细胞死亡的生化分析实验——Caspase激活的比色计定量
实验材料细胞试剂、试剂盒PBSEppendorfDMSO仪器、耗材微量滴定板实验步骤1. 250 g 离心 5 分钟收集 2X106~5X106 细胞，用 pH 7.2 的冷 PBS 洗 1 次，用 200 μl 溶解缓冲液重悬。2. 在冰上孵育细胞 30 分钟。3. 用 Eppendorf 将样品在 13000 r/min 离心 5 分钟，取上样进行 Caspase 活性测定：每种样品留一等份作蛋白质定量。4. 在水或 DMSO 中溶解底物，配置成 20 mmol/L 的储存液，可在 -20℃ 避光保存。5. 将反应混合液置微量滴定板中，用带动力学装置的 SpectraMax 微量滴定板分析仪在 405 nm 滤光片下读取反应数据。每 2~20 秒检测样品，确定底物的初始水解率；保证所得底物水解率为线性。展开......阅读全文
自然杀伤细胞和淋巴因子激活杀伤细胞的杀伤功能实验
实验方法原理 NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中，能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞，无需抗原或有丝分裂原刺激，亦不依赖抗体或补体，在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用。 LAK是NK或T细胞在体外高剂量IL
自然杀伤细胞和淋巴因子激活杀伤细胞的杀伤功能实验
实验方法原理NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中，能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞，无需抗原或有丝分裂原刺激，亦不依赖抗体或补体，在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用。 LAK是NK或T细胞在体外高剂量IL-2诱导下，获得能杀伤NK抵抗的肿瘤细胞的功能，在过继免疫治疗肿
细胞的死亡形式介绍细胞凋亡
凋亡是程序性细胞死亡的严格控制的模式，其特征在于明显的形态变化以及特定 caspase 和线粒体控制通路的激活。可以通过内在或外在通路触发。内在通路可以通过细胞应激、DNA 损伤、发育信号、存活因子缺失被激活。通过检测来自其他细胞的细胞外死亡信号来触发外在通路。可以通过区分形态特征来鉴定凋亡细胞。它
酶的激活和抑制实验
实验方法原理酶的活力常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活力增加，称为激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为抑制剂。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。例如，氯化纳达到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活
酶的激活和抑制实验
实验方法原理酶的活力常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活力增加，称为激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为抑制剂。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。例如，氯化纳达到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活力。实验步骤1．仪器：（1）
酶的激活和抑制实验
实验方法原理酶的活力常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活力增加，称为激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为抑制剂。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。例如，氯化纳达到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活力。实验步骤1．仪器：（1）
细胞凋亡与细胞坏死以及细胞程序性死亡的区别
细胞凋亡（apoptosis），又称程序性细胞死亡（programmed cell death），是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序性的死亡。与细胞的坏死不同，细胞凋亡不是一种被动的过程，而是一种主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。它并不是病理条件下自体损伤的一种现
细胞组分的分析方法——定量细胞化学分析技术1
一.流式细胞光度术－单细胞悬液染色标本的多信息分析法1.概述 流式细胞光度计(flow cytometry)可定量地测定某一细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量，以及细胞群体中上述成分含量不同的细胞的数量，特别是它还可将某一特异染色的细胞从数以万计的细胞群体中分离出来，以及将DNA含量不同的
细胞组分的分析方法——定量细胞化学分析技术2
5.固定方法(1)福尔马林法： 在单细胞悬液中加入等体积含8％甲醛的盐水G，4℃下固定12至18小时。该法常用于Acriflavine-Feulgen染色。(2)乙醇法： 细胞被重新悬浮于5ml冷盐水G中，慢慢加入-20℃95％的乙醇15ml，其最终浓度为70％，冰浴30分钟。此法常用于EB及P
综述：细胞凋亡（二）
细胞凋亡的过程及机理 细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段：接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化（Caspase）→进入连续反应过程 1．凋亡的启动阶段细胞凋亡的启动是细胞在感受到相应的信号刺激后胞内一系列控制开关的开启或关闭，不同的外界因素启动凋亡的方式不同，所引起的信号转
NK细胞的抑制和激活
NK细胞没有主开关，它们的激活是激活性和抑制性受体相互作用以及免疫检查点的结果(图2)。因此，激活受体直接与转化细胞上过表达的配体相互作用，使NK细胞具有识别和杀伤肿瘤细胞的能力，而不考虑其HLA-I的表达。为了防止NK细胞介导的攻击，健康的宿主细胞表达高水平的MHC-1。事实上，在成熟的NK细胞中
细胞凋亡综述4
2、所有Caspase先以无活性的酶原（procaspase）的形式合成，其激活过程包括：①二聚体化②caspase自身序列裂解成小亚其和大亚基③除去prodomain。3、最早发现的 caspase 为IL-1β转化酶 (ICE=caspase-1) 它将 pro-IL-1 前体裂解成其活性形式。
凋亡聚焦：Caspase检测新品
Caspase是一组天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶，它们在凋亡中发挥重要作用。一般来说，哺乳动物的caspase可根据功能分类：细胞因子激活(包括caspases 1、4、5、13);凋亡起始(包括caspases 2、8、9、10)和凋亡执行(包括caspases 3、6、7)。 市场
