DEPC
Procurement100ml DEPC from Sigma (D5758) [1] - €233/$292 (as of 2009-01)100ml DEPC from MPI (150902) [2] - €313 (as of 2009-01)DEPC-treatment of solutionsadd 0.05-0.1% (v/v) DEPC to solution/water(More DEPC is needed to inactivate larger amounts of RNases, but larger amount of RNases take longer to remove subsequently and increase the risk of residual DEPC, health risk, and interference with downs......阅读全文
我作NORTHERN的心得
我们试验室作NORTHERN的一些总结，欢迎指正，谢谢。Northern杂交准备物品：50ml量筒1个 100ml量筒1个 300ml烧杯1个 250ml 烧杯1个 250ml的锥形瓶1个 10ml 离心管2个 大小盘各1个 镊子1把 剪刀1把 DEPC水500ml 2，瓶玻璃棒1根 电泳槽、转膜槽
逆转录RTPCR实验仪器及条件
实验器具的准备：RT-PCR所用的500μl和200μl薄壁EP管、移液器吸嘴最好用进口的，因为进口EP管、移液器吸嘴已经去除了RNasin，也已经灭菌处理过，可以直接用。实验前用干净的镊子夹取出EP管、移液器吸嘴插好备用，注意镊子不要碰到EP管内壁和吸嘴的尖部。如果用国产500μl和200μlEP
真菌RNA提取实验
实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 实验材料 菌丝体试剂、试剂盒 NaCl蒸馏水SDSTr
逆转录（RT）实验步骤
一、准备工作1、实验器具与材料：（1）移液枪：200ul、10ul（2）吸头：200ul、20ul（3）EP管1。5ml、100ul（4）水浴箱2、实验器具的处理与准备塑料制品：（包括吸头、EP管等）将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中（必要时小枪头需要用吸管打入DEPC水）37℃过夜，然后送至高压
原位PCR的反转录
原位PCR的反转录不同于原位PCR的过程包括两个：即蛋白酶消化后用无RNA酶的DNA酶消化过夜和原位PCR的反转录过程。此处主要介绍这两个过程，其余方法同原位PCR。1．DNA酶消化【试剂与配制】无RNA酶的DNA酶10×缓冲液：35μl 3mol/L NaAc，5μl 1mol/L MgSO4，6
Realtime－PCR实验注意事项（防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...1
实验中的一些好习惯 加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均 移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性 一定要记着关水浴箱，切记切记 多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了 所有的试剂都自己配
RNA实验方法附录
一、RNA抽提注意事项尽可能无RNA酶的环境下操作，最好有专门场所耗材的处理：电泳槽需0.5 M NaOH处理过夜后DEPC水清洗试管氯仿浸泡处理后DEPC水清洗枪头和eppendorf管DEPC水浸泡后灭菌处理实验者本身防护：一次性手套，口罩等启盖前震荡离心管有助于防止气溶胶形成正确的操作方式二、
RNA凝胶电泳试验所需实验试剂
1、0.1%DEPC水：200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。 2、10x电泳缓冲液：吗啉代丙烷磺酸（MOPS）0.4mol/L（pH 7.0）；NaAc 0.1mol/L；乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L； 3、50mL变性琼脂糖凝
植物总RNA的提取实验技术
一、实验目的 通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法 二、实验原理 RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的 RNA，必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNA酶，所以RNA从细胞中释
酚/SDS法制备植物RNA
试剂、试剂盒 液氮 研磨缓冲液 TLE 缓冲液平衡酚) 氯仿 IiCl 溶液 (DEPC 处理） 乙酸钠 (DEPC 处理）
酚/SDS法制备植物RNA
试剂、试剂盒 液氮 研磨缓冲液TLE 缓冲液平衡酚)氯仿IiCl 溶液 (DEPC 处理）乙酸钠 (DEPC 处理） 无水乙醇DEPC 处理水仪器、耗材 Folytron 匀浆器（BrinkmarmPT10 35)实验步骤 一 材料与设备1) 液氮2) 研磨缓冲液 18mol/LTris，0.09m
TRIzol－Prep
Procedure1. Homogenize cells (10 million) or tissue (50-100 mg) in 1 mL TRIzol Reagent (e.g. scrape and pass through 30G needle, dounce homogenize an
RNA－操作注意事项与实验技巧
操作注意事项： 由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功，请仔细阅读下列注意事项，相信它能帮助您解决常见的问题。 归根究底，RNA工作的主要问题是防止RNA酶的污染。RNA酶无处不在，在实验操作的任何一步，任何偶然的疏
