病毒转化细胞
实验概要病毒转化细胞实验步骤1.血液制备:柠檬酸(Citric Acide)或肝素抗凝取血1~2ml,分装入管中,每管0.5ml全血,置于4℃冰箱中30分钟。2.EBV病毒转化:从液氮中取出冻存的0.5ml全血,在37℃水中迅速解冻。3.将解冻细胞与10ml不含血清的RPMI 1640混合,2500 rpm离心2分钟,弃上清,用含20%的胎牛血清、青、链霉素和庆大霉素的RPMI 1640生长培养基重悬细胞。4.加入0.3~0.5ml的EBV病毒液,37℃水浴30分钟~2小时,并不时摇动,以免出现凝块。5.分装入50ml的培养瓶中,同时补加适量培养液,置入含5%CO2温箱中,100%温度下培养。6.一周后加补入2ml培养基。7.经常镜检培养物,每3~4天加液或换液,随细胞数量增多,可分装入大瓶中培养。......阅读全文
类病毒
一、类病毒 20 世纪 70 年代初期,美国学者 Diener 及其同事在研究马铃薯纺锤块茎病病原时,观察到病原无病毒颗粒和抗原性、对酚等有机溶剂不敏感、耐热 (70 ℃ ~75 ℃ ) 、对高速离心稳定 ( 说明其低分子量 ) 、对 RNA 酶敏感等特点。所有这些特点表明病原并不是病毒,而是一种
病毒家族的“小个子”——诺瓦克病毒
中国部分地区近来出现了诺瓦克病毒感染者。日本及多个欧洲国家报告的传染性肠胃炎流行程度也都超过往年,这些国家的病例绝大多数由诺瓦克病毒引起。专家表示,对诺瓦克病毒不必大惊小怪,感染这种病毒后果并不会特别严重。 诺瓦克病毒于1968年被发现,当时美国俄亥俄州一所小学发生了集体患急性肠胃炎的事件,人们从
PNAS:病毒小RNA抑制登革病毒复制
每年有超过100个国家报道了近100百万例登革病毒(Dengue virus,DENV)感染性疾病,包括50万例登革出血热。伊蚊属的埃及伊蚊(Aedes aegypti)和白纹伊蚊(Aedes albopictus)是DENV的主要传播者。MicroRNA(miRNA)是一类具有调控功能
关于汉坦病毒的病毒基因分析
J.W.Song等从韩国绒鼠(Eothenomys regulus)分离了两株PUU相关病毒,命名为Muju(MUJ)病毒。两株病毒G2基因241bp片段序列存在1.2%差异,G2基因241bp片段和S基因208bp片段与PUU病毒相应片段序列的同源性分别为79.5%~83.4%和80.3%~8
如何选择病毒细胞培养的病毒?
病毒会感染几乎每一种生物机体,无论是人、老鼠、跳蚤还是细菌,都逃脱不了病毒的攻击。但是这些寄生生物无法独立生活:它们需要进入宿主细胞内部,这也就是为什么病毒学家也需要培养细胞,不过要想掌握这种细胞培养技术,就必须对病毒和宿主细胞都有所了解。 因为这个过程并不是简单的把病毒和细胞都放到培养皿中就
病毒根据病毒感染的宿主分类
根据病毒感染的宿主分类包括:a.动物病毒;b.植物病毒;c.细菌病毒(噬菌体)。
病毒透射电镜病毒标本制备
实验方法原理 病毒等微小颗粒标本可取其培养物经稀释或分离提纯后直接滴于附有支持膜的载网上用电镜观察。实验材料 病毒试剂、试剂盒 稀释液仪器、耗材 透射电镜实验步骤 悬液应尽量除去杂质如培养基残渣,细胞碎片、糖类及各种盐类的结晶等,这些杂质的存在会干扰染色及电镜观察。用该法的缺点是由于电子穿透能力很弱
病毒与类病毒的本质区别
类病毒与病毒不同的是,类病毒没有蛋白质外壳,为共价闭合的单链RNA分子,呈棒状结构,这和朊病毒相反,由一些碱基配对的双链区和不配对的单链环状区相间排列而成。1971由美国植物病理学家 Diener及其同事在研究马铃薯纺锤块茎病(potato spindle tuber disease)病原时发现。能
疱疹病毒的病毒分离和鉴定
病毒分离培养是当今临床上明确诊断疱疹病毒感染的可靠依据。可采集皮肤、生殖器等病变部位的水疱液、脑脊液、角膜刮取物、唾液等标本,接种人二倍体成纤维细胞株WI38及其它传代细胞株如Vero、BHK等,经24~48小时后,细胞则出现肿胀、变圆、细胞融合等病变。然后用HSV-1和HSV-2的单克隆抗体作
病毒包装技术——腺病毒载体的制备
