CloningofsmallRNAswith5’phosphateand3’OHends3
Load your precipitated PCR samples into 2 consecutive lanes so as not to overload the lanes. For each different sample, I would run a separate ladder so that the gels can be cut and stained separately OR run individual gels for individual samples to avoid contamination.Stain the gels in 0.5X TE /EtBr in a clean container for 4 to 5 minutes.Cut out ~92 bp band with a clean razor blade and put band into a 0.5 ml microt......阅读全文
非同一般的非编码small－RNA，参与缺氧下的血管生成
非编码RNA是近年来转录组学研究的热点，其中，long non-coding RNA（lncRNA），microRNA，circularRNA是大家研究的非常多的非编码。其实，在small non-coding RNAs世界，除了我们熟知的microRNA之外，还包括piwi-interacti
内切酶列表：Enzymes－Generating－Blunt－Ends
Asymmetric sequences are indicated by *.Single letter code:R = G or A; Y = C or T; W = A or T; M = A or C; K = G or T; S = C or G;H = A, C or T;V = A,
内切酶列表：Enzymes－Generating－Blunt－Ends
Asymmetric sequences are indicated by *.Single letter code:R = G or A; Y = C or T; W = A or T; M = A or C; K = G or T; S = C or G;H = A, C or T;V = A,
RACE(rapidamplification－of－cDNA－ends)技术2
具体的实验步骤cDNA第一条链的合成：我们建议进行cDNA合成的对照反应，这样可以对样品的 cDNA的合成进行鉴定。加入各种试剂之后，在气浴中42度保温一个小时。注意： 在水浴或酒精浴中保温回减少反应体积，从而降低第一链的合成效率。将管放于冰上，以终止第一链的合成反应。直接进行第二链的合成。cDNA
RACE(rapidamplification－of－cDNA－ends)技术1
RACE技术的简介cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。完整的cDNA 序列可以通过文库的筛选和末端克隆技术获得。末端克隆技术是20世纪80年代发展起来的。RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆
PLoS－ONE：鹌鹑PIWI基因的克隆及其结合小RNA的鉴定
PIWI 蛋白能通过与多种内源非编码小RNA结合在表观水平和转录后水平调控基因的表达。然而在家禽中，PIWI蛋白的生物学功能及其结合小RNA的作用机制尚不清楚。扬州大学动物科学与技术学院陈国宏教授课题组对该作用机理进行了研究*，研究成果发表在2012年12月刊的PLoS ONE上。
Small－interfering－RNA（siRNA）的概念
Small interfering RNA（siRNA）：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。
DNA的酶学操作
DNA的酶学操作DNA Modifying Enzymes (Michael Blaber)Introduction to bacterial restriction/modification system. It provides very useful background knowledge
内切酶列表：Enzymes－Generating－3protruding－Ends
Asymmetric sequences are indicated by *.Single letter code:R = G or A; Y = C or T; W = A or T; M = A or C; K = G or T; S = C or G;H = A, C or T;V = A,
内切酶列表：Enzymes－Generating－5protruding－Ends
Asymmetric sequences are indicated by *.Single letter code:R = G or A; Y = C or T; W = A or T; M = A or C; K = G or T; S = C or G;H = A, C or T;V = A,
基因克隆技术（Gene－Cloning－Techniques）2
二、目的基因和载体的连接 获得目的基因后必须将其放在一定的载体内才能在宿主细胞内扩增或表达。目的基因与载体的连接及其后续的转化过程习惯上称为克隆（cloning）。由于目前很多基因都是利用PCR技术获得，因此这里先介绍PCR产物的克隆策略，然后再介绍其他的克隆方式。 （一
Cosmid－Cloning:－Cell－preparation,－DNA－packaging,－and－Cell－Transfection
Cosmid Cloning: Cell preparation, DNA packaging, and Cell TransfectionProtocol taken from Stratagene's Gigapack packaging extracts instruction man
基因克隆技术（Gene－Cloning－Techniques）2
二、目的基因和载体的连接获得目的基因后必须将其放在一定的载体内才能在宿主细胞内扩增或表达。目的基因与载体的连接及其后续的转化过程习惯上称为克隆（cloning）。由于目前很多基因都是利用PCR技术获得，因此这里先介绍PCR产物的克隆策略，然后再介绍其他的克隆方式。（一）PCR产物的克隆策略获得PCR
Small－scale－DNA－preps－for－Neurospora－crassa.
