酵母细胞破碎实验——玻璃珠破碎法

实验材料酵母菌试剂、试剂盒玻璃珠破菌缓冲液仪器、耗材玻璃珠拍打器实验步骤1. 培养并收集酵母菌细胞,在酵母消解酶缓冲液重悬菌体沉淀之前,测定压紧细胞的体积,以下所有步骤均在4℃进行。2. 用1体积的玻璃珠破菌缓冲液重悬细胞。 3. 用2体积的玻璃珠破菌缓沖液与细胞混合,加4体积冰冷的酸洗玻璃珠。 4a. 当压紧的细胞休积<10 ml,将细胞悬液转移至合适大小的带螺口的离心管中(悬液占离心管≤60%~70%的容积),于4℃以最大速度下振荡30~60 s,将管置于冰上放置1~2 min,重复3~5次,在显微镜下检査破细胞的程度,继续步骤5。4b. 当压紧的细胞体积>10 ml,将细胞悬液转移到合适大小的玻璃珠搅拌容器中(建议用导热性能好的不锈钢材料)并加玻璃珠破菌缓冲液至容器的边缘,但加到容器中的缓冲液不超过1个细胞悬液的体积。装好搅拌杆和螺盖,确保将容......阅读全文

酵母细胞破碎实验——玻璃珠破碎法

实验材料酵母菌试剂、试剂盒玻璃珠破菌缓冲液仪器、耗材玻璃珠拍打器实验步骤1.  培养并收集酵母菌细胞,在酵母消解酶缓冲液重悬菌体沉淀之前,测定压紧细胞的体积,以下所有步骤均在4℃进行。2.  用1体积的玻璃珠破菌缓冲液重悬细胞。 3.  用2体积的玻璃珠破菌缓沖液与细胞混合,加4体积冰冷的酸洗玻璃珠

酵母细胞破碎实验——液氮破碎法

实验材料酵母菌试剂、试剂盒液氮仪器、耗材塑料烧杯混合器实验步骤1.  酵母在YPD(或选择性)培养基中剧烈振荡下培养至对数中期。离心,弃上清,市售酵母糕可以用来代替培养细胞。2.  在旋涡混合器上振荡细胞沉淀,使其形成粘稠的细胞糊,必要时,加入最少量的冰水使细胞糊能够倒出或舀出,如果使用酵母糕,用等

酵母细胞破碎实验

实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 玻璃珠破菌缓冲液仪器、耗材 玻璃珠拍打器实验步骤 1.  培养并收集酵母菌细胞,在酵母消解酶缓冲液重悬菌体沉淀之前,测定压紧细胞的体积,以下所有步骤均在4℃进行。2.  用1体积的玻璃珠破菌缓冲液重悬细胞。3.  用2体积的玻璃珠破菌缓沖液与细胞混合,加4体积冰冷的酸洗

酵母菌RNA制备实验—玻璃珠法

实验材料酵母菌试剂、试剂盒酚氯仿异戊醇仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤1.  培养并收集酵母菌细胞,冷冻细胞沉淀。2.  用300 μl RNA缓冲液中重悬细胞沉淀。 3.  加1体积冷的酸洗玻璃珠(体积与约200 μl 水相等)、300 μl 的用RNA缓冲液平衡的25:24 :1酚/

微生物学技术:酵母细胞破碎实验

标签: 酵母 细胞 破碎细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质的基础。 结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展,以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。实验方法玻璃珠破碎法液氮破碎法实验材料酵母菌试剂、

细胞破碎和蛋白质溶解实验_​超声法

实验方法原理输入高能超声波可以破碎细胞,其机理可能与强声波作用溶液时,气泡产生、长大和破碎的空化现象有关。空化现象引起的冲击波和剪切力使细胞裂解。超声破碎的效率取决于声频、声能、处理时间、细胞浓度及细胞类型等。实验材料细胞混悬液试剂、试剂盒缓冲液仪器、耗材超声波细胞裂解仪实验步骤1. 清洗后的组织用

