杆状病毒系统蛋白质表达实验——重组蛋白大规模生产
实验材料草地夜蛾细胞（Sf 9）高滴度重组病毒仪器、耗材无血清昆虫细胞培养基1～10 L 旋转培养瓶10.16 cm 管索张力器多旋转瓶揽拌台27℃ 培养箱供气泵实验步骤1. 在悬浮培养液中培养 Sf 9 细胞，并使之适应无血清培养液（基本方案 1）。2. 准备旋转培养瓶，用于按比例扩增 Sf 9 细胞，将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个侧臂，另用一平盖接在另一侧臂（图 16.9.1）。将一段短管（约 15 cm）装在通气孔中，末端连接一滤器。借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器加固。3. 将一段长管（30～60 cm）连接至进气孔，并在末端连接一滤器。用管索加固。另一段管子连接于滤器的另一端，用管索加固。管子末端用铝箔封好。4. 将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转 90° 以松开，高压灭菌培养瓶 1 h。5. 将适应了无血清培养液的 Sf 9 细胞（得自步骤 1）接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半满至全满之间（例如，在......阅读全文
杆状病毒系统蛋白质表达实验——重组蛋白大规模生产
实验材料草地夜蛾细胞（Sf 9）高滴度重组病毒仪器、耗材无血清昆虫细胞培养基1～10 L 旋转培养瓶10.16 cm 管索张力器多旋转瓶揽拌台27℃ 培养箱供气泵实验步骤1. 在悬浮培养液中培养 Sf 9 细胞，并使之适应无血清培养液（基本方案 1）。2. 准备旋转培养瓶，用于按比例扩增 Sf 9
杆状病毒系统蛋白质表达实验——重组蛋白的代谢标记
实验方法原理由于重组蛋白表达的时候，宿主蛋白质的合成基本终止，因此体内代谢标记是检测重组蛋白的敏感方法。所有的标记氨基酸都掺入到晚期病毒特异的蛋白质（包括目的蛋白）的合成。35S 标记的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射标记的氨基酸。为了获得更好的结果，在标记之前细胞内的这两种氨基酸应当被清除：将细胞在
杆状病毒系统蛋白质表达实验
实验方法原理 分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。实验材料 草地夜蛾（Sf9）细胞高滴度的重组杆状病毒储液试剂、试剂盒 PBS1×SDS样品缓冲液仪器、耗材 含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆虫培养基60 mm 组织培养皿27℃ 培养箱（湿度可选）15 ml 聚丙烯离心管带有 GH-3.7
杆状病毒系统蛋白质表达实验
基本方案 小规模表达 辅助方案1 蛋白质生产高峰期的确定 辅助方案2重组蛋白的代谢标记 基本方案2 重组蛋白大规模生产 实验方法原理
杆状病毒系统蛋白质表达实验——小规模表达
实验方法原理分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。实验材料草地夜蛾（Sf9）细胞高滴度的重组杆状病毒储液试剂、试剂盒PBS1×SDS样品缓冲液仪器、耗材含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆虫培养基60 mm 组织培养皿27℃ 培养箱（湿度可选）15 ml 聚丙烯离心管带有 GH-3.7 水平转
杆状病毒系统蛋白质表达实验——蛋白质生产高峰期的确定
实验方法原理因为重组蛋白的表达受多角体启动子的调节，而多角体启动子在病毒裂解循环的晚期才被激活，所以重组蛋白在感染后期才表达。重组蛋白通常在感染后 15～24 h之间即可检测到，并可积累至感染后 40 h 左右，然后积累水平下降。由于不同的蛋白质在昆虫细胞中有不同的稳定性，推荐用这个系统测定蛋白质积
重组蛋白质的大规模生产实验
基本方案 碱处理法 实验材料 重组蛋白质 仪器、耗材
杆状病毒表达系统的影响蛋白质表达的因素
