微载体
实验方法原理以高浓度接种细胞和微珠，然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。实验材料起始培养物仪器、耗材生长培养基微载体搅拌培养瓶磁力搅拌器实验步骤1. 按照所需最终培养液量的 1/3，以 2~3 g/L 混悬微珠。2. 用胰蛋白酶消化和计数细胞，以正常接种浓度的 3~5 倍将细胞接种到微珠悬液中。3. 以 10~25 rpm 将培养物搅拌 8 h。4. 加入培养液，达到 0.7~1 g/L 的微珠浓度的最终容量。5. 加快搅拌速度至 60 rpm。6. 如果 pH 下降，关闭搅拌器培养 5 min，使微珠沉降下来，然后更换 1/2~2/3 的培养液。7. 收集细胞：(a)吸出培养液。(b)通过沉降法清洗细胞。(c)用胰蛋白酶和 EDTA 处理微珠。(d)让微珠沉降。(e)通过转动使细胞从微珠上脱落下来。(f)通过混悬和离心清洗细胞。展开......阅读全文
特殊细胞培养实验_微载体细胞培养法
实验方法原理微载体细胞培养开始于60年代末期，最早使用离子交换凝胶作为载体，轻微搅动即可悬液在培养基中，因而可增加细胞附着的面积，达到大量培养细胞的目的。后来，根据细胞附着生长的特点，对微载体进行了改良，使其带有电荷或其它介质，更利于细胞附着和生长。这一方法亦可用于常规量的培养，也可用于大规模的培养
3D细胞培养：干细胞微载体的应用
干细胞培养方法 当前干细胞最主要的培养方法仍是2D培养，2D培养仅在一个平面上支持干细胞生长，无法再现生物体内细胞真实的3D立体微环境。2D培养环境在生物活性、培养基结构、营养物质的释放等很多方面均远不及3D培养，使干细胞逐渐丧失其原有的性状、形态、结构和功能，导致其
3D细胞培养：干细胞微载体的应用（二）
3D干细胞培养材料需要具备的特点： (1) 三维多孔结构 适宜的空间结构和孔隙率，有利于干细胞的黏附、生长增殖。 (2) 较好的生物相容性 材料对干细胞无毒性作用，可以和干细胞稳定结合，且干细胞在生物体内不会诱发排斥或炎症反应等。 (3) 具备生物可
质粒载体的载体大小的介绍
大的质粒（大于15kb）不会很好转化而且DNA产量通常很低。在设计实验时要考虑到加入插入片段的最终载体大小，尽量用更小的载体。 兼容性 当多于一个质粒载体必须同时存在于同一个细菌细胞中，这两个质粒的复制子必须是兼容的。当他们不能稳定地共存时，则认为这两个质粒是不兼容的。 选择/检测插入片段
LITMUS39载体载体载体的基本信息和质粒图谱
LITMUS39载体载体基本信息载体名称LITMUS39载体抗性Ampicillin载体长度2817 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Evans PD, Cook SN, Riggs PD, Noren CJ.拷贝数High copy number5'引物M13
Vero－细胞在－WAVE－反应器中的微载体球转球放大（五）
相比搅拌罐而言，WAVE 反应器在同一个培养袋中可以有更宽的培养范围（10-100%工作体积），对于种子扩增和细胞消化的不同反应体积，都可以提供均匀有效的混合，从而实现微载体的原位消化，而无需特定的消化反应器。避免了消化前后微载体的转移，操作简单，均匀有效的混合有利于精密控制消化反应的条件，最大
Vero－细胞在－WAVE－反应器中的微载体球转球放大（四）
