裸眼筛选重组杆状病毒实验

杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒,病毒粒子呈杆状,基因组为双链环状DNA分子,DNA以超螺旋形式压缩包装在杆状衣壳内,大小在90~180 Kb 之间。目前杆状病毒作为高效、安全的无公害生物虫剂广泛应用于害虫防治。实验材料杆状病毒试剂、试剂盒琼脂糖仪器、耗材解剖显微镜倒置显微镜实验步骤解剖显微镜下筛选 1. 倒转蚀斑平皿,使其处于显微镜的黑色背景下,以锐角向平皿照射一束亮光。2. 检查野生型病毒感染的细胞中含有包涵体的蚀斑,这种蚀斑看上去折光性强,带有轻微的黄色。3. 检查β-gal 重组病毒感染的细胞中不含包涵体的蚀斑,其颜色呈灰色。4. 圈出平皿中覆盖蚀斑的区域,以400x的倍数在倒置显微镜下检查圈出的蚀斑,以锻炼用裸眼分辨出每一蚀斑形态上的细微之处。 用倒置光学显微镜筛选 1. 将蚀斑平皿右侧稍抬起向上,以30x和......阅读全文

裸眼筛选重组杆状病毒实验

杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒,病毒粒子呈杆状,基因组为双链环状DNA分子,DNA以超螺旋形式压缩包装在杆状衣壳内,大小在90~180 Kb 之间。目前杆状病毒作为高效、安全的无公害生物虫剂广泛应用于害虫防治。 实验材料 杆状病毒 试剂、试剂盒

裸眼筛选重组杆状病毒实验

实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂糖仪器、耗材 解剖显微镜倒置显微镜实验步骤 解剖显微镜下筛选 1.  倒转蚀斑平皿,使其处于显微镜的黑色背景下,以锐角向平皿照射一束亮光。2.  检查野生型病毒感染的细胞中含有包涵体的蚀斑,这种蚀斑看上去折光性强,带有轻微的黄色。3.  检查β-gal 重组病毒感

重组杆状病毒的纯化实验

实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂牛血清仪器、耗材 培养瓶冻存管实验步骤 1.  制备病毒上清的系列稀释液,该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360β-gal DNA的细胞。在含150 μg/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。 2.  当蚀斑形成后,用灭菌巴斯德吸管

重组病毒噬斑筛选实验

实验材料转染细胞溶解产物BS-C-1/HuTK-143B/BHK-21/CEF 贴壁生长汇片的细胞试剂、试剂盒完全 2 × 噬斑培养基-5完全MEM-2.5培养基筛选试剂LMP 琼脂糖溶液5-溴脱氧尿苷溶液中性红溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰/乙醇仪器、耗材6孔 35 mm 组织培养板杯状超

重组病毒噬斑筛选实验

实验材料 转染细胞溶解产物BS-C-1/HuTK-143B/BHK-21/CEF 贴壁生长汇片的细胞试剂、试剂盒 完全 2 × 噬斑培养基-5完全MEM-2.5培养基筛选试剂LMP 琼脂糖溶液5-溴脱氧尿苷溶液中性红溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰/乙醇仪器、耗材 6孔 35 mm 组织培养板

重组病毒噬斑筛选实验

            实验材料 转染细胞溶解产物 BS-C-1/HuTK-143B/BHK-21/CEF 贴壁生长汇片的细胞 试剂、试剂盒

什么是裸眼检查法

  裸眼检查法是眼震检查法中一种,受检者按检查者手指所示方向,向左、右、上、下及正前方5个基本方向注视,观察其眼球运动。

重组杆状病毒的纯化实验——编码β半乳糖苷酶

杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒,可用于(1)作为基因工程病毒杀虫剂 ,提高害虫防治效率(2)作为超高效的真核基因表达载体 ,生产有用的工程蛋白(3)研究杆状病毒基因组的结构与功能(4)研究真核基因表达的调控机制。实验方法原理由于昆虫杆状病毒环状双链DNA基因组很大 (约 13