Molecular biology experiments often require preparation of small amounts of DNA from many samples. This abbreviated DNA isolation method yields an ave
Small－Scale－Yeast－Whole－Cell－Extract－for－IP
Grow 100 ml yeast cells in desired media overnight to an A600 of ~1.0 (0.6 to 1.2 works well). For growth in minimal media, 1 ml of a saturated overni
Small－Leucinerich－Proteoglycan－(SLRP)－molecules
The small leucine-rich proteoglycans (SLRPs) are a family of proteins that are present in extracellular matrix and that share in common multiple repea
构建小鼠基因组CRISPR导向RNAs文库
研究人员开发出一种方法，构建出了一个可诱导小鼠基因组全基因靶向突变的CRISPR导向RNA(gRNAs)综合文库。人们可利用这一文库来调查不同细胞类型中每个基因的作用。这一突破性的研究成果在线发表在12月23日的《自然生物技术》(Nature Biotechnology)杂志上。 CR
Polyadenylation－of－mRNA
Gene expression requires the coordination and integration of multiple processes, including transcription, splicing, polyadenylation, nucleocytoplasmic
Universal－RiboClone®－cDNA－Synthesis－System
Universal RiboClone® cDNA Synthesis SystemThe Universal RiboClone® cDNA Synthesis System contains the reagents required for the synthesis of double-st
非编码small－RNA参与缺氧下的血管生成（二）
接下来，Northern blot实验也验证了其中上调的tRNAVal(CAC)和tRNAGly(GCC)来源片段。此外，qPCR分析也表明，这些small RNAs在缺血后24hr，48hr和72hr时都显著提高。为了进一步探究胁迫诱导的tRNAs剪切过程，研究人员在缺血条件下对不同时间
Small－interfering－RNA（siRNA）是什么意思？
Small interfering RNA（siRNA）：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。
RNA干扰相关知识Small－interfering－RNA（siRNA）
Small interfering RNA（siRNA）：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。
Small：新荧光纳米探针助力肿瘤治疗
近日，刊登在国际杂志Small上的一篇研究论文中，来自新加坡A*STAR研究所的研究人员开发了一种混合金属聚合物纳米颗粒，其在肿瘤细胞周围特殊的酸性环境下就会发光用以指示肿瘤所在，因此可以鉴别任何肿瘤的非特异性探针或许就可以用于监测癌症的发病部位、扩散及其疗法的有效性。 癌性肿瘤pH通常比正常
General－Reference
Units1 mg = 10-3 g1 ug = 10-6 g1 ng = 10-9 g1 pg = 10-12 g1 kb of double stranded DNA = 660 kD 1 kb of single stranded DNA = 330 kD 1 kb of single str
Genetics：记忆形成中小RNAs的巨大作用
近期，一项刊登于国际杂志Genetics上的研究论文中，来自斯克利普斯研究所的研究人员通过研究发现，一种名为“microRNA”的遗传物质或在动物模型记忆形成的过程中扮演不同的角色，在某些情况下microRNAs会增强机体记忆，但有些时候却会减弱机体的记忆力。 研究者Ron Davis教授指出
RNase－inhibitors－and－RNases
Question 1.What are the differences among RNase H, RNase A, RNase B and RNase C?2.In your cDNA kits, RNase H is added in the second strand reaction t
Selfcircularization－of－Linear－DNA
In a microcentrifuge tube prepare a solution of linear DNA (25-50ng) in deionized water or TE buffer (10-35µl).Add:10X ligation buffer 5µl,50% PEG 400
Phosphatidylinositol－4Kinase－and－Phosphatidylinositol－4Phosphate－5K...
Phosphatidylinositol 4-Kinase and Phosphatidylinositol 4-Phosphate 5-Kinase AssaysInositol lipid kinases are perhaps the easiest and most straightforw
用CRISPR/Cas9对CART细胞进行多重基因编辑（二）
细胞系 Cell linesThe following CD19-expressing immortalized cell lines were used: Raji (Burkitt’s lymphoma cell line, ATCC-CCL86),Daudi (B lymphoblast ce
PCR
PCRPolymerase Chain Reaction1) Add the following to a microfuge tube:10 ul reaction buffer1 ul 15 uM forward primer1 ul 15 uM reverse primer1 ul templ