低丰度核酸反转录及扩增实验——一步法
实验材料核酸试剂、试剂盒dNTPMnCl2MgCl2BSArTth DNA聚合酶仪器、耗材水浴锅培养箱实验步骤1. 用过氧化物酶，蛋白酶K和DNA酶预处理载玻片。2. 配置如下一步反应体系（总体积100 μl）（1）0.5 μl 100 μmol/l 正向引物（终浓度0.5 μmol/l）（2）0.5 μl 100 μmol/l 反向引物（终浓度0.5 μmol/l）（3）6 μl 3 mmol/l 4dNTP混合物（终浓度0.12 mmol/l）（4）2 μl 10 mmol/l MnCl2（终浓度0.2 mmol/l）（5）10 μl 25 mmol/l MgCl2（终浓度2.5 mmol/l）（6）2 μl 10×rTth 转录缓冲液（终浓度0.2×）（7）8 μl 10×螯合缓冲液（终浓度0.8×）（8）10 μl 1.7 mg/ml BSA（终浓度0.17 mg/ml）（9）2 μl 2.5 U......阅读全文
低丰度核酸反转录及扩增实验
实验材料 核酸试剂、试剂盒 dNTPMnCl2MgCl2BSArTth DNA聚合酶仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 用过氧化物酶，蛋白酶K和DNA酶预处理载玻片。2. 配置如下一步反应体系（总体积100 μl）（1）0.5 μl 100 μmol/l 正向引物（终浓度0.5 μmol/l
低丰度核酸反转录及扩增实验——一步法
实验材料核酸试剂、试剂盒dNTPMnCl2MgCl2BSArTth DNA聚合酶仪器、耗材水浴锅培养箱实验步骤1. 用过氧化物酶，蛋白酶K和DNA酶预处理载玻片。2. 配置如下一步反应体系（总体积100 μl）（1）0.5 μl 100 μmol/l 正向引物（终浓度0.5 μmol/l）（2）
低丰度核酸定量试剂盒介绍
从不同的生物或临床样本中可以提取的DNA或RNA数量差异很大。例如，虽然少量的DNA或RNA可以很容易地从过量的组织和细胞中纯化（例如从几毫克的组织中），但许多液体活检样本可能会产生极少量的DNA或RNA。事实上，每100μL的尿液或血浆等样品可能产生1-100 ng或更少的DNA或RNA。测得
核酸扩增—转录介导的扩增技术(TMA)
TMA是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温条件下来扩增RNA或DNA的技术，其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子，被反转录酶的RNase H活性水解形成单链RNA，然后与引物2退火，通过反转录合成双链DNA，在T7 RN
探索低丰度蛋白质
生物样品中由于高丰度蛋白质（例如，血清或血浆中的白蛋白或免疫球蛋白）的存在，而会使低丰度蛋白质的检测变得极具挑战性。ProteoMiner 低丰度蛋白富集系统是一种新型的样品制备手段，它能极为有效地减少复杂生物样品中蛋白浓度的动态范围。ProteoMiner 系统： • 采用了组合的六肽文库方法，
RTPCR的定义与检测方法
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火
RTPCR技术的定义和检测方法
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA 模板。 RNA扩增包括两个步骤：在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引
什么是RTPCR，RTPCR的定义与检测方法？
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火
提高RTPCR的灵敏度和产物长度
RT－PCR 已经成为研究者确定感兴趣的器官、组织或细胞中mRNA 转录本出现、结构和表达水平的基本方法。RT－PCR的基本步骤包括：首先对样品中出现的所有mRNA 合成一个cDNA拷贝，接着扩增感兴趣的基因。因为两个步骤中使用的反应缓冲液不能兼容，所以这两个步骤（RT 和PCR）通常分别进行。即使
逆转录PCR概念及方法介绍
逆转录 PCRRT-PCR(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一种 RNA 逆转录和 PCR 结合起来建立的 RNA 的聚合酶链反应。RT-PCR 使 RNA 检测的敏感性提高了几个数量级[较 Northern 印迹杂交敏感(3～6)×103倍],也使一些极微量 R
增加RTPCR灵敏度
分离高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般的RNA纯化方法是使用异硫氰酸胍／酸性酚的一步法。Trizol试剂法（见下图）将一步法加以提高，可以从多种
核酸检测是什么流程？
HIV核酸定性检测技术，其检测过程分为核酸提取、逆转录合成cDNA、PCR扩增反应、扩增产物定性分和结果判定和完成报告单。 实验室检测具体步骤如下： 1. 核酸提取 使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA
揭秘！核酸检测是什么流程
HIV核酸定性检测技术，其检测过程分为核酸提取、逆转录合成cDNA、PCR扩增反应、扩增产物定性分和结果判定和完成报告单。 核酸检测具体流程如下： 1. 核酸提取 使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应
一文揭秘核酸检测完整流程
HIV核酸定性检测技术，其检测过程分为核酸提取、逆转录合成cDNA、PCR扩增反应、扩增产物定性分和结果判定和完成报告单。 核酸检测具体流程如下： 1. 核酸提取 使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应
miRNA－qPCR－Detection－Primer－Set（miRNA检测试剂盒）实验说明
一、概述 1、介绍 microRNA(miRNA)是一类有大约22 个核苷酸组成的非编码小分子RNA，其广泛存在于真核生物中。miRNA 在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此，对miRNA 的检测方法主要有Northe