重组子筛选的原理和实验方法

  根据载体的遗传特征筛选重组子,如a-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段, 中有β半乳糖苷酶基因(acZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。  在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β半乳糖苷酶的氨基端而

重组质粒(dna-recombinant-plasmid)的筛选实验步骤

实验仪器控温摇床水浴锅 冰箱(-20,‐70℃) 超净工作台 培养箱 实验试剂 Amp LB IPTG X-Gal 平皿 玻棒 三角瓶 离心管 移液器 tip 实验步骤: 20人/班 1平皿/人 挑取可疑的白色菌落,移植于2mL的LB中,250转/分摇菌、37℃培养过夜。以快

裸眼检查法的正常值

  按眼震强度的不同,可将其分为3度:Ⅰ°眼震仅出现于向快相侧注视时;Ⅱ°向快相侧及向前正视时均有眼震;Ⅲ°向前及向快、慢相方向注视时皆出现眼震。

解析裸眼3D的技术原理

计算机屏幕是平面二维的,我们之所以能欣赏到真如实物般的三维图像,是因为显示在计算机 屏幕上时色彩灰度的不同而使人眼产生视觉上的错觉,而将二维的计算机屏幕感知为三维图像。基于色彩学的有关知识,三维物体边缘的凸出部分一般显高亮度色,而凹下去的部分由于受光线的遮挡而显暗色。这一认识被广泛应用于网页或其他

裸眼检查法的临床意义

  异常结果:常有眩晕、恶心呕吐等植物神经症状,严重程度与眼震强度一致。  需要检查人群:头晕目眩者。

解析裸眼3D的技术原理

  计算机屏幕是平面二维的,我们之所以能欣赏到真如实物般的三维图像,是因为显示在计算机   屏幕上时色彩灰度的不同而使人眼产生视觉上的错觉,而将二维的计算机屏幕感知为三维图像。基于色彩学的有关知识,三维物体边缘的凸出部分一般显高亮度色,而凹下去的部分由于受光线的遮挡而显暗色。这一认识被广泛应用于网

杆状病毒系统蛋白质表达实验——重组蛋白的代谢标记

实验方法原理由于重组蛋白表达的时候,宿主蛋白质的合成基本终止,因此体内代谢标记是检测重组蛋白的敏感方法。所有的标记氨基酸都掺入到晚期病毒特异的蛋白质(包括目的蛋白)的合成。35S 标记的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射标记的氨基酸。为了获得更好的结果,在标记之前细胞内的这两种氨基酸应当被清除:将细胞在

杆状病毒系统蛋白质表达实验——重组蛋白大规模生产

实验材料草地夜蛾细胞(Sf 9)高滴度重组病毒仪器、耗材无血清昆虫细胞培养基1~10 L 旋转培养瓶10.16 cm 管索张力器多旋转瓶揽拌台27℃ 培养箱供气泵实验步骤1. 在悬浮培养液中培养 Sf 9 细胞,并使之适应无血清培养液(基本方案 1)。2. 准备旋转培养瓶,用于按比例扩增 Sf 9

重组质粒的筛选(抗生素平板筛选和α互补筛选)

重组DNA转化受体细胞后,须在不同水平上进行筛选,以区别转化子与非转化子、重组子与非重组子以及鉴定所需的特异性重组子。在转化过程中,并非每个受体细胞都被转化;即使获得转化细胞,也并非都含有目的基因,所以需采用有效方法进行筛选。筛选的方法包括根据遗传表型筛选、限制性内切酶分析筛选、核酸探针筛选、PCR

裸眼检查法的相关症状有哪些

  不偏向一侧,无旋转的眩晕,短暂性眩晕,体位性眩晕,以头昏为主的眩晕,视觉识别障碍性眩晕,剧烈眩晕,站立不稳,耳源性眩晕,外眼源性眩晕,老年性眩晕,发作性眩晕

关于重组子筛选的介绍

  根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等。至今使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β -半乳糖苷酶的氨基

