毕赤酵母遗传霉素抗性转化子的筛选
实验概要本实验介绍了毕赤酵母遗传霉素抗性转化子的3种筛选方法。实验步骤1. (去壁细胞)方法：从含HIS 转化子的平板开始 1) 用灭菌刮片将含有HIS 转化子的顶层琼脂最上层刮下，放入无菌的50ml 离心管中。 2) 加入10-20ml灭菌水，量应为琼脂的两倍，剧烈振荡1-2min。 3) 将离心管置于管架上，让琼脂沉淀(1min)。 4) 用血球计数计确定上清中细胞浓度。至少要5×105细胞/ml，那样在200ul 或更少溶液中可含105 个细胞。(如果太稀，可将液体转入另一管中，离心细胞，再用适量灭菌水重悬至5×105细胞/ml)。 5) 每块含遗传霉素的YPD 平板涂105细胞。每个浓度用四块板。(需要证实在没有遗传霉素的YPD 板上细胞的滴度，计算每个遗传霉素抗性平板上抗遗传霉素克隆的比例，以确定你所......阅读全文
低值碳原料生物合成单细胞蛋白方面获进展
传统微生物生产菌体蛋白存在低值原料的转化效率和速率低、蛋白质合成能力不足等问题。巴斯德毕赤酵母由于具有天然的甲醇同化能力被认为是生产甲醇单细胞蛋白（SCP）的理想宿主，但是其复杂的甲醇代谢途径和细胞内累积的甲醛生物毒性导致天然巴斯德毕赤酵母甲醇利用率低，不利于SCP的高效合成。此外，在实际生产中
大连化物所周雍进团队实现甲醇酵母的高效代谢改造
近日，中国科学院大连化学物理研究所合成生物学与生物催化创新特区研究组研究员周雍进团队在甲醇酵母合成生物学研究中取得进展，实现了甲醇酵母的高效代谢改造。科研人员在甲醇酵母代表菌株毕赤酵母中，构建了基因编辑工具，强化了同源重组从而实现了精确基因编辑，鉴定了染色体基因整合位点并表征了系列不同表达强度的
天津工生所在低值碳原料生物合成单细胞蛋白方面获进展
传统微生物生产菌体蛋白存在低值原料的转化效率和速率低、蛋白质合成能力不足等问题。巴斯德毕赤酵母由于具有天然的甲醇同化能力被认为是生产甲醇单细胞蛋白（SCP）的理想宿主，但是其复杂的甲醇代谢途径和细胞内累积的甲醛生物毒性导致天然巴斯德毕赤酵母甲醇利用率低，不利于SCP的高效合成。此外，在实际生产中
设计出新型酵母表达平台
近日，华东理工大学生物工程学院教授蔡孟浩课题组在新型酵母表达设计方面取得重要进展，开发了可响应用户自定义信号的高效酵母蛋白表达平台。相关成果已在线发表于《科学进展》。高水平、可调控的基因表达，对于生物医药和生物制造产业中的蛋白高效率、高质量生产极为重要。酵母作为人们熟知的一种真核微生物，在食药方面的
甲醇酵母基因表达系统
1 甲醇酵母表达系统的特点 1.1 宿主 七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白（SCP），有很好的发酵基础，菌体密度可达100g/L干重。其生长培养液的组分包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源，廉价而无毒。它能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长，其中醇氧化酶AOX——甲醇代谢途径
异养菌转化自养菌获突破，这种菌将以CO2作为唯一碳源
巴斯德毕赤酵母广泛用于工业酶和药物的生产。像大多数生物技术生产宿主一样，巴斯德毕赤酵母是异养的，生长在有机原料上，这些原料在食品和动物饲料的生产中具有竞争性用途。如果将二氧化碳用作碳原料，生物技术制造业将变得更具可持续性，因为它不会消耗有机原料，并且会消耗大气中的二氧化碳。 2019年12月1
CHO细胞表达系统与酵母细胞表达系统比较
CHO细胞表达系统与毕赤酵母表达系统是当前发展前景看好的两个表达系统，为了能够更加直观地对两个表达系统有一定的认识，特意在此篇中对两个表达系统作一定的比较，从而能够更进一步的对两个表达系统有更深的了解1．CHO细胞表达系统 （1）优点 CHO细胞属于成纤维细胞，既可以贴壁生
菌种中英文对照（全部）（八）