细胞破碎和蛋白质溶解实验_匀浆法

为了纯化细胞蛋白质,采用有效的方法进行细胞破碎和固液分离是必要的。它是全过程的第一步,通常是将处于细胞不同位置的待纯化蛋白释放出来,溶入已知成分的溶液内。该步骤是目的蛋白初级分离纯化阶段的重要环节,它直接影响产物的回收率,也可能影响产物的纯度。实验方法原理通过固体剪切力破碎组织和细胞,释放蛋白进入溶

细胞破碎和蛋白质溶解实验_​研磨法

实验方法原理研磨是破碎单一细胞的有效措施。借助研磨中磨料和细胞间的剪切及碰撞作用破碎细胞。常 用的磨料为沙子、氧化铝在研钵内样品与磨料被研磨成厚糊状。一次破碎的细胞量湿重可达 30 g。实验材料细菌或酵母或一些植物组织试剂、试剂盒石英砂或氧化铝缓冲液仪器、耗材高速珠磨匀浆器实验步骤1. 加 20 g

细胞破碎仪的机械破碎技术

细胞破碎仪的破碎技术是怎样的?在生物产物的分离提取中,如果目标物质为胞外产物(如霉菌产生的糖化酶等),其提取过程较简单,只需直接进行固液分离,获得澄清的滤液,再进行分离纯化操作;如果目标物质为胞内产物或多细胞生物组织中的各种生物分子(如碱性磷酸酶等胞内酶、部分外源基因表达产业或植物细胞产物等),都需

细胞破碎仪

细胞破碎仪 仪器主要使用范围:生物学、微生物学、动物学、农学、制药等领域。教学、科研、生产、生物化学、药物化学、表面化学。随着重组DNA技术得到广泛应用以来,很多基因工程产物都是胞内物质,必须将细胞破壁,使产物得以释放,才能进一步提取,因此细胞破碎是提取胞内产物的关键步骤,破碎方法的得当与否,直接影

细胞破碎技术

细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质(产品)的基础。 结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展,以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。细胞破碎阻力  细菌   几乎所有细菌的细胞壁都是由肽聚糖(pep

细胞的破碎

1、高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。2、玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于

细胞的破碎

1、高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。2、玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于

细胞破碎介绍

定义:细胞破碎就是采用一定的方法,在一定程度上破坏细胞壁和细胞膜,设法使胞内产物最大程度地释放到液相中,破碎后的细胞浆液经固液分离除去细胞碎片后,再采用不同的分离手段进一步纯化.1细胞壁的组成和结构微生物细胞壁的化学组成和结构细菌,肽聚糖的网状结构酵母菌:葡聚糖,甘露聚糖,蛋白质真菌:细胞壁更厚植物

细胞破碎和蛋白质溶解实验_​酶溶法

实验方法原理酶溶法就是用生物酶将细胞壁和细胞膜消化溶解的方法。因此利用此方法处理细胞必须根据细胞的结构和化学组成选择适当的酶。常用的有溶菌酶、β-1,3-葡聚糖酶、β-1,6-葡聚糖酶、蛋白酶、甘露糖酶、糖苷酶、肽链内切酶、壳多糖酶等、细菌主要用溶菌酶处理,酵母需要用几种酶进行复合处理。使用溶酶系统

细胞破碎机如何满足细胞破碎的需求?

 细胞破碎机的原理是利用破碎罐在摆臂下的驱动器功效来达到的水平方向作弧形晃动,使得破碎罐里的原材料遭受研磨球的惯性力撞击力和与破碎罐进行高速运动相碰撞的破碎剪切应力,进而做到样本的破碎和破碎的实际效果。研磨槽的髙速运动和磨球在磨槽中的累加能够促使试品彻底混和。在样品容器中放入研磨珠,利用容器的高速自

细胞破碎及超声波细胞破碎仪应用

  细胞破碎是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质(产品)的基础。结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展,以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。   但是由于细菌、酵母、真菌、植物细胞壁的组成成分不同,且同类细

细胞破碎及超声波细胞破碎仪应用

  细胞破碎是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质(产品)的基础。结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展,以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。   但是由于细菌、酵母、真菌、植物细胞壁的组成成分不同,且同类细

