DNA、RNA斑点杂交
实验概要将RNA 或DNA 变性后直接点样于硝酸纤维素膜上,同探针进行杂交,用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究,称为斑点印迹。与Southern 及Nouthern 印迹法相比,其优点是简单、迅速,可在一张膜上同时进行多个样品的检测,特别是对于核酸粗提样晶的检测。缺点是不能鉴定所测基因的分子量,特异性不高,有一定的假阳性。主要试剂 southern、northern杂交试剂、RNA提取试剂 DNA提取试剂实验步骤RNA点杂交1) 纯化的RNA的点杂交和狭线杂交安装印迹装置1.切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿,在20×SSC中室温泡1 h。2.在膜浸泡期间,先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置,再用无菌水洗干净。3.把两片厚滤纸用20×SSC浸湿,再放到真空器顶部。4.把样品槽插入装置的上部,把湿尼龙......阅读全文
植物DNA提取中怎样检测提取到DNA质量
第一种方法是测量260/280的比例,判断是否有蛋白质的污染。在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收,A260与A280之比应在1.75-1.80之间。低于此值表明制备物中残留蛋白质成分较高或含有酚,高于此值表明有RNA的残留。第二种方法是凝胶电泳分析,看有无断裂降解。影响DNA提取质量的
细菌DNA浓度如何换算为DNA拷贝数
需要知道DNA浓度、DNA片段长度。即可换算成拷贝数1A260 吸光度值=ds DNA 50 ug/ml=ss DNA 33 ug/ml=ss RNA 40 ug/ml核酸浓度=(OD260) x (dilution factor) x [33 或40或50]= ng/ulMW 代表 克/摩尔,单位
B型DNA和Z型DNA的要点介绍
1.两条反向平行的互补双螺旋链,一条方向为5‘→3’,另一条方向为3‘→5’,围绕同一中心纵轴,从右向上盘旋。 2.双螺旋磷酸-脱氧核糖主链在外,位于内的碱基平面与中心轴垂直。 3.每个碱基相聚0.34nm,同条链相邻碱基夹角36度,每10个碱基形成螺旋1周,螺距3.54nm。 4.露于螺
DNA片段的亚克隆实验——凝胶块中DNA连接
实验材料DNA试剂、试剂盒TAE琼脂糖仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 重复基本方案中的步骤1~5。 2. 在高质量的低融点胶中分离久DNA(0.7%,TAE缓冲液),切下体积尽可能小的所需DNA条带(20~50 μl )至小离心管中。3. 在70℃融化低融点胶10 min 以上,每个连接反
关于DNA损伤试验—程序外DNA合成试验的介绍
程序外DNA合成试验基本方法是测定S期以外3H-胸苷掺入胞核的量,这一掺入量可反映DNA损伤后修复合成的量。由于此种合成发生在DNA正常复制合成主要时期以外,故称为程序外DNA合成(unschedule DNA synthesis UDS)试验或DNA修复合成试验。一般使用人淋巴细胞或啮齿动物肝
研究发现DNA损伤修复与DNA转录的协同作用
最近,来自挪威科学技术大学的Barbara van Loon博士等人在遗传信息修复方面有了新发现,该发现发表在最近的《Nature Communications》杂志上。 Van Loon的研究小组发现,阅读DNA的分子元件和纠正DNA错误的分子元件可以协同工作。(图片来源:NTNU) Va
惊人!香蕉的DNA与人类DNA相似度竟达60%
人体由30亿个遗传碱基对组成,而在这30亿个碱基对中,每个人特有的成分其实是很少的,这使得人类在遗传上与后代的相似度达到99.9%。图片来源于网络 最近,物理学家和企业家Riccardo Sabatini的TED演讲表明:如果把人的整个遗传密码打印出来将占约262,000页,相当于175本大书
dna变性温度与dna的组成有什么关系
对双链DNA进行加热变性,当温度升高到一定高度时,DNA溶液在260nm处的吸光度突然明显上升至最高值,随后即使温度继续升高,吸光度也不再明显变化。若以温度对DNA溶液的紫外吸光率作图,得到的典型DNA变性曲线呈S型(如下图)。可见DNA变性是在一个很窄的温度范围内发生的。通常将核酸加热变性过程中,
关于DNA连接酶的DNA接头连接法介绍
DNA接头,是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后,便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子,而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造,可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头
种子DNA提取仪是种子DNA提取的好方法
随着社会和科技的发展,在种子研究等领域,快速而经济的从种子样品中提取高产量、高纯度的基因组DNA已经成为植物分子生物学研究的首要问题,过去传统的种子DNA提取方法非常复杂,需要用到大量的试剂,容器等,提取所需要花费的时间也非常长,因此是明显不符合现代科学研究的发展需要的,而种子DNA提取
DNA重组技术(Recombinant-DNA)实验原理、用品和步骤(一)
【实验原理】1.DNA重组技术重组DNA(Recombinant DNA)技术是遗传工程的核心技术,也是人类在基因和DNA分子水平进行操作的技术。它包括以下几个步骤: 1)重组DNA分子的构建:即将目的基因(DNA或cDNA片段)与载体DNA重组,应用TA克隆方法,将PCR扩增产物快速克隆至质粒
种子DNA提取仪对云南紫苏的种子DNA提取
云南各地收集到20份紫苏品种并进行了多年的栽培和经济性状评估,发现在紫苏种内存在 着丰富的遗传变异,并且已用形态聚类分析的方法对云南境内紫苏的种下变异进行了探讨,将其分为5个变种。由于形态特征是基因型和环境相互作用的产物,紫苏 的形态聚类分析结果仅从表现型上间接地反映出了云南境内紫苏的遗传多样性。试
DNA序列和大规模DNA测序策略的探讨(图)
人类基因组计划的核心内容之一是基因组测序。随着人类基因组图谱趋于完成,人类基因的 定位克隆、鉴定分析直至全基因组测序取得了突破性进展,测序策略的成熟、测序方法的改进、自动测序仪的广泛应用、计算机数据分析系统的扩展以及测序分析能力的提高, 大大推进了大规模DNA测序的进程。第一节 DNA测序的基本方法
