单链抗体的噬菌体展示技术

实验步骤 基 本 方 案 1 全套单链抗体噬菌体载体的构建材 料新鲜分离的小鼠脾脏或者 IO7 杂 交 瘤 细 胞(单 元 1*3)R N A 提取试剂R T -P C R 试剂D E P C 水寡 核 苷 酸 引 物(表 14. 3.1)DNA marker琼脂糖胶回收试剂盒(Qiaquick Gel Extraction kit, Qiagen)10m m o l / L Tris • C U p H 8. 5Vent D N A 聚合酶d N T P (由 R T -P C R 试剂盒提供)P C R 缓 冲 液(由 R T -P C R 试剂盒提供)噬 菌 粒 载 体(如 P C A N T A B 5E )限制酶 S / il、 及相应缓冲液B S AT 4 D N A 连接酶和 10X 连接缓冲液电转感受态菌£:coli T G - IS O C 培养基Y T A G 琼脂平板: Y T 培养基, 2 X ......阅读全文

单-链-抗-体-的-噬-菌-体-展-示-技-术

实验步骤 基 本 方 案 1 全套单链抗体噬菌体载体的构建材 料新鲜分离的小鼠脾脏或者 IO7 杂 交 瘤 细 胞(单 元 1*3)R N A 提取试剂R T -P C R 试剂D E P C 水寡 核 苷 酸 引 物(表 14. 3.1)DNA marker琼脂糖胶回收试剂盒(Qiaquick G

用噬菌粒载体制备单链DNA

            实验方法原理 噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外,这些质粒通常是高拷贝数的,并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白,但含有全部的顺式作用序列,该作用是病毒 DNA

用噬菌粒载体制备单链DNA

噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外,这些质粒通常是高拷贝数的,并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白,但含有全部的顺式作用序列,该作用是病毒 DNA 合成起始和结束及噬菌体颗粒的形态发生必不可少的。本实验来源「分子克隆实验指

用噬菌粒载体制备单链DNA

实验方法原理 噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外,这些质粒通常是高拷贝数的,并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白,但含有全部的顺式作用序列,该作用是病毒 DNA 合成起始和结束及噬菌体颗粒的形态发生必不可少的。实验材料

单链丝状噬菌体展示系统、λ噬茵体展示系统和T4噬茵体...

单链丝状噬菌体展示系统、λ噬茵体展示系统和T4噬茵体展示系统一、单链丝状噬茁体展示系统 1、pIII展示系统及噬苗体抗体 丝状噬茵体是单链DNA病毒,pIII是病毒的次要外完蛋白(minor coatprotein)、位于病毒颗粒的一端,每个病毒颗粒都有3—5个拷贝pIII蛋白,pIII有两个位

抗单链DNA抗体的概述

  抗ssDNA是抗DNA抗体中临床意义和重要性都不如抗dsDNA的一种,DNA是一个大分子的复合物,由两条核苷酸链形成的双螺旋结构。加热时碱基间的氢键断裂,DNA变性产生ssDNA。抗ssDNA的反应位点主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶构成的碱基。

抗单链DNA(ssDNA)抗体检测的介绍

  抗单链DNA(ssDNA)是抗DNA抗体中临床意义和重要性都不如抗dsDNA的一种,DNA是一个大分子的复合物,由两条核苷酸链形成的双螺旋结构。加热时碱基间的氢键断裂,DNA变性产生ssDNA。抗ssDNA的反应位点主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶构成的碱基。

分子克隆常用载体(质粒、单链丝状噬菌体和噬粒)

DNA 片段的克隆需要合适的载体,载体或是质粒,或是噬菌体,或是病毒,通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件:一是该载体在细胞内必须能自主复制,即必须具备复制原点;二是该载体必须具备适合的酶切位点,且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条,保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获

流-式-细-胞-仪-检-测-全-血-的-人-淋-巴-细-胞

实验步骤基本方案材 料(打 V 项 目 见 附 录 1)全血,通 常 用 E D T A 抗凝P B S ,有 或 无 0.1% (m /V ) 叠氮钠,过滤除菌单 克 隆 抗 体(标记的,未标记的或生物素化的),通过滴定确定最佳工作浓度间 标 二 抗(仅用于未标记的一抗)F T T C 标记的链霉

