RNA酶保护试验
RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点：1． 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失，使灵敏度下降，而RPA将所有杂交体系进行电泳，故损失小，提高了灵敏度。2． 由于PCR扩增过程中效率不均一和反应“平台”问题，基于PCR产物量进行分析所得数据的可靠性将下降，而RPA没有扩增过程，因此，分析的数据真实性较高。3． 由于与反义RNA探针杂交的样品RNA仅为该RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA样品仍可进行分析。4． 步骤较少，耗时短。与Northern杂交相比，省去了转膜和洗膜的过程。5． RNA-RNA杂交体稳定性......阅读全文
避免RNA酶污染的方法
RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的RNase完全失活。为了获得高质量的真核细胞mRNA，必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度
RNA聚合酶的分类
通常可根据生物的类别，将RNA聚合酶分为原核生物RNA聚合酶、真核生物RNA聚合酶。原核生物和真核生物的RNA聚合酶有共同特点，但在结构、组成和性质等方面又不尽相同。（1）原核生物RNA聚合酶 研究得最清楚的是大肠杆菌RNA聚合酶。该酶是由五种亚基组成的六聚体（α2ββ'ωσ）分子量约500
用T4－RNA－连接酶连接－RNA－分子
实验材料 T4RNA连接酶供体RNA受体RNA试剂、试剂盒 10XT4RNA连接酶缓冲液无核酸酶的水FEGRNA酶抑制剂实验步骤 一材料与设备1)10XT4RNA 连接酶缓冲液：50 mmol/LTris (pH7,8)，l0 mmol/L MgCl2，5 mmol/LDTT,1 mmol/L AT
用T4－RNA－连接酶连接－RNA－分子
实验材料 T4RNA连接酶 供体RNA 受体RNA 试剂、试剂盒 10XT4RNA连接酶缓冲液
提质粒后有RNA污染，可以加点RNA酶处理吗
实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒，转染细胞没问题。我觉得只要是注意以下2点就可以了：1，注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染，收集菌体沉淀时防止菌液散落，经常用75%的乙醇擦拭手套。2，最后洗脱时最好使用无内毒素的水，我们是用注射用水的。无论是小提还是大提我们都是用的日常型
提取质粒还没加Rna酶为何电泳中不见Rna
一般来说，提取质粒所用的试剂盒已经加入了RNase，所以电泳跑胶不会出现RNA条带。即使是采用的人工方法提取，也不可避免的空气中，汗液，唾液等中丰富的RNase的降解。此外，按照你的问题来看，你应该是再提取质粒，提取质粒然后电泳渴望观察到RNA的条带，殊不知质粒分子一般较大，其所用的琼脂糖胶浓度一般
3.6.2－用T4－RNA－连接酶连接－RNA－分子
T4RNA 连接酶已经用来生成很多位点特异修饰的 RNA，尤其是寡核苷酸修饰和用反义密码 tRNA 修饰的 RNA。另外，T4RNA 连接酶还可用于 RNA/DNA 分子内/分子间连接、甲链寡脱氧核苷酸的连接、克隆全长 cDNA 及将非天然氨基酸掺入蛋白分子中。实验材料T4RNA连接酶供体RNA受体
RNA聚合酶的催化特点
RNA聚合酶催化RNA的合成，其与DNA聚合酶有许多相同的催化特点：①以DNA为模板；②催化核苷酸通过聚合反应合成核酸；③聚合反应是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯键的反应；④以3’→5’方向阅读模板，5’→3’方向合成核酸；⑤按照碱基配对原则忠实转录模板序列。
5.5－RNA－SI－核酸酶作图
SI 核酸酶是种内切酶，它是从米曲霉米曲霉 (Aspergillusoryzae) 中分离得到。它能降解单链核酸，却不能降解双链核酸。此外，它能高灵敏度地降解局部错配的双链分子，即使只有一对碱基错配，也能因 S1 核酸酶的切割而被检测出来。用 S1 核酸酶来识别和切割错配或未复性的区域，再通过变性内
RNA聚合酶的功能特点
RNA聚合酶（RNA polymerase）是以一条DNA链或RNA为模板，三磷酸核糖核苷为底物、通过磷酸二酯键而聚合的合成RNA的酶，因为在细胞内与基因DNA的遗传信息转录为RNA有关，所以也称转录酶。