重组克隆筛选(酶切鉴定)

【实验目的】1.掌握质粒提取的基本方法的原理;2.学习和掌握限制性内切酶的使用方法。【实验原理】重组克隆的筛选和鉴定是基因工程中的重要环节之一。不同的克隆载体和相应的宿主系统,其重组克隆的筛选和鉴定方法不尽相同。从理论上说,重组克隆的筛选是排除自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的DNA片断插入

重组质粒的筛选与鉴定

摘要: 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子。可以在 蛋白质 水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子.基因水平的鉴定有酶切鉴定、 PCR 鉴定、核酸杂交和基因序列分析等.蛋白质水平鉴定有插入失活双 抗生素 对照筛选(例如 Te

重组质粒的连接、转化及筛选

实验材料 外源DNA 片段试剂、试剂盒 连接反应缓冲液T4 DNA 连接酶X-gal储液IPTG储液麦康凯选择性培养基仪器、耗材 恒温摇床台式高速离心机恒温水浴锅电泳装置电热恒温培养箱电泳仪移液枪eppendorf管

重组质粒的连接、转化及筛选

第一节 概 述质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆 较小的DNA 片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆 ,从原理上说是很简单的,先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实

重组质粒的转化、筛选和鉴定

一、实验目的1、学习克隆工作中最常用的双酶切;2、学习将外源基因与质粒连接方法及操作技术;3、学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的技术;4、了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。5、外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。6、学习鉴定重组子的方法。二、 实验原理重组子的建立

重组质粒的连接、转化及筛选

材料、设备及试剂  一、 材料  外源DNA片段: 自行制备的带限制性末端的DNA溶液,浓度已知; 载体DNA: T-vector(Ampr ,lacZ),自行提取纯化,浓度已知; 宿主菌: E. coli DH5α,或JM系列等具有α-互补能力的菌株。  二、 设备  恒温摇床,台式高速离心机,恒

重组质粒的连接、转化及筛选

实验概要本技术以pBS质粒、E. coli DH5α为例介绍了重组质粒的连接、转化及筛选。实验原理本实验所使用的载体质粒DNA为pBS,转化受体菌为E.coli DH5α菌株。由于pBS上带有Ampr 和lacZ基因,故重组子的筛选采用Amp抗性筛选与α-互补现象筛选相结合的方法。因pBS带有Amp

重组质粒的连接、转化及筛选

第一节 概 述质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆 较小的DNA 片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆 ,从原理上说是很简单的,先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可

重组质粒的连接、转化及筛选

重组质粒的连接、转化及筛选主要用于获得含有目的基因连接的重组子。实验方法原理用特定的限制性内切酶切割载体DNA和外源DNA片段并进行纯化,于体外使两者相连接(若用T-载体,可直接用纯化的PCR产物进行连接),转化宿主细菌后,利用蓝白斑筛选原理对重组子进行挑选。由于载体上带有Amp'和lacZ

重组质粒的连接、转化及筛选

重组质粒的连接、转化及筛选主要用于获得含有目的基因连接的重组子。实验方法原理用特定的限制性内切酶切割载体DNA和外源DNA片段并进行纯化,于体外使两者相连接(若用T-载体,可直接用纯化的PCR产物进行连接),转化宿主细菌后,利用蓝白斑筛选原理对重组子进行挑选。由于载体上带有Amp'和lacZ

阳性重组克隆的构建和筛选

实验概要构建并筛选含有目的基因的候选阳性重组克隆。有助于理解目的基因与克隆载体的连接、转化和筛选原理及流程。实验原理1. 连接反应:利用经过限制性内切酶消化的线形载体与目的基因两端暴露出的平末端或相同的粘性末端,使用T4 DNA 聚合酶将二者连接起来形成重组载体。2. 转化过程:感受态细胞通过温度敏