自噬体的自噬发生条件

自噬体(autophgosome)自噬溶酶体(autolysosome)当自噬体与溶酶体融合后,形成自噬溶酶体。自噬性溶酶体是一种自体吞噬泡, 作用底物是内源性的,即细胞内的蜕变、破损的某些细胞器或局部细胞质。这种溶酶体广泛存在于正常的细胞内,在细胞内起“清道夫”作用,作为细胞内细胞器和其它结构自然

Science:重大进展!开发出单链DNA/RNA折纸术

  DNA折纸术科学家们正在梦想着各种各样的比人的头发小一千倍的形状,并希望这些形状有朝一日引发计算、电子学和医学变革。  如今,在一项新的研究中,来自美国亚利桑那州立大学和哈佛大学的研究人员在DNA纳米技术上取得一项重大的新进展。他们开发出的一种被称作单链折纸术(single-stranded o

抗单链(变性)DNA抗体检测的临床意义

  抗ssDNA的测定结果缺乏疾病特异性,除SLE患者有较高检出率(50%~60%)外,其他风湿病如混合性结缔组织病(MCTD)、药物诱导的狼疮、硬皮病、皮肌炎、干燥综合征,类风湿性关节炎等也都有10%~70%的检出率。当抗dsDNA阴性而SLE的诊断尚未明确时,高滴度抗ssDNA的存在对诊断也有参

抗单链DNA(ssDNA)抗体检测的临床意义

  抗ssDNA的测定结果缺乏疾病特异性,除SLE患者有较高检出率(50%~60%)外,其他风湿病如混合性结缔组织病(mixel connective tissue disease,MCTD)、药物诱导的狼疮、硬皮病、皮肌炎、干燥综合征,类风湿性关节炎等也都有10%~70%的检出率。当抗dsDNA阴

免疫学实验抗单链DNA(ssDNA)抗体介绍

  抗单链DNA(ssDNA)抗体介绍:  抗ssDNA是抗DNA抗体中临床意义和重要性都不如抗dsDNA的一种,DNA是一个大分子的复合物,由两条核苷酸链形成的双螺旋结构。加热时碱基间的氢键断裂,DNA变性产生ssDNA。抗ssDNA的反应位点主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶构成的碱基。  抗单链D

临床化验单详解抗双链DNA抗体介绍

抗双链DNA抗体介绍: 抗双链DNA抗体(抗ds DNA)是抗DNA抗体中的一种。其反应位点位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。抗ds DNA主要出现于SLE患者的血清中,对SLE患者的组织器官损伤有致病作用。在SLE患者血循环中,大分子的DNA浓度显著高于正常人,DNA还可与多种器官的微血管结构包括肾小

T-C-R-库-的-抗-原-谱-/-免-疫-扫-描-技-术-分-析

实验步骤基 本 方 案 1 人 和 小 鼠TCR受体库多样性的免疫扫描技术分析材 料展

关于噬菌粒的简介

  噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。它是包含了丝状噬菌体大间隔区域的质粒,是一种双链质粒,含噬菌体来源的复制子,在细菌的细胞中出现有辅助噬菌体的情况下,可被诱导成单链DNA噬菌粒,同时具有噬菌体和质粒的特征,可以像噬菌体或质粒一

定-量-PCR-技-术-简-介

聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是微量核酸扩增的有效工具,由于其灵敏、特异、快速等优点,在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技术的发展,特别是病毒或肿瘤的治疗监测、疾病的诊断、机体基因表达调控方面,不仅需要检测其存在是否

临床化学检查方法介绍抗单链DNA(ssDNA)抗体介绍

抗单链DNA(ssDNA)抗体介绍:  抗ssDNA是抗DNA抗体中临床意义和重要性都不如抗dsDNA的一种,DNA是一个大分子的复合物,由两条核苷酸链形成的双螺旋结构。加热时碱基间的氢键断裂,DNA变性产生ssDNA。抗ssDNA的反应位点主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶构成的碱基。抗单链DNA(s