在杆状病毒系统中，要获得蛋白质的有效表达，首先要选择合适的转染载体。依据表达的蛋白质属融合型或非融合型，选择单启动子型或多启动子型。另外目的基因的选择要注意以下因素：①该目的基因应不含内含子；②去除其mRNA 5′端非编码区的异源序列；③翻译启始密码子AUG应处于适当的序列之间（如Kozak 序列）
重组蛋白质的大规模生产实验——基本方案
蛋白质（protein）是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。实验材料重组蛋白质仪器、耗材培养瓶过滤器实验步骤1. 在悬浮培养液中培养Sf9细胞，并使之适应无血清培养液。 2. 准备旋转培养瓶，用于按比例扩增Sf9细胞，将合适大小的两
重组蛋白表达系统
选择合适的蛋白表达系统是重组蛋白成功表达的关键。需要考虑以下方面的因素，包括：目标蛋白性质、用途、蛋白质产量和成本。此外，许多蛋白质表达项目也存在着风险，尤其是大蛋白、膜蛋白、核蛋白和具有大量翻译后修饰的蛋白质。 目前卡梅德生物可以提供几种表达系统可供客户选择，不同的系统有不同的特性和应用
重组蛋白表达系统
选择合适的蛋白表达系统是重组蛋白成功表达的关键。需要考虑以下方面的因素，包括：目标蛋白性质、用途、蛋白质产量和成本。此外，许多蛋白质表达项目也存在着风险，尤其是大蛋白、膜蛋白、核蛋白和具有大量翻译后修饰的蛋白质。 目前卡梅德生物可以提供几种表达系统可供客户选择，不同的系统有不同的特性和应用
重组蛋白表达系统
选择合适的蛋白表达系统是重组蛋白成功表达的关键。需要考虑以下方面的因素，包括：目标蛋白性质、用途、蛋白质产量和成本。此外，许多蛋白质表达项目也存在着风险，尤其是大蛋白、膜蛋白、核蛋白和具有大量翻译后修饰的蛋白质。目前卡梅德生物可以提供几种表达系统可供客户选择，不同的系统有不同的特性和应用。在这里，我
用于外源蛋白质生产的细菌表达系统
实验方法原理 实验步骤 一、使用大肠杆菌生产外源蛋白 有越来越多的细菌表达系统可用于外源蛋白的生产。影响选择某个表达系统的因素包括目标蛋白质的天然性质、使用者的经
用于外源蛋白质生产的细菌表达系统
细菌表达系统有各种各样的载体和宿主菌可供选择，大部分工程菌的增殖时间短, 不仅便于快速评价实验结果，而且降低了技术和设备无菌要求的严格性。经过简单的调整, 许多在实验室规模下具有的这些内在优点在大规模的自动生产过程中也具有 。实验步骤一、使用大肠杆菌生产外源蛋白有越来越多的细菌表达系统可用于外源蛋白
杆状病毒表达系统用于表达融合型蛋白的转染质粒
是一类早期构建的转染质粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每个载体中，多角体蛋白基因启动子下游ATG启始密码后含有一个单一的BamHⅠ酶切位点，当外源基因和多角体基因的读码框架正确时，就可以获得含1个或几个多角体蛋白N端氨基酸的融合型外源基因。
杆状病毒表达系统用于表达多个非融合蛋白的转染载体
这种载体的主要特征是含有2个或2个以上相同的启动子，可表达2条或2条以上多肽链的蛋白。 如Emery和Bishop[8]等构建的pAcVC2转染质粒，含有两个方向相反的多角体基因启动子。重组病毒可同时表达多角体蛋白和淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV） N蛋白。Takehara[9]等构
杆状病毒表达系统的应用
杆状病毒是近年来被广泛用于高效表达外源蛋白的载体系统，本文就杆状病毒表达系统的生物学特性、转染载体、重组病毒的筛选、基因表达调控及其发展应用等方面作一概述。
杆状病毒昆虫细胞表达系统
实验步骤一、杆状病毒表达载体最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成，其位于病毒基因组多角体座位，替代了非必需的野生型多角体基因。在实验室中
杆状病毒表达系统的应用
用杆状病毒做载体，可高效表达外源基因，到目前为止已有几百个包括动植物、病毒、细菌、真菌的基因在昆虫细胞或幼虫体内得到高效表达。这个表达体系的主要特点是可以获得大量抗原性、免疫原性较好的，与天然蛋白功能相似的可溶性重组蛋白。这一特点优于细菌、酵母和哺乳动物细胞表达体系。重组杆状病毒感染昆虫细胞后，可以
杆状病毒昆虫细胞表达系统
实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成
杆状病毒表达系统用于表达单一非融合蛋白的转染质粒