1 菌液的准备1.1. 取含目的质粒的甘油菌液(-80℃或-20℃冰箱中),待菌液融化后,在超净台用接种环划线于氨苄抗性的平板上,37℃倒置培养12-16h。待平板长出菌落,挑选生长状态良好的单克隆菌落。若无目的质粒的菌液,则需取库存质粒进行转化,然后挑单克隆摇菌。1.2. 将单克隆接种于5ml氨苄
埃博拉病毒、寨卡病毒和登革热病毒的药物靶标
目前没有药物可用于治疗埃博拉病毒、登革热病毒或寨卡病毒,这些病毒每年感染数百万人并导致严重疾病、先天性缺陷,甚至死亡。如今,来自美国格拉德斯通研究所和加州大学旧金山分校的两项新研究最终可能改变这一点。他们鉴定出这三种病毒劫持人类细胞的关键途径,并且发现至少有一种潜在的药物能够破坏人类细胞中的这个
吉利德从诺华授权病毒学资产,鼻病毒、流感、疱疹病毒
吉利德科学(Gilead Sciences)近日宣布,已从诺华授权了3个临床前抗病毒项目,包括有潜力治疗人类鼻病毒、流感病毒和疱疹病毒的研究性药物。 根据协议,吉利德将获得开发和商业化新型小分子针对3个未公开靶标的独家全球权利。诺华将收到一笔未披露的首付款,在完成特定的开发和商业化里程碑后将获
简述艾滋病毒的病毒的特点
主要攻击人体的辅助T淋巴细胞系统,一旦侵入机体细胞,病毒将会和细胞整合在一起终生难以消除; 广泛存在于感染者的血液、精液、阴道分泌物、乳汁、脑脊液、有神经症状的脑组织液中,其中以血液、精液、阴道分泌物中浓度最高; 对外界环境的抵抗力较弱,对乙肝病毒有效的消毒方法对艾滋病病毒消毒也有效; 感
乙型流感病毒的病毒转化相关介绍
在流感流行季节采取以接种流感疫苗为主的综合措施加以预防,对控制流感的流行非常有效。”高峻璞说,广大群众了解流感的预防知识,主动接受免疫接种,保持健康的生活方式,将是人群预防流感的关键。而卫生部门则是流感防控和防控知识普及的核心阵地。为此,中华预防医学会发起、组织了这次流感防控会议,全国11所城市
什么是病毒?病毒是不是微生物?
病毒是生物界中最小的一类生物,没有完整的细胞结构、必须寄生在活细胞内、并且繁殖方式是“复制”的非细胞型生物,它依靠掠夺别人的营养生存,危害大。病毒的直径在10~300nm,因而大多数病毒只能在电子显微镜下看到,所以病毒是微生物的一种。
重要病毒测序完成:基因交换病毒很棘手
生物通报道:研究人员已经对来自大猩猩和黑猩猩的埃博拉病毒进行了首次测序,并且发现这种病毒比之前想象的更加易变。令人意外的是,他们还发现这种病毒的不同病毒株能够交换基因——这意味着开发一种成功疫苗将变得更难。 埃博拉病毒(Ebola virus)能导致发烧和出血,并且90%的感染者会死亡。自1976
Nature:武汉病毒所确认病毒进入细胞路径
自18年前的SARS爆发以来,在其天然宿主蝙蝠中发现了许多严重的急性呼吸综合症相关冠状病毒(SARSr-CoV)。先前的研究表明,其中一些蝙蝠SARSr-CoV具有感染人类的潜力。 2020年2月3日,中国科学院武汉病毒所石正丽团队在Nature 在线发表题为“A pneumonia outb
武汉病毒所发现蜱传脑炎病毒受体
蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)是一种由蜱虫传播的黄病毒,感染人可导致脑炎、脑膜炎等中枢神经系统疾病及死亡。TBEV发现于20世纪30年代,其细胞受体未知,阻碍着对病毒感染致病机制的理解和抗病毒药物的研发。 近期,中国科学院武汉病毒研究所/生
人类免疫缺陷病毒的病毒命名的介绍
1983年,巴黎巴斯德研究所专门研究逆转录病毒与癌症关系的法国病毒学家吕克·蒙塔尼埃(Luc Montagnier)及其研究组首次从一位罹患晚期卡波西氏肉瘤的年轻艾滋病病人的血液及淋巴结样品中分离得到一种新的逆转录病毒。经证实,这是一种新发现的病毒,巴斯德研究所将这种病毒称为“淋巴结病相关病毒”
汉坦病毒疫苗与抗病毒研究介绍
近年来HFRS疫苗的研制取得了较大的进展,有些类型的疫苗已经国家批准生产使用,有的已进入临床观察中,有的正在试验室研制和检测中。 中国已经研制成功并试生产的3种单价灭活疫苗经大面积人群接种观察,安全性较好,并具有较好的血清学和流行病学效果。近期(基础免疫后1年)和中期(基础免疫后2年)平均保护
病毒包装技术——病毒包装实验经验总结