RNA聚合酶的特点介绍
RNA聚合酶催化RNA的合成，其与DNA聚合酶有许多相同的催化特点： ①以DNA为模板； ②催化核苷酸通过聚合反应合成核酸； ③聚合反应是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯键的反应； ④以3’→5’方向阅读模板，5’→3’方向合成核酸； ⑤按照碱基配对原则忠实转录模板序列。
RNA酶污染的预防措施
RNA的的化学性质比DNA活跃得多。RNA分子上紧邻磷酸二脂键的2′羟基基团能直接被RNA酶利用来作为活性因子，从而使得RNases无需金属离子就能发挥活性。由于RNA酶在环境中广泛存在，特别是RNase A，结构极其稳定，不能通过高温高压灭菌失活，因而极难消除，对保持RNA样品的完整性构成极大
细胞化学词汇RNA复制酶（RdRp）
即“RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）”RNA聚合酶的一种，存在于大部分RNA病毒中。和细胞中用来转录的RNA聚合酶（DdRp）不同，RNA复制酶的模板是RNA分子。某些RNA复制酶还有解旋酶活性，正链RNA或双链RNA病毒复制时都会产生双链RNA，RNA复制酶可以解开这些双链，保证RNA的复制顺
RNA聚合酶的基本介绍
RNA聚合酶（RNA polymerase）：以一条DNA链或RNA为模板催化由核苷-5′-三磷酸合成RNA的酶。 催化转录的RNA聚合酶是一种由多个蛋白亚基组成的复合酶。如大肠杆菌的 RNA聚合酶有五个亚基组成，其分子量为480000，含有α，β，β’，σ，ω等5种不同的多肽，其中α为两个分
RNA聚合酶的催化特点
RNA聚合酶催化RNA的合成，其与DNA聚合酶有许多相同的催化特点：①以DNA为模板；②催化核苷酸通过聚合反应合成核酸；③聚合反应是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯键的反应；④以3’→5’方向阅读模板，5’→3’方向合成核酸；⑤按照碱基配对原则忠实转录模板序列。
RNA聚合酶的参与过程
该酶需要四种核糖核苷酸三磷酸（NTP：ATP、GTP、CTP、UTP）作为RNA聚合酶的底物，DNA为模板，二价金属离子Mg2+、Mn2+是该酶的必需辅因子。其催化的反应表示为：（NMP）n+NTP→（NMP）n+1+PPi。RNA链的合成方向也是5’→3'，第一个核苷酸带有3个磷酸基。其后
Realtime－PCR实验注意事项（防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...2
[注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。另外，提取上清这步一定要小心，靠近沉淀的部分一定要舍得不要，要不然会有蛋白质污染，影响比值2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。总mRNA的提取(自己的经验)一、关
Realtime－PCR实验注意事项（防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...1
实验中的一些好习惯 加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均 移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性 一定要记着关水浴箱，切记切记 多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了 所有的试剂都自己配
Realtime－PCR实验注意事项（防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...3
DEPC处理方法如下：1.DEPC处理（1）DEPC水：100ml超纯水加入0.2ml DEPC，充分混匀，高压灭菌。（2）Tip头(枪头）、EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材（包括1ml、200μl、20μl Tip头；EP管和PCR反应管等）：用0.1%的DEPC水（1000 m
RNA酶的用途及破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法