由于外加的多角体蛋白或其它的氨基酸可能对外源蛋白的生物活性或细胞定位产生影响，所以用于表达非融合型蛋白的转移载体被广泛应用。几种不同的策略被用于设计高水平表达非融合蛋白的转移载体： (1)如pAcRP[5]系列等，都在多角体基因启动子启始密码ATG上游引入一个单一的限制性多克隆位点； (2)
重组杆状病毒的纯化实验
实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂牛血清仪器、耗材 培养瓶冻存管实验步骤 1. 制备病毒上清的系列稀释液，该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360β-gal DNA的细胞。在含150 μg/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。 2. 当蚀斑形成后，用灭菌巴斯德吸管
检测表达的重组蛋白质的方法
检测表达的重组蛋白质的检测方法有，首先采用DNA分子杂交技术，找到目的基因。其次检测目的基因是否转录出了mRNA，最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，进行抗原抗体杂交。
重组蛋白真核表达系统与原核表达系统的区别
重组蛋白真核表达采用原核表达系统进行研究，主要方法是将已克隆到目的基因DNA的片段的载体转化到细菌中，通过IPTG诱导和终纯化获得所需的目的蛋白。其优点是可以在短时间内获得基因表达产物，所需成本相对较低。 目前的表达系统各有利弊，但一般理想的表达系统满足以下几点：一是特异性，不受其他内源性因素
关于杆状病毒表达系统的简介
杆状病毒是近年来被广泛用于高效表达外源蛋白的载体系统，本文就杆状病毒表达系统的生物学特性、转染载体、重组病毒的筛选、基因表达调控及其发展应用等方面作一概述。 体外基因表达系统包括原核细胞系统和真核细胞系统。原核细胞系统主要是大肠杆菌细胞系统，它操作简便，周期短，收益大，表达产物稳定，但是表达基
概述杆状病毒表达系统的应用
用杆状病毒做载体，可高效表达外源基因，到目前为止已有几百个包括动植物、病毒、细菌、真菌的基因在昆虫细胞或幼虫体内得到高效表达。这个表达体系的主要特点是可以获得大量抗原性、免疫原性较好的，与天然蛋白功能相似的可溶性重组蛋白。这一特点优于细菌、酵母和哺乳动物细胞表达体系。重组杆状病毒感染昆虫细胞后，
杆状病毒昆虫细胞表达系统3
七、杆状病毒表达载体的新一代昆虫细胞宿主最早的鳞翅类昆虫细胞的遗传转化技术出现在1990年（Jarvisetal.，1990)。那时，研发该技术的初衷在于构建一个稳定转化的昆虫细胞系，它旨在能够持续生产目标重组蛋白而无需使用杆状病毒进行感染。然而, 构建这个生产用细胞系所用的载体及方法也为构建具有新
杆状病毒昆虫细胞表达系统2
五、亲代杆状病毒基因组的改进就像转移质粒的改进，对亲代杆状病毒基因组的改进也是为了满足各种不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重组杆状病毒载体构建和分离低效率的方法，这也是最初的杆状病毒-昆虫细胞系统存在的主要问题。现在已经知道这个问题的根源在于, 在共转染的昆虫细胞系中，转移质粒和亲代杆状病毒
影响杆状病毒表达系统的表达因素介绍
在杆状病毒系统中，要获得蛋白质的有效表达，首先要选择合适的转染载体。依据表达的蛋白质属融合型或非融合型，选择单启动子型或多启动子型。另外目的基因的选择要注意以下因素： ①该目的基因应不含内含子； ②去除其mRNA 5′端非编码区的异源序列； ③翻译启始密码子AUG应处于适当的序列之间（如K
重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量
一、重组蛋白质的诱导表达1.挑取转化有质粒的单菌落，接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中，37 oC，250rpm/min 振摇培养过夜。2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10 ml（1:::20）选择性 LB 液体培养基中，37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密