糖凝胶菌落裂解缓冲液蒸馏水甲醛甲酰胺预杂交 杂交液HotPrime cDNA Labeling Kit矿物油MOPS 缓冲液MOPS乙酸钠EDTAPCR 缓冲液SSCNaClSDSNaClNaH2PO4[a-32P]dATPLgh Rgh 引物鲑鱼精 DNATaq DNA
Northern－印迹分析实验
为了确认所选择 cDNA 确实是差异表达的，建议使用 Northern 印迹分析，而不要用其他的确认技术，比如反向 Northern 杂交（Zhangetal.1996) 或定量 RT-PCR。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒琼脂糖凝胶菌落裂解缓冲液蒸馏水甲
Northern－印迹分析实验
试剂、试剂盒 琼脂糖凝胶 菌落裂解缓冲液 蒸馏水 甲醛 甲酰胺预杂交 杂交液 HotPrime cDNA Labeling Kit
RNA印迹(Northern－Blot)
【实验原理】将RNA变性及电泳分离后，转移到固相支持物上，用于与DNA探针杂交以鉴定其中特定 RNA分子的大小与含量。基本原理与Southern印迹相同，但RNA变性方法与DNA不同，不能用碱变性，因为碱会导致RNA的水解。Northern印迹主要用于组织细胞靶基因表达水平的研究以及对同一组织细胞的
组织印迹的Northern杂交
组织印迹的Northern杂交1）硝酸纤维素膜或尼龙膜上的组织印迹1．在塑料板上放置两层Whatman 1号滤纸，在滤纸上方放上一张普通纸，然后铺上一层尼龙膜。2．用双面刀片从植物组织如大豆的茎上切取一块切片（厚度约为1mm）。如果组织表面是湿的，则在Kimwipes纸上轻轻吸干或先用蒸馏水洗涤几秒
Northern杂交试验指导手册（6）－Northern－印迹杂交
A． 探针准备DIG标记的RNA探针与DNA探针相比，显示较强的杂交信号和较地的非特异性背景，因此，只要可能选用RNA探针可以比DNA探针获得更好的杂交结果。如果必须使用DNA探针，建议使用高SDS杂交缓冲液或DIG Easy Hyb以减少背景。在正式杂交试验之前，优化杂交探针浓度是避免颜色背景所必
总RNA提取与Northern杂交（1）
一、 总RNA的提取1、 取组织10-50毫克，剪切成大小在0.5厘米以内的碎片，加入×5的RNA later（约2毫升）。样品在37度可保存1天。室温下1周，4度下1个月。2、 匀浆：用Rnase Erase spray（ICN）清理匀浆器头部（7mm），用DEPC水和乙醇清洗，将上述样品用镊
总RNA提取与Northern杂交（3）
第二天：将上述物品揭开，将胶正面朝下，膜正面朝上，用铅笔作好标记。将胶浸泡在EB中1-2分钟，用DEPC H2O清洗，将膜放在滤纸上面，夹好，4度下保存，或者直接进行预杂交。UV杂交（有助于RNA结合到膜上面）。五、预杂交和杂交预杂交和杂交 buffer： 100ul20×SSC 25ml （5×S
总RNA提取与Northern杂交（2）
4、Loading buffer（10ul每个样） 总体积 100ul 200 ul 500ul 10×MOPS
RNA的Nouthern印迹和狭线杂交分析实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 DEPCMOPS甲醛琼脂糖乙酸铵NaOHNaClTris·Cl磷酸钠溴化乙锭SDS仪器、耗材 离心机电泳仪培养箱紫外线透照仪杂交炉实验步骤 1. 用72 ml 水溶解1 g 琼脂糖，在水浴中冷至60℃时，移至通风橱中加入10×MOPS电泳缓冲液和18 ml 12.3
RNA的Nouthern印迹和狭线杂交分析实验
Northern blot 是研究基因表达的最严谨的方法之一，可以定量分析组织中某一特异 mRNA 的表达丰度，根据其迁移位置也可以判断基因表达转录物的大小。该技术应用十分广泛，常用于分析 RNA 样品中特定 mRNA 的大小和丰度，也可用于基因表达调控、基因结构及功能、遗传变异等研究。实验材料RN
RNA的Nouthern印迹和狭线杂交分析实验
甲醛-琼脂糖凝胶电泳 实验材料 RNA 试剂、试剂盒
Northern－Blotnorthern杂交