RNA酶又名核糖核酸酶，为白色冻干粉末 ，可以杀灭许多肿瘤细胞系，可以抑制导致艾滋病的HIV-1病毒在细胞中的复制，可以治疗乙肝。RNA酶用途说明：生化研究，测定核酸的结构RNase 保护检测去除非特异结合的RNA分析RNA 序列水解蛋白样品中的RNA纯化DNA此外，它具有显著的细胞毒性，可以杀灭许
RNA酶的用途及破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法
RNA酶又名核糖核酸酶，为白色冻干粉末 ，可以杀灭许多肿瘤细胞系，可以抑制导致艾滋病的HIV-1病毒在细胞中的复制，可以治疗乙肝。RNA酶用途说明：生化研究，测定核酸的结构RNase 保护检测去除非特异结合的RNA分析RNA 序列水解蛋白样品中的RNA纯化DNA此外，它具有显著的细胞毒性，可以杀灭许
RNA连接酶与DNA连接酶的区别
真核细胞RNA前体形成成熟的功能RNA分子时,需要经过剪切和连接过程.RNA连接酶可能在此过程中起连接作用.真核细胞RNA前体形成成熟的功能RNA分子时,需要经过剪切和连接过程.RNA连接酶可能在此过程中起连接作用.RNA连接酶与DNA连接酶的区别RNA聚合酶是在转录的时候，以核苷酸为原料，DNA的
RNA连接酶与DNA连接酶的区别
RNA连接酶与DNA连接酶的区别RNA聚合酶是在转录的时候，以核苷酸为原料，DNA的一条链为模板，合成RNA的酶RNA连接酶是可以识别特定RNA序列，将两端RNA链接起来的酶
通过记录RNA聚合酶观察早期RNA转录动力学
科学家们通过记录RNA聚合酶在何时何地通过与DNA序列结合启动转录，观察了早期RNA转录动力学。 生命的活动是通过蛋白质的制造而发生的，蛋白质赋予我们的细胞结构和功能。细胞蛋白质从DNA编码的基因指令中获得行进顺序，他们的序列首先被复制并在一个叫做转录的多步骤过程中被制造成RNA。 科罗拉多
RNA的制备(mRNA的分离和RNA酶活性的控制)3
A、细胞裂解a．单层细胞的裂解a)吸出培养液，以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞，重复1次，将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上，再将铝板置于冰盘上。b)直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液， 并使之遍布整个平板的
RNA的制备(mRNA的分离和RNA酶活性的控制)2
（一）实验程序如不谨慎操作，外源性RNA酶可以通过下述途径污染RNA制品：（１）玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA〈, /SPAN〉酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染，使用前必须于180℃干烤８小时或更
异相酶免疫试验和均相酶免疫试验
Ag为待测抗原，AgAb-E为结合标记物，Ab-E为游离标记物。若抗原-抗体反应影响标记物中酶的活性,如酶活性消失，即结合标记物(AgAb-E)无酶活性，游离标记物(Ab-E)有酶活性； (1) 检测时不需分离结合标记物(AgAb-E)和游离标记物(Ab-E),检测体系中标记物酶活性(Ab-E
核糖核酸酶保护分析
一、体外转录在无菌1.5 ml 微型离心管中，结合以下内容：4 ul 5倍转录缓冲液2 ul 0.1 M DTT4 ul 2.5 MM NTP（A，C，G）0.8 ul RNA酶抑制剂（25 U/ul）RNA酶抑制剂（Promega）中100 UM冷UTP1 ul/ug UL线性DNA模板5 ul
DNA酶保护分析的方法用途
中文名称DNA酶保护分析英文名称DNase protection assay定 义主要用来检测染色质结构与功能状态的方法。当染色质结构致密，DNA被组蛋白压缩很紧时，基因是不表达的，同时也对DNA酶不敏感。反之，结构蓬松、活跃进行基因表达的染色质，则易遭DNA酶的降解。应用学科生物化学与分子生物学
如何使用继电保护测试仪做线路保护试验？
如何使用继电保护测试仪做线路保护试验：如何使用继电保护测试仪做线路保护试验？胜绪电气总结了继电保护测试仪的八大测试项目，请看下文。一、阻抗定值校验：继电保护测试仪测试项目——阻抗定值校验是用来校验距离保护各段在各种短路状态下的动作整定值。将保护装置定值单中的各个试验参数，如各段阻抗整定值、试验电流、