DNA重组技术(Recombinant-DNA)实验原理、用品和步骤(二)
【实验步骤】 1.PCR产物纯化 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,应用凝胶回收试剂盒回收纯化目的DNA片段。 2.目的DNA片段连接至T/A克隆载体 即重组DNA分子的构建 反应体系及条件如下: 3.转化 3.1 将感受态细胞置冰中融解。 3.2 将60μl感受态细胞移至无菌
DNA纯化实验——DNA凝胶回收试剂盒纯化法
DNA纯化可用于:(1)获得高纯度的DNA;(2)浓缩DNA;(3)测序、遗传信息分析等分子生物学应用。实验方法原理本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中提取多至 8 μg DNA(70 bp-10 Kb),回收率为 60-85%。琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A 溶液)中溶解,其中的保护剂能防止线状 D
Streamlined-DNA-Extraction-Protocol
This method is derived from a procedure developed by Toby Bradshaw and the Poplar Molecular Genetics Cooperative. We have tested the procedure wit
动物DNA提取实验
实验方法原理 在浓氯化钠(1-2 mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很大,核糖核蛋白的溶解度很小,在稀氯化钠(0.14 mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很小,核糖核蛋白的溶解度很大。因此,可利用不同浓度的氯化钠溶液,将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。 将抽提得的
基因检测DNA分析
DNA分析主要用于识别单个基因异常引发的遗传性疾病,如亨廷顿病等。DNA分析的细胞来自血液或胎儿细胞。
Southern-Blotting:-DNA-Transfer
Southern Blotting: DNA Transfer1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels), 7' (large gels)2. Denaturation: Wash
DNA杂交的意义
分类学上不同物种的DNA分子之间可以进行分子杂交,但是,远缘物种的DNA分子之间进行杂交分子的可能性远比近缘物种的要小得多。例如,细菌与真核细胞DNA分子之间形成杂交分子的可能性很小;不同细菌的 DNA分子之间杂交时,能形成某些互补片段;人的DNA分子与小鼠的 DNA分子之间杂交时,只有少量的人
Molecular-Analysis-and-Results--DNA
Theory of CGHComparative genomic hybridization (CGH) is a fairly new molecular cytogenetic technique that allows detection of DNA sequence copy number
DNA芯片的概念
DNA芯片又叫做基因芯片(gene chip)或基因微阵列(microarray),寡核酸芯片,或DNA微阵列,它是通过微阵列技术将高密度DNA片段阵列以一定的排列方式使其附着在玻璃、尼龙等材料上面。由于常用计算机硅芯片作为固相支持物,所以称为DNA芯片。
计算/DNA测序仪
测序反应精确度计算公式:100%-差异碱基数(不包括n数)/650×100%差异碱基即测定的dna序列与已知标准dna序列比较不同的碱基,n为仪器不能辨读的碱基。
Fungal-Genomic-DNA-Extraction
OverviewHigh throughput of many fungal isolates can be achieved by growing axenic cultures in either (a) 1.5mL microfuge tubes, half full with liquid
Yeast-Genomic-DNA-Prep
Grow 10ml YPD cultures o/n. Figure out cell density; inoculate 30 ml YPD and grow o/n so that cell density is approximately 2 x 108cells/ml the next m
DNA的定量(二)
2. EB荧光分析法(1)琼脂糖凝胶的制备。(2)样品的准备。把待测DNA样品进行1:2连续稀释,并准备一份DNA标准液作对照。(3)上样。稀释样品与上样缓冲液按1:5混合均匀后上样。(4)电泳。用100V稳压电泳至溴酚蓝指示剂迁移到凝胶的3/4处停止电泳。(5)取出凝胶,入EB荧光染液中作用20m
Restriction-Enzyme-Digestion-of-DNA
Materials:10X restriction enzyme buffer (see manufacturer's recommendation)DNAsterile waterrestriction enzymephenol:chloroform (1:1)Add the follow
过客DNA的定义
中文名称过客DNA英文名称passenger DNA定 义重组在克隆载体中的外源DNA序列。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)
重组DNA的定义
中文名称重组DNA英文名称recombinant DNA;rDNA定 义经人工手段对其序列进行了改造和重新组合的DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
DNA微序列技术
· Protocols for Making Drosophila Arrays (Stanford U.)Detailed protocol for making arrays including PCR Amplification of cDNAs for Printing,