Neisseria subflava 微黄奈瑟球菌 Nocardia spp 奴卡菌属某些种 Ochrobactrum anthropi 人苍白杆菌 Oerskovia spp 厄氏菌属某些种 Oerskovia xanthineolytica 溶黄嘌呤厄菌 Oligella ur
迄今最高产量！科学家利用微生物细胞工厂合成“香料皇后”
华东理工大学教授蔡孟浩团队首次在非常规酵母巴斯德毕赤酵母中从头合成“香料皇后”香兰素（即香草醛），并实现了迄今报道的最高产量，相关策略及结果证明了代谢工程及酶工程协同改造策略的有效性，为更高效的目标分子从头合成提供了新思路，也为巴斯德毕赤酵母合成芳香醛类及更广泛羰基化合物的绿色制造提供了参考。相关研
脂肪酶的功能特点
脂肪酶是生物合成中一个重要酶类。目前我国已建立了通过理性设计成熟的3个脂肪酶基因改造、生产和应用的技术平台。用基因改组技术将抗展青霉Penicillium expansum FS 8486酶活力提高了317%。对脂肪酶“蓋子”结构进行了定点突变，获得开蓋型脂肪酶，酶比活力提高5.7倍，两相催化效率提
柯萨奇病毒A16型基因工程疫苗研发中获进展
2月21日，国际学术期刊Antiviral Research 在线发表了中国科学院上海巴斯德研究所黄忠课题组的科研成果Coxsackievirus A16-like particles produced in Pichia pastoris elicit high-titer neutraliz
简述甲醇营养型酵母表达系统
甲醇酵母表达系统是应用最广泛的酵母表达系统。甲醇酵母主要有汉森酵母属(Hansenula)，毕赤酵母属(Pichia)，球拟酵母属(Torulopsis)等，并以毕赤酵母属(Pichia)应用最多。 甲醇酵母的表达载体为整合型质粒，载体中含有与酵母染色体中同源的序列，因而比较容易整合入酵母染色
麦芽汁琼脂的成分和适用范围
Wort Agar （麦芽汁琼脂）Dilute the world (without hop) to 12 Brix. Add 15g agar into 1000ml of the diluted word..Melt the agar by heating, then distribute th
糖的吃法很多，但只有这种吃法不会得龋齿
在糖果等碳水化合物中，由于其中的葡萄糖会带来过多的热量贡献，并会造成龋齿和糖尿病等不良影响，人们希望从这些糖混合物中去除葡萄糖。近日，西班牙催化与石油化学研究所的一个科研团队提出了消除几种糖浆中的d-葡萄糖和d-果糖的方法，相关成果3月28日在线发表于《食品科学与技术》上。在低聚果糖（FOS）、低聚
上海巴斯德所肠道病毒71型基因工程疫苗研发取得新进展
手足口病是五岁以下儿童中常见的病毒性传染病，肠道病毒71型（EV71）是引起儿童手足口病的最重要病原体，主要通过粪口途径传播，感染的患儿可能表现出严重的神经系统损伤和并发症，如脑干脑炎、脊髓灰质炎样的瘫痪和肺水肿等症状，甚至危及患儿生命。然而，目前仍然没有商业化的疫苗来预防EV71感染。 中国
漆酶的特性和应用
漆酶为含铜多酚氧化酶，为木质素分解酶，亦可催化合成酚类、芳香胺的低聚物。担子菌漆酶酶基因克隆到毕赤酵母中表达活力为9.03 U/mL，为原始菌株的3倍。野生革耳Panus rudis漆酶转化到毕赤酵母分泌表达，通过定点突变及随机突变后，酶比活力为16.17 U/mg，提高了4.4倍。新型海洋细菌漆酶
华东理工大学甲醇酵母合成生物学研究获新进展
华东理工大学教授张元兴团队蔡孟浩研究组，在甲醇酵母合成生物学方面的最新研究进展日前在线发表于《代谢工程》。 甲醇是当前化工产业的大宗副产物，廉价易得，且可通过甲烷氧化、二氧化碳还原实现可再生制备，作为一种潜在的优质碳源已引起广泛关注。 研究人员通过在甲基营养型酵母——毕赤酵母中，异源重构并优
HCP检测
美国药典委员会USP发布了通则质谱法测定生物药中残留宿主细胞蛋白，介绍了质谱技术在HCP检测中的应用，从测试条件的建立、数据的分析、质谱方法验证等多个方面。与ELISA相比，LC-HRMS方法可以鉴定HCP的种类，获得单个HCP的含量信息，可用于不同工艺所得产品的横向对比。 以毕赤酵母发酵的某