Northern BlotPreparation of Formaldehyde Agarose GelThe gel conditions (1% agarose, 1X MOPS, 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electroph
RNA印迹杂交
RNA印迹杂交1） Northern印迹的制备预备：1．按下述步骤，每泳道加10～20μg总RNA或0.5～1μg poly(A)+RNA进行甲醛/琼脂糖凝胶电泳，将凝胶放在紫外线透照仪上，旁边置一标尺进行拍照。a. 总RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃温育5min：总RNA（1
Northern杂交
实验方法原理 转移并固定到膜上的 RNA 样品可以与特异的探针杂交，从而用来对所感兴趣的 RNA 进行定位。视实验人员和条件的差异，可以从多种方法中选择任意一种来标记和检测探针。用抑制非特异吸收探针的封闭试剂处理膜之后，在适于探针和固定的靶 RNA 杂交的条件下将膜同探针孵育，而后广泛洗
Northern杂交
Northern杂交1．在10~20 ml 预杂交液中68℃温育膜2h。2．若使用双链探针，在100℃下加热32P标记的双链DNA 5 min，使之变性，然后迅速移至冰水中冷却。3．把变性的或单链放射性标记的探针直接加到预杂交液中，在合适的温度下继续温育12~16h。4．杂交后，将膜从塑料袋中取出，
Northern杂交
转移并固定到膜上的 RNA 样品可以与特异的探针杂交，从而用来对所感兴趣的 RNA 进行定位。视实验人员和条件的差异，可以从多种方法中选择任意一种来标记和检测探针。用抑制非特异吸收探针的封闭试剂处理膜之后，在适于探针和固定的靶 RNA 杂交的条件下将膜同探针孵育，而后广泛洗膜以去除非特异结合的探针，
Northern杂交
实验方法原理 转移并固定到膜上的 RNA 样品可以与特异的探针杂交，从而用来对所感兴趣的 RNA 进行定位。视实验人员和条件的差异，可以从多种方法中选择任意一种来标记和检测探针。用抑制非特异吸收探针的封闭试剂处理膜之后，在适于探针和固定的
Northern杂交
实验概要本实验介绍了Northern杂交的基本流程。主要试剂液氮，TRIzol (Invitrogen)，DEPC水，氯仿，异丙醇，70%酒精，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，水饱和酚(PH4.3)，无水乙醇，NaOAc，抽提缓冲液(0.02M NaOAc，1 mM EDTA，0.5% SD
Northern杂交分析操作步骤
【操作】1．RNA的提取见前。2．变性胶的制备：取琼脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加热熔化，冷却至 60℃时加入5×甲醛凝胶电泳缓冲溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混匀、制胶。待胶凝固后，置于1×甲醛凝胶电泳缓冲溶液中预电泳5min。3．样品制备 取总RNA4.5 ，加入5
Northern杂交步骤和过程
Northern杂交与Southern杂交很相似。主要区别是被检测对象为RNA,其电泳在变性条件下进行,以去除RNA中的二级结构,保证RNA完全按分子大小分离。变性电泳主要有3种:乙二醛变性电泳、甲醛变性电泳和羟甲基汞变性电泳。电泳后的琼脂糖凝胶用与Southern转移相同的方法将RNA转移到硝酸纤
Northern杂交技术
经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，
miRNA检测的三种方法
MicroRNA (miRNA)是一种机体内源性表达的单链小分子RNA，位于基因组非编码区，本身不具有开放阅读框(open reading frame，ORF)，具有高度保守性，时序性和组织特异性。miRNA广泛存在于各种真核细胞中，不编码任何蛋白质，长度仅为20～24nt。成熟的miRNA 5′端
miRNA检测的三种方法
MicroRNA (miRNA)是一种机体内源性表达的单链小分子RNA，位于基因组非编码区，本身不具有开放阅读框(open reading frame，ORF)，具有高度保守性，时序性和组织特异性。miRNA广泛存在于各种真核细胞中，不编码任何蛋白质，长度仅为20～24nt。成熟的miRN