第一,细胞状态、载体系统、目的基因对病毒包装影响(基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等)是三个主要影响病毒质量的因素。第二,细胞状态需要有丰富的细胞培养经验来判断,比如包装或转染感染前一定要重视细胞干净细微污染与否、饱满立体感是否好、铺板均匀细胞密度适中否等性状。另外转染时细胞的密度要十分注意,一般在
武汉病毒所人工合成杆状病毒
合成生物学技术作为21世纪的一门新兴生物学技术,推动了生命科学乃至整个自然科学领域的发展。病毒的人工合成为深入揭示病毒的本质和功能,以及病毒的遗传改造提供了强有力的工具。以往,对病毒人工合成的探索主要集中在RNA病毒上,而目前已知最大的RNA病毒基因组也仅有~30 kb。迄今为止,所报道成功合成
HIV病毒(艾滋病病毒)抗原检测介绍
第四代艾滋病病毒抗原抗体检测可以同时检出艾滋病病毒抗体和HIVp24抗原,广泛用于临床。与单纯抗体检测相比,提高了准确性,尤其是对慢性艾滋病病毒感染者的敏感性和特异性接近100%。此外,第四代艾滋病病毒检测将艾滋病窗口期缩短至14~21天,有助于早期发现艾滋病病毒感染。不足之处是,增加了非特异性
慢病毒和假病毒有什么区别
装甲病毒(假病毒)是将特定的核酸片段包裹于病毒外壳蛋白内,国外已广泛应用于核酸检测试剂、基因诊断试剂和科研试剂的对照。国内大多数声称装甲病毒(假病毒)的多为慢病毒,慢病毒仍有感染性;装甲病毒(假病毒)与慢病毒不同,由MS2噬菌体外壳蛋白包裹外源核酸片段,无感染性,无自主复制能力,生物安全性高,核酸稳
病毒包装技术6——腺病毒包装流程介绍
1. 细胞的准备 a) 复苏293细胞,传代培养1-2代,调整好细胞状态,务必4代以内完成转染实验。 b) 在转染前1天,用胰酶消化传代,将5×105细胞接种于6孔板或87.5px皿中,加入2ml完全培养基(DMEM+10%FBS+1%P/S+1%Glutamax),摇匀后置于5%
慢病毒和其他病毒的特征比较介绍
常用的病毒载体有腺病毒、逆转录病毒和慢病毒。逆转录病毒载体只能感染分裂期细胞,而且容量有限,腺病毒一般不能整合到染色体上,只能进行瞬时感染。与其它逆转录病毒相比,慢病毒(LV)具有可以感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段大,可以长期表达等显著优点。慢病毒不产生任何有效的细胞免疫应答,可作为一种体
病毒中和实验_固定抗血清-稀释病毒法
实验材料已知标准的抗病毒血清 (20抗体单位 0. 1 ml)试剂、试剂盒已知阴性血清 (56℃ 30 min 灭活)宿主:敏感细胞、敏感动物、鸡胚仪器、耗材细胞培养板水浴锅细胞培养箱实验步骤(以细胞培养为例):①用细胞维持液连续 10倍稀释病毒分离物10-1~10-8);②取 0. 6ml不同浓度
病毒包装技术——腺相关病毒(AAV)包装(二)
2.3 蛋白质分析 为了分析AAV Rep和Cap蛋白质表达,按照2.2部分所述进行质粒转染。转染后48小时,将培养物刮到冷PBS/Mg(PBS含有5mM MgCl2),细胞低速离心沉淀收获。细胞沉淀在冰上用200ml STM-NP缓冲液(25mM蔗糖,10mM Tris-HCl,pH8
病毒中和实验_固定病毒-稀释抗血清法
中和试验 (neutralization test)是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物,使病毒与抗体相互反应,再将混合物接种到敏感的宿主体内,然后测定残存的病毒感染力的一种方法。凡是能与病毒结合,并使其失去感染力的抗体称为中和抗体。因为病毒要依赖于活的宿主系统复制增殖,因此,中和试验必须
病毒包装技术——腺相关病毒(AAV)包装(一)
摘要:腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒, 因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。但是也可以通过新的辅助质粒(pH3和pH5),排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AA