B2B #5 采用第二种方式进行高倍率放大。用 3g/L 的微载体密度培养 Vero 细胞至细胞密度 3.07x106/毫升,培养体积为 3 升。用胰酶把 Vero 细胞从微载体上消化下来。取十分之一的细胞/微载体悬浮液接种到新的 1.5 升的培养体积中，微载体浓度为 6g/L。待细胞密度达到 5
微载体在生物反应器进行细胞规模扩培中的应用
微载体是用于基于生物反应器的进行细胞生产中微型载体颗粒。麻省理工学院研究与技术联盟 (SMART) 的研究人员近期开发了一种用于大规模细胞生产和扩增的新型微载体，与传统方法相比，该微载体具有更高的产量和成本效益，并减少了所需的步骤在细胞检索过程中。SMART 新开发的基于明胶的可溶性微载体已被证明可
Vero－细胞在－WAVE－反应器中的微载体球转球放大（二）
在瓶子内进行球转球实验 在 WAVETM 反应器内细胞密度达到需要的水平时，Vero 细胞微载体培养悬浮液即被转移到另外一个透明的瓶子中并移到生物安全柜中。后面的清洗和胰酶消化过程等均在生物安全柜内进行。在微载体沉降下来之后，去除上清。剩下的微载体被转移到 500 毫升无菌透明的瓶子内
Vero－细胞在－WAVE－反应器中的微载体球转球放大（三）
图 3 和图 4 显示的是球转球前后 Vero 细胞在微载体上的生长情况，分别有接种前第一、第三和第五天细胞的形态。图 4 的上面三张小图显示了球转球实验 B2B #3 之前来自细胞工厂种子培养的细胞生长形态。这是典型的 Vero 细胞种子培养的生长情况。通常 90%以上的 Vero细胞会在
Vero－细胞在－WAVE－反应器中的微载体球转球放大（一）
Vero 细胞在 WAVE 反应器中的微载体球转球放大 陆丽芳，Christain Kaisermayer, 姚钰舜，隋礼丽通用电气医疗集团生命科学部，Fast Trak研发中心，上海 概要 Vero 细胞能被广泛应用于疫苗的生产。Vero 细胞的培养技术能否成功放大对于该技术能否大
简述慢病毒载体的载体质粒
载体质粒上HIV-1的顺式序列通常包括两端的LTR、剪切位点及包装信号Ψ等。此外，研究表明，gag基因5′端的序列可提高载体RNA的包装效率；Rev蛋白需要与Rev反应元件(RRE)相作用，将未剪切的载体转录产物从细胞核转运到胞浆。因此，Naldini等在载体上保留了gag基因5′端350bp的
WAVETM－生物反应器中的－Cytodex™－微载体细胞培养工艺（三）
结果和讨论 微载体培养的最佳工作体积和混合速度的确定当我们使用 20%到 80%的Cellbag最大工作体积时，微载体培养可以产生均匀的微载体混合分布（图 2）。图 2. 微载体培养的最佳工作体积 在工作体积小于 20%的 Cellbag 最大工作体积时，部分微载体有可能粘在 Cel
WAVETM－生物反应器中的－Cytodex™－微载体细胞培养工艺（四）
微载体用量为3 g/l的 Cytodex3，接种细胞密度为0.3×106细胞/ml。培养条件为37℃，pH 7.3，5% CO2，采用光纤溶氧电极监测溶氧水平。培养基含有 2% FBS。每小时取样并用结晶紫染色测定总细胞密度，上清中的悬浮细胞和死细胞用台盼蓝染色。MDCK细胞在接种后1 h
WAVETM－生物反应器中的－Cytodex™－微载体细胞培养工艺（六）
Vero细胞在转瓶 （Spinner Flask)中无血清条件下的微载体培养 Vero细胞也可以在转瓶中进行微载体培养。如图 14 所示，在无血清条件下，WAVE 和转瓶这两种培养系统中可以获得基本相同的最大细胞密度。相比 Cytodex3，Cytodex 1 具有更大的表面积，
贴壁细胞培养方法（平面2D培养、搅拌式培养、微载体培...