真菌RNA提取实验
真菌RNA的提取可以：（1）用于真菌RNA干扰机制研究；（2）用于cDNA文库构建等研究；（3）用于真菌分子生物学相应研究。实验方法原理液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成
RNA制备的问题与解答
1、塑料制品、玻璃和金属物品的处理(a)塑料制品：尽可能使用无菌，一次性塑料制品。已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过，通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理方法如下：(1)在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意：
RNA实验技巧与操作注意事项
操作注意事项：由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功，请仔细阅读下列注意事项，相信它能帮助您解决常见的问题。归根究底，RNA工作的主要问题是防止RNA酶的污染。RNA酶无处不在，在实验操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不当操
知识分享：mRNA的分离和纯化
实验原理 从细胞或组织中得到RNA是一种混合物，其中包括tRNA，rRNA和mRNA，其中RNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，而mRNA仅占1%～5％，并且mRNA基因序列不同，分子量大小不均一，各基因的表达丰度也不一样。每克细胞可分离出5-10mg RNA。 真核生
RNA提取与纯化
实验概要掌握RNA提取的基本技术，了解RNA提取过程中的各种注意事项。实验原理RNA提取是分子生物学实验中难度较大的实验技术。 RNA提取和DNA提取有类似的地方，因为它们都是核酸，都具有较好的水溶性。提取RNA首先破碎细胞，然后用提取液将RNA溶出，反复抽提去除蛋白质，加入乙醇沉淀RNA，将RNA
无菌感染期线虫RNA的提取
实验概要以培养诱导的无菌 S. carpocapsae A24品系感染期线虫为材料，提取高质量RNA，为后续cDNA的构建做准备。主要试剂1. 主要试剂 1) Trizol Reagent，美国Invitrogen公司； 2) DEPC，Bio Basic inc公司； 3) 氯
利用－Trizol－从植物组织中制备－RNA－实验
实验材料 植物组织试剂、试剂盒 Trizol氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水液态N2NaCl柠檬酸钠仪器、耗材 转子-定子均化器研钵和杵圆锥形管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂Trizol(Invitrogen)氯仿异丙醇乙醇，70%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水配制DEPC 处
利用－Trizol－从植物组织中制备－RNA－实验
实验材料 植物组织 试剂、试剂盒 Trizol 氯仿 异丙醇 乙醇
RTPCR的注意事项
一、防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用lv 仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被lv 仿腐蚀，故不能使用）。3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2
RNA凝胶电泳试验操作注意事项
本实验中必须保持RNase污染以免RNA降解。所有试剂用DEPC水配制，用具也用DEPC水冲洗，并灭菌。 ①电泳RNA所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。 ②用新的1XTBE配制1.2%琼脂糖凝胶，倒胶时溴化乙锭（EB）直接加入凝胶中。 ③
从RNA抽提到电泳鉴定2
逆转录（RT）一，准备工作1， 实验器具与材料：（1）移液枪：200ul、10ul（2）吸头：200ul、20ul（3）EP 管1.5ml、100ul（4）水浴箱2，实验器具的处理与准备塑料制品：（包括吸头、EP管等）将塑料制品逐个浸泡于 1‰DEPC水中（必要时小枪头需要用吸管打入DEPC水）37
真核细胞总RNA的分离提取
RNA是基因表达产物，由以下几类分子组成，rRNA（占细胞总RNA的80%～85%）、tRNA和核内小分子RNA（占10～15%）、mRNA（占1～5%）。其中mRNA是分子生物学的主要研究对象，分离制备mRNA是克隆基因，分析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤。真核细胞总RNA分离提取的目的是
常用贮液与溶液（二）
100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mm
RNA实验操作注意事项
在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的 RNA的纯度和完整性又可直接影响
如何防止RNA酶污染
在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所
防止RNA酶污染的措施
在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所
RNA操作中的一般要求
在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所