超声波破碎细胞实验分析

  超声波破碎仪主要用途:  超声波破碎仪能用于粉碎动、植物细胞、细菌、牙孢或组织。分散稀土和各类无机矿物粉。  超声波破碎仪是加速化学、生物学、物理学的反应速度和加速液体脱气的理想装置。  超声波破碎仪能配制近乎微米的百分之一大小的乳胶体;匀化“难混溶”的混合液;聚合一些物质,析出另一些物质。  

关于细胞破碎技术机械法的介绍

  1、高压匀浆破碎法(homogenization)  高压匀浆器是常用的设备,它由可产生高压的正向排代泵(positive displacenemt pump)和排出阀(discharge valve)组成,排出阀具有狭窄的小孔,其大小可以调节。细胞浆液通过止逆阀进入泵体内,在高压下迫使其在排出

关于超声波细胞破碎仪破碎细菌

细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式,一种是在强启动子条件下的高效表达,由于蛋白的过度表达,使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲,以固体颗粒的形式堆积于胞间质中,这就是所说的包涵体,另外一种是间质内的可溶性表达,即可以发生正常折叠,具有生物活性。一般情况下,细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包

关于超声波细胞破碎仪破碎细菌

细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式,一种是在强启动子条件下的高效表达,由于蛋白的过度表达,使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲,以固体颗粒的形式堆积于胞间质中,这就是所说的包涵体,另外一种是间质内的可溶性表达,即可以发生正常折叠,具有生物活性。一般情况下,细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包

细胞破碎及超声波细胞破碎仪应用(二)

三、超声波应用1、超声波提取生物纳米(超声波化学合成法)超声波化学反应中,起关键作用的是声波的空化效应,在超声波的辐照过程中,在液体里将发生空化气泡的形成,长大和崩灭,当空化气泡崩灭时产生一个覆盖着的强压力脉冲,产生许多独特的性质,例如产生高达5000K的高温,大于200Mpa的压力,这就是超声波化

细胞破碎及超声波细胞破碎仪应用(一)

细胞破碎是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质(产品)的基础。结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展,以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。但是由于细菌、酵母、真菌、植物细胞壁的组成成分不同,且同类细胞结成的网状

细胞破碎和蛋白质溶解实验_​化学渗透法

实验方法原理有些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性剂(SDS、Triton X-100)、金属整合剂(EDTA) 、变性剂(盐酸胍、脲)等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性,使内含物有选择地渗透出来。这种处理方式就是化学渗透法。本文仅以表面活性剂 Triton X-100 为例简要介绍如下。

细胞破碎和蛋白质溶解实验_​高压匀浆法

实验方法原理细胞悬液从高压室的环状隙高速喷射到静止的撞击环上,被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切、碰撞及高压到常压的变化,从而破碎释放内含物。增加压力或增加破碎次数都能提高破碎效率,但压力增加到一定程度零部件磨损较大。通常撞击环较易磨损应定期更换。为防止污染,使用前后高压室至

细胞破碎和蛋白质溶解实验_​(高速)珠磨法

实验方法原理该法应视为研磨法的扩展。它用玻璃珠替代磨料。小量样品(湿重不超过 3 g)可在试管内进行,大量样品需使用特制的高速珠磨机。实验材料酵母试剂、试剂盒缓冲液仪器、耗材高速珠磨机实验步骤1. 0.1~3 g 湿重细胞混悬在等体积缓冲液内。容器建议选用结实的聚乙烯试管;2. 每克湿重细胞加入 1

细胞破碎的概况

  细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质(产品)的基础。 结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展,蛋白质可以大规模生产。

高压细胞破碎仪

  是RC-100的扩展机型,可用于蛋白质研究,核酸萃取,破碎各种原核、真核细胞。它能快速、有效、温和地破碎细胞膜、细胞壁。与机械或超声破碎相比,压力诱导破碎具有破碎率高、一致性好、受力均匀、损伤小等优势

高压细胞破碎仪

主要特点1. 破碎阀的设计独特, 同等操作压力下,破碎率zui高 2. 生物工程、基因工程、分子生物学研究生产单位中得到广泛使用。同时可破碎酵母,细菌,真菌等,破碎率95%以上 3. 尼鲁高压细胞破碎仪的破碎阀材料:陶瓷或碳化钨,使用寿命延长3倍以上。 4. 采用电机驱动,而非气动方式,避免了空气经