miRNA－qPCR－Detection－Primer－Set（miRNA检测试剂盒）实验说明
一、概述1、介绍microRNA(miRNA)是一类有大约22 个核苷酸组成的非编码小分子RNA，其广泛存在于真核生物中。miRNA 在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此，对miRNA 的检测方法主要有Northern B
核酸检验方法
核酸检测具体流程如下：1. 核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。2. 逆转录合成cDNA逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs
PCR常见问题及回答
PCR常见问题及回答 1. cDNA产量的很低 可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl 2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅 *zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系
核酸扩增—链置换扩增技术(SDA)
SDA是一种基于酶促反应的DNA体外等温扩增技术，采用标记的两种不同荧光基团的探针。在SDA过程中，该探针被掺入到双链扩增产物中，由限制内切酶的酶切使淬灭基团与荧光基团分开，从而释放荧光，用荧光偏振检测法定量检测。SDA较之PCR有更高的扩增效率，耗时仅30min。其基本系统包括一种限制性核酸内
传代细胞－PCR常见问题及回答
1. cDNA产量的很低 可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl 2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅 *zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应
PCR实验操作常见问题及解决方法（一）
cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反应起始
提高RTPCR的灵敏度与产物长度
摘要RT－PCR 已经成为研究者确定感兴趣的器官、组织或细胞中mRNA 转录本出现、结构和表达水平的基本方法。RT－PCR的基本步骤包括：首先对样品中出现的所有mRNA 合成一个cDNA拷贝，接着扩增感兴趣的基因。因为两个步骤中使用的反应缓冲液不能兼容，所以这两个步骤（RT 和PCR）通常分别进行。
低丰度靶标染色神器：TSA与PSA的使用方法
今天，百萤为大家带来的是用于细胞和组织中低丰度靶标的高分辨率成像技术。TSA/PSA是一种成熟的细胞信号放大技术，当TSA/PSA与我们光稳定性、水溶性卓越的iFluor染料结合后，产生的荧光信号具有比传统免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光方法产生的信号更高的精确度和灵敏度。PSA是美国AAT B
核酸扩增—多重PCR
多重PCR是在单一PCR基础上改进和发展起来的新技术，是在同一PCR体系中加入多对特异性引物，一次扩增多个DNA片断，实现多个基因序列或多种病原体的同时检出。多重PCR降低了检测成本，减少了工作量，提高了检测效率，并且可以解决淋球菌、衣原体等混合感染者临床症状不明显，检出率低等问题。淋病患者往往
丰度怎么算
丰度，是指一种化学元素在某个自然体中的重量占这个自然体总重量的相对份额（如百分数）。丰度表示方法主要分为重量丰度、原子丰度和相对丰度。绝对丰度：指某一种同位素在所有稳定同位素总量中的相对份额，常以该同位素与1H(取1H=1012)或28Si(28Si=106)的比值表示。这种丰度一般是由太阳光谱和陨
元素丰度组成
（1）克拉克值：是地壳中元素的重量百分数的丰度单位。（2）区域克拉克值：是指地壳不同构造单元中元素的丰度值，如克拉通地壳元素丰度值。（3）丰度系数 [1] ：是指某一自然体的元素丰度与另一个可作为背景的自然体的元素丰度的比值。例：以地球丰度为背境，则地壳中该元素的丰度系数定义为：K=地壳丰度/地球
恒温核酸扩增技术的扩增速度
由于恒温核酸扩增只需要在一个温度下进行，相比较于PCR不同温度之间的循环，恒温扩增不需要反复的升温降温过程，有些恒温扩增的速度是快于PCR的扩增速度的。例如：环介导恒温核酸扩增（LAMP），重组聚合酶扩增法（RPA）以及切刻内切酶恒温扩增（NEAR）。目前英国公司optigene已经成功的改造了
核酸扩增—环介导的等温扩增法
2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Research（核酸研究）杂志上公开了一种新的适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术，即环介导等温扩增技术，英文名称为“Loop-mediated isothermal amplification"，受到了世卫组织、各国学者和相关政府部门的
PCR仪常见问题及回答，值得一看！
一、遇到的问题 1. cDNA产量的很低 可能的原因： RNA模板质量低 对mRNA浓度估计过高 反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足 同位素磷32过期 反应体积过大，不应超过50μL 2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅 最常见的原因在于您的反应体系是PCR的
关于单纯疱疹病毒的核酸扩增实验介绍
单纯疱疹病毒的核酸扩增实验法（NAATs），已成为确认疱疹感染的高灵敏度方法，临床标本包括生殖器溃疡、黏膜表皮部位及脑脊髓液等标本。PCR方法对无症状HSV病毒播散的检测特别有用。HSV NAATs扩增检测最大的限制是检验的费用。此类特别的样本要用涤纶（Dacron）擦拭棒收取并置于病毒传送培养