干细胞的鉴定实验——免-疫-电-镜-胶-体-金-标-记-技-术

实验步骤免 疫 电 镜 胶 体 金 标 记 技 术免疫电镜技术是利用抗原抗体特异性结合的原理,在细胞超微结构水平上定位、定性和定量,原位显示抗原大分子的技术。 1971 年 Faulk 等将胶体金标记抗体技术应用到电镜中,开始了免疫电镜胶体金标记技术。该技术的优点是:胶体金颗粒致密,易于辨认 ;定位

自[体吞]噬的概念

中文名称自[体吞]噬英文名称autophagy定  义细胞自身一部分内容物被次级溶酶体消化的过程。消化产物可作为营养物再利用,或用于细胞分化中的细胞结构重建。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生理(二级学科)

Biomaterials:抗Endoglin单链抗体修饰特定基因纳米脂质体

  广西医科大学~国家生物靶向诊治国际联合研究中心赵永祥教授团队证实:利用抗Endoglin单链抗体修饰负载a1,3GT基因的纳米脂质体,将a1,3GT靶向转染到肿瘤新生血管内皮细胞,诱导表达aGal,增强其抗原性,诱发超急性排斥反应,对肺癌具有很好的抑制作用,且生物安全性好,这一策略为癌症治疗提供

关于噬菌粒的特征介绍

  1、双链DNA既稳定又高产,具有常规质粒的特征;  2、免除了将外缘DNA片段从质粒亚克隆于噬菌体载体这一繁琐又费时的步骤;  3、由于载体足够小,故可得到长达10kb的外源DNA区段的单链。

关于噬菌粒的基本介绍

  噬菌粒(phagemid)是带有丝状噬菌体复制起始点的质粒。  噬菌粒本身不含噬菌体蛋白编码基因,在导入大肠杆菌后不产生子代噬菌体,感染时要用辅助噬菌体,辅助噬菌体编码的噬菌体蛋白可将单链噬菌粒DNA 包装成噬菌体病毒颗粒释放出来,能再次感染大肠杆菌而繁殖。

pⅧ噬菌粒库的构建

实验概要本实验构建了pⅧ噬菌粒库,主要包括:载体的准备,插入片段的准备,连接插入片段与BstⅪ消化的p8V5载体及扩增与储存。主要试剂p8V5噬菌粒载体(AHymaxlnc)LB氨苄青霉素培养基(1%蛋白胨,0,5%酵母提取物, 0.5% NaCl,100ug/m1氨苄青霉素)BstⅪ限制性内切酶(

单-克-隆-抗-体-的-制-备——有限稀释克隆法

实验步骤 附 加 材 料(其他材料见基本方案 2)候 选 杂 交 瘤 系(见辅助方案 2)克隆和扩增用培养基(见辅助方案 4)微 孔 板 观 察 镜(由 Flow 实验室或 Dynatech 公司提供),可选的1.重悬候选杂交瘤所在孔中的细胞(见 辅 助 方 案 2 , 步 骤 4),用血细胞计数器

筛选pⅧ噬菌粒库

实验概要大量的方法已经被设计用于筛选大规模的噬菌体肽库。其中最简单的形式就是使用直接吸附的方式将靶分子固定于一个固体支持物上,然后使其接触到噬菌体库。那些不能与之结合的噬菌体在一系列洗涤的过程中将会被除去,而可以结合的噬菌体克隆将在酸性洗脱后被重新获得。主要试剂1. 磷酸盐缓冲液2. PBS/0.1

BSA、封闭血清与Fab单链二抗在封闭实验中的应用

免疫学实验中,尝尝会出现高背景值,影响实验结果的检测。这是因为在使用相关免疫学试剂时,蛋白与未吸附的固体载相结合,发生非特异性结合造成的。免疫学实验中常通过封闭试剂来封闭这样的固相载体部位,以减少或消除非特异性结合背景的影响。常见的封闭剂包括脱脂奶粉、牛血清白蛋白BSA、动物血清和Fab片段单链二抗

单链互补DNA的定义

中文名称单链互补DNA英文名称single-strand cDNA;sscDNA定  义在逆转录酶催化下,以信使核糖核酸(mRNA)为模板合成与mRNA序列互补的单链DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

单链DNA的结构特点

单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA,这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。