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用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验2

虫媒病毒在鸡胚成纤维细胞中的空斑形成单位试验实验方法原理病毒常杀死被病毒感染的细胞 即产生致细胞病变作用。用只染活细胞(如中性红)或只染死细胞(如台盼兰)的染料对单层细胞染色以检测空斑。也可以使用活性染料溴化二苯基四氮唑(MTT) 进行染色,使用 MTT 的优点是黄色的 MTT 能将活细胞染成深蓝色,由于反差明显,计数时不必去除含酚红的凝胶层,且在感染早期即能观察到开始形成的小空斑,可用于分离被病毒转化或对病毒抵抗的细胞。实验材料鸡胚成纤维细胞试剂、试剂盒2%~5%小牛血清的 0. 5% 水解乳蛋白的 Hanks 稀释液仪器、耗材培养瓶co2培养箱实验步骤(1) 选择经 24h~48 h 培养的 4X106/ ml 鸡胚成纤维细胞若干瓶。(2) 将细胞瓶按病毒稀释度分组标记,每个稀释度为 2 瓶,对照 2 瓶。(3) 配制含 2%~5%小牛血清的 0. 5% 水解乳蛋白......阅读全文

用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验2

虫媒病毒在鸡胚成纤维细胞中的空斑形成单位试验实验方法原理病毒常杀死被病毒感染的细胞 即产生致细胞病变作用。用只染活细胞(如中性红)或只染死细胞(如台盼兰)的染料对单层细胞染色以检测空斑。也可以使用活性染料溴化二苯基四氮唑(MTT) 进行染色,使用 MTT 的优点是黄色的 MTT 能将活细胞染成深蓝色

用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验_蚀斑试验法

实验方法原理空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验,是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合,当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时,会造成细胞被溶解而形成空斑,每个空斑系由一个病毒颗粒所造成,计算空斑数目再乘以稀释倍数,即可得知原来的病毒感染单位

用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验

实验方法原理 空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验,是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合,当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时,会造成细胞被溶解而形成空斑,每个空斑系由一个病毒颗粒所造成,计算空斑数目再乘以稀释倍数,即可得知原来的病毒感

用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验4

在细胞培养板内做病毒空斑形成单位试验 实验材料 病毒 试剂、试剂盒 95% 酒精胰酶含 5%小牛血清的 Eagle 仪器、耗材 细胞培养板 实验步骤 (1) 用细胞培养板 (6孔),若用旧板,洗净后浸于 95% 酒精中5 min, 再用紫外

用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验3

用传代细胞系平皿法测量病毒空斑形成单位实验材料病毒细胞系试剂、试剂盒含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培养液仪器、耗材培养皿实验步骤(1) 将单层细胞 (2X 106/ml, 6 ml)培养在直径 60 mm 的平皿上,生长液为含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培养液,加

病毒蚀斑技术(2)

(三) 操作实例1.赤羽病病毒(AKV)的滴定或纯化 (1) 于55mm直径的灭菌塑料培养皿中培养绿猴肾细胞(Vero),使形成单层。细胞培养时间约3-4天,接种量约为2 000 000/ml个细胞。选取单层细胞全部覆盖,不留有空洞的培养皿用作试验。 (2) 用细胞培养液对AKV病毒作10倍

杆状病毒储液制备实验——噬斑试验测定滴度

实验材料对数生长期单层培养的 Sf 9 细胞试剂、试剂盒杆状病毒储液昆虫细胞培养液仪器、耗材琼脂糖顶层覆盖物台盼蓝顶层覆盖物(选用)60 mm 组织培养皿27℃ 培养箱1.5 ml 带螺口盖的冻存管实验步骤1. 用含 10% 胎牛血清的 TNM-FH 培养液稀释处于对数生长期的 Sf 9 细胞至约

病毒蚀斑技术(1)

1952年,Dulbecco把噬菌体空斑技术应用于动物病毒学,从而使病毒蚀斑技术 (Virus plaque formation)成为许多病毒的滴定和研究方法。(一) 原理 病毒感染细胞后,由于固体介质的限制,释放的病毒只能由最初感染的细胞向周边扩展。经过几个增殖周期,便形成一个局限性病变细胞区

病毒蚀斑技术介绍

1952年,Dulbecco把噬菌体空斑技术应用于动物病毒学,从而使病毒蚀斑技术(Virus plaque formation)成为许多病毒的滴定和研究方法。 1、原理 病毒感染细胞后,由于固体介质的限制,释放的病毒只能由最初感染的细胞向周边扩展。经过几个增殖周期,便形成一个局限性病变细胞区,此

重组杆状病毒的纯化实验

实验材料 杆状病毒 试剂、试剂盒 琼脂牛血清 仪器、耗材 培养瓶冻存管 实验步骤 1.  制备病毒上清的系列稀释液,该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360β-gal DNA的细胞。在含150 μg/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。   2.  当蚀斑