重组乙型肝炎疫苗甲基营养型酵母的简介
共有4种表达系统。甲基营养型酵母生产HbsAg具有培养基廉价，目的基因与酵母染色整合的优点， 不仅可克服质粒丢失，还可提高表达量。汉逊酵母（Hansenula Polymorpha，H.P.）和毕赤酵母（Pichia Pastoris，P.P.）系统已应用于工业化生产。已上市的酿酒酵母和甲基营养
选择重组蛋白表达的合适方法（二）
三、毕赤酵母酵 母 作 为 另 一 种 表 达 重 组 蛋 白 的 强 有 力 的 传 统 工 具 ，已 被 成 功 应 用 于 大 量 蛋 白 质 的表 达 。酵 母 既 具 有 大 肠 杆 菌 的 许 多 优 点 ，如 增 殖 时 间 短 、基 因 组 易 于 操 作 ，又 具 有 真
D氨基酸氧化酶的特性和应用
D-氨基酸氧化酶可催化D-氨基酸生成相应的酮酸和氨，此酶与7-氨基头孢烷酸酰化酶 (7-ACA酰化酶) 两步法生产头孢菌素重要原料7-氨基头孢烷酸 (7-ACA)。用甲醇酵母表达的D-氨基酸氧化酶，构建了高表达的毕赤酵母重组菌。14 L罐发酵活力达8 000-1 2000 U/L。构建了毕赤酵母融合
常用的酵母表达系统的介绍
酵母表达系统作为一种后起的外源蛋白表达系统，由于兼具原核以及真核表达系统的优点，正在基因工程领域中得到日益广泛的应用，应用此系统可高水平表达蛋白，且具有翻译后修饰功能，故被认可为一种表达大规模蛋白的强有力的工具。 常用的酵母表达系统： 一、酿酒酵母(Saccharomycescerevisi
转基因酵母乙肝疫苗的制备方法
基因重组乙肝疫苗是利用转基因技术，构建含有乙肝病毒HBsAg基因的重组质粒，转入酵母（啤酒酵母. 汉逊酵母或毕赤酵母）或重组中国仓鼠卵巢细胞（CHO）表达的乙型肝炎表面抗原，在繁殖过程中产生于未糖基化的HBsAg多肽，经破碎酵母菌体，颗粒形未糖基化的HBsAg多肽释放，经纯化，灭活，加氢氧化铝后
部分细菌名称对照表（三）
hotobacterium damsela 美人鱼发光杆菌 Pichia carsonii 卡氏毕赤酵母 Pichia etchellsii 埃切毕赤酵母 Pichia farinosa 粉状毕赤酵
嗜酸真菌的功能介绍
嗜酸真菌Biospora sp. MEY-1四个基因成功克隆到毕赤酵母异源表达，重组酵母XYL11酶比活力为1 8831 U/mg，90 ℃ 10 min仍保留87%以上活力。降解燕麦木聚糖主要产木糖和木二糖，具有很好抗蛋白酶降解的能力。用黑曲IME-216产木聚糖基因克隆到酿酒酵母中表达，活力提高
关于酿酒酵母的应用
酵母菌的分类一直充满着挑战和争议，在分子生物学技术应用于物种分类之前，经典分类学方法主要从形态、繁殖和生理特征来进行酵母的分类，然而这些指标具有极大的局限性，酵母菌的特征可能随着培养基成分和生长阶段的改变而发生变化。截止到1998年，已描述的酵母菌达到95属，723种，目前荷兰微生物菌种保藏中心
腈水合酶的特性
腈水合酶在酰胺、羧酸及其衍生物合成中有重要应用价值，催化丙烯腈生产丙烯酰胺，诺卡氏菌Nocardia sp. YS-2002发酵活力最高达6 000国际单位，在E. coli及毕赤酵母中得到表达。
木聚糖酶的参数功能
木聚糖酶是半纤维素降解的关键酶，我国用橄榄绿链霉菌基因转到毕赤酵母Pichia pastoris获得高效表达。酶活性为1 200 U/mL，比活性为2 869 U/mg。具非常好的抗蛋白酶降解能力。
菊粉酶的特性
菊粉酶是水解菊粉的β-2,1-D-果聚糖果糖苷键的水解酶，产低聚果糖，分内切酶和外切酶两种。将黑曲霉菊粉内切酶基因克隆到毕赤酵母得到高效表达，重组酶活力达128 U/mL，达到国际水平。
黄曲霉毒素解毒酶的特性
黄曲霉毒素解毒酶为一种加氧酶，用重组技术构建基因在毕赤酵母中高密度发酵表达，酶占总蛋白量56%，表达量达814.5 mg/L。将酶突变基因重组质粒引入E. coli扩增转入酿酒酵母，建立突变文库，突变体A1773酶活提高5倍。突变体A1242耐高温性提高了3.5倍。突变体DS1474酶比活力56 U