贴壁细胞培养方法（平面2D培养、搅拌式培养、微载体培养）优缺点比较贴壁细胞-----真正的贴壁、线性的放大（潮汐式反应器）细胞反应器是某种细胞的培养生长代谢过程的反应器，这个过程需要控制的条件比较多，比较复杂。细胞反应器根据工作方式和功能的分类：一、平面２Ｄ培养（培养皿、方瓶、滚瓶）：优点：成本低，
WAVETM－生物反应器中的－Cytodex™－微载体细胞培养工艺（一）
摘要 WAVE Bioreactor 系统多用于悬浮细胞的培养。然而，用于细胞治疗和疫苗生产的多种细胞为贴壁依赖型的，需要一个可贴附的生长表面。在本研究中，Cytodex 微载体被应用在 CellbagTM 生物反应器中以扩增 Madine-Darby Canine Kidney
荧光成像实现口服给药微载体监控活体胃肠道内药物释放
口服药物由于其非侵入性的性质，能避免注射带来的疼痛、不适且能减少污染等优势使它成为目前药物输送中最方便的途径。但是，多肽和蛋白等大部分生物活性药物容易在胃肠道降解或失活。因此，口服制剂在进行临床转化前，其活体药物释放动力学及药物载体本身的代谢情况评估极其重要。目前X射线辐射成像和核磁共振成像等这些检
WAVETM－生物反应器中的－Cytodex™－微载体细胞培养工艺（五）
MDCK细胞的生长和放大（2% FBS） 为了研究在 Cellbag 生物反应器中 MDCK细胞扩增的可放大性，在两种不同大小的袋子之间比较最大细胞密度和细胞生长速率 Cellbag-10 L和 Cellbag-50 L。 袋子的工作培养体积采用最大工作体积的40%（即Cellbag-1
WAVETM－生物反应器中的－Cytodex™－微载体细胞培养工艺（二）
用于MDCK和 Vero细胞的生物反应器 WAVE Bioreactor 系统由一个带有一次性塑料细胞培养袋的摇动平台组成，配备CO2 气体混合器 (CO2MIX20) 或WAVEPOD™控制塔用于控制pH、温度、氧气和混合。MDCK细胞在Cellbag-10 L和Cellbag-50
siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45—50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。这一类启动子包括大家熟悉的人
质粒与载体
一、质粒绝大多数的生物都是以DNA 的形式来储藏其遗传信息。遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori, origin of replication，或译为复制起点)，使整个基因体得以复制。含有复制原的遗传物质称为replicon，我们姑且把它译为为复制体吧！原核性复
生物载体分类
质粒载体质粒载体是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1～200 kb左右，kb为千碱基对)，有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到细菌染色体DNA中，随着染色体DNA的复制而复制。噬菌体载体
细胞膜的制备方法_从生长于微载体上细胞中分离细胞膜
实验材料细胞试剂、试剂盒CB仪器、耗材微型离心机临床台式离心机超离心机吊桶式转头离心管振荡器尼龙单丝网探头超声仪实验步骤1. 准备下列仪器：微型离心机临床台式离心机超离心机吊桶式转头和合适的离心管振荡器尼龙单丝网，孔径约 50 μm探头超声仪2. 将微载体培养物转移到 50 ml 的锥形离心管中。3
克隆载体的功能作用及常见的载体介绍
克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。
固定化细胞技术载体要求及常用载体介绍
①载体应是亲水的，疏水载体与有机溶剂相同的变性影响。②载体也是要求有一定的机械强度和稳定性。③常用的载体包括：1、天然高分子（纤维素、琼脂糖、淀粉、葡萄糖凝胶、胶原及其衍生物等）2、合成高聚物（尼龙。多聚氨基酸等）3、无机支持物（多孔玻璃、金属氧化物等）
简述siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞
shRNA干扰载体构建
产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA经过RISC剪切后形
shRNA干扰载体构建
产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA经过RISC剪切后形
腺病毒载体综述
腺病毒的一般特性 腺病毒的形态是特征性的二十面体病毒壳体（Stewart et al., 1993）。其病毒壳体含有三种主要的蛋白：六邻体（II），五邻体基底（III）和纤突（IV），还有多种其他的辅助蛋白VI，VIII，IX，IIIa和Iva2（Fig. 1）。腺病毒基因组是一个线性的双链D