Caspase－Cascade－in－Apoptosis
Apoptosis, programmed cell death, is triggered by a variety of stimuli, including cell surface receptors like FAS, mitochondrial response to stress, a
Caspase效应机制
凋亡细胞的特征性表现，包括DNA裂解为200bp左右的片段，染色质浓缩，细胞膜活化，细胞皱缩，最后形成由细胞膜包裹的凋亡小体，然后，这些凋亡小体被其他细胞所吞噬，这一过程大约经历30-60分钟，Caspase引起上述细胞凋亡相关变化的全过程尚不完全清楚，但至少包括以下三种机制：凋亡抑制物正常活细胞因
GSDMD的棕榈酰化修饰
GSDMD是细胞焦亡过程中的关键蛋白，此前的研究表明GSDMD在细胞焦亡发生时可被Caspase切割，从而释放出N端结构域，释放出的N端结构域进一步形成寡聚体并上膜打孔，最终造成细胞死亡。但此前的研究发现人源GSDMD的C191A突变体会影响其寡聚和造成细胞死亡的能力，因此本文作者尝试探究GSDMD
抗原递呈细胞之激活的巨噬细胞
巨噬细胞也是守卫机体暴露于外界部位的哨兵细胞。它们是适应能力非常强的细胞,根据所接受的来自其定居微环境的信号而具有多种功能,如垃圾收集、 抗原提呈或强大的杀伤功能。在静息状态,巨噬细胞擅于清理保洁,而不十分擅于提呈抗原,这是因为巨噬细胞只有被战斗性细胞因子如 IFN-γ等激活后,才表达足够水平的 M
Nature子刊：凋亡检测新技术
来自天津医科大学的李兵辉(Binghui Li)博士领导的科研小组，开发出了一种新型的遗传编码荧光生物传感器，证实在蛋白质裂解激活的条件下，这种传感器可用于检测细胞内的caspase-3活性。相关成果发表在7月16日的《自然通讯》(Nature Communications)杂志上。
NIBS王晓东PNAS发表凋亡研究新文章
来自北京生命科学研究所的研究人员证实，在凋亡过程中，Bax和Bak激活线粒体蛋白酶OMA1促进了细胞色素C释放。这一重要的研究发现发表在10月1日的《美国国家科学院院刊》（PNAS）上。 论文的通讯作者是北京生命科学研究所所长、美国国家科学院院士王晓东（wangxiaodong）研究员。其主要
细胞溶质LPS感知及其调节和病理生理功能的最新研究进展
通过先天免疫系统监测细胞质室的病原体编码的产物或病原体的活动，往往可以激活caspase的一个子集。在大多数情况下，细胞内的监视通路通过典型的炎症复合体与caspase-1的激活结合。一组相关的caspase，即啮齿动物中的caspase-11和人类中的caspase-4和caspase-5，监
大鼠Caspase9(Caspase9)ELISA检测法
大鼠Caspase-9(Caspase-9)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 Caspase-9 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Caspase-9与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠Caspase-9，
大鼠Caspase13(Caspase13)ELISA检测法
大鼠Caspase-13(Caspase-13)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 Caspase-13 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Caspase-13与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠Caspas
大鼠Caspase2(Caspase2)ELISA检测法
大鼠Caspase-2(Caspase-2)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 Caspase-2 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Caspase-2与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠Caspase-2，
大鼠Caspase3(Caspase3)ELISA检测法
大鼠Caspase-3(Caspase-3)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 Caspase-3 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Caspase-3与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠Caspase-3，
Science：细胞死亡途经原是救命之路
半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶 caspase 是一组与细胞因子成熟和细胞程序性死亡有关的蛋白酶。 caspase 蛋白酶家族也称为 ICE/CED-3家族，是秀丽隐杆线虫死亡基因CED-3的同源物，由14个家族成员 caspase 1-14组成。由于 caspase 家族对细胞的调控起着举足轻
定量分析中实验条件的选择
为了激发某元素的某一线系的特征X射线，入射电子的能量必须大于该元素此线系临界激发能。同时，为了能得到足够的X射线强度，入射电子束也要有足够的强度。一般应按如下几个基本考虑来选择实验条件。1)试样中产生X射线的区域应尽可能地小，以减小被分析区域内外部干扰，更好地发挥电子探针分析的微区化优势。2)为减小
活化诱导的细胞死亡
活化诱导的细胞死亡：（activation-induced cell death，AICD）是T淋巴细胞程序性死亡的又一个主要类型。正常的T淋巴细胞在受到入侵的抗原刺激后，T淋巴细胞被激活，并诱导出一系列的免疫应答反应。机体为了防止过高的免疫应答，或防止这种免疫应答无限制地发展下去，便有AICD来控
施一公院士PNAS发表凋亡研究新成果
来自清华大学的研究人员在新研究中揭示出了Apaf-1凋亡体（apoptosome）激活caspase-9的分子机制，研究论文“Molecular determinants of caspase-9 activation by the Apaf-1 apoptosome”发表在10月13日的《美国
定量分析晚期细胞凋亡中DNA片段的直接方法
多细胞生物是由高度组织化的细胞群落组成的，为了这个细胞群落的茁壮成长，重要的是1.通过复杂的细胞过程，如细胞增殖和凋亡，2.建立稳态。这两个过程中任何一个过程的不适当转变都会导致疾病。例如，神经元凋亡活性的增加是各种神经退行性疾病如阿尔茨海默氏症和帕金森氏症的根源。相反，凋亡机制的丧失会导致细胞过度
邵峰刘小云合作发Nature：发现新翻译后修饰解释免疫机制
【编者独家解读】首先，这篇文章结合了热点的NAD+（前面热度较高的“长生不老药”）、新冠引发的免疫研究热点。其次，对于蛋白质组学来说，以前大家常研究整个蛋白质组学体系中的常见翻译后修饰，如磷酸化修饰、糖基化修饰。这篇文章，则以质谱反映的分子量变化为切入点，发现了一种新的修饰，并且解释了其同疾病一对一