RNA的制备(mRNA的分离和RNA酶活性的控制)3
A、细胞裂解a．单层细胞的裂解a)吸出培养液，以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞，重复1次，将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上，再将铝板置于冰盘上。b)直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液， 并使之遍布整个平板的表面。RNA提取缓冲注液0.14mol/L NaCl1.5mmol/L MgCl210mmol/L Tris.Cl(pH8.6)0.5％NP-401mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）100单位/ml胎盘RNA酶抑制剂或20mmol/L氧钒核糖核苷复合物c)加0.5ml蛋白酶消化缓冲液，用刮棒混匀粘稠状裂解物并将其刮到平板的边缘。蛋白酶消化缓冲液0.2mol/L Tris.Cl(pH8.0)25mmol/L EDTA(pH8.0)0.3mol/L NaCl2％ SDSd)用装有21号针头的皮下注射器抽吸细胞裂解物，再将其注入聚丙烯管内。......阅读全文
RNA的制备
来源于任何细胞的RNA都可以通过反转录酶的作用拷贝成双链DNA并克隆化，获得相应的于特定细胞来源的cDNA文库。因此，RNA制备的意义有两个方面 * 获得特定细胞来源的cDNA文库，克隆目的基因 * 分析基因的表达，阐明基因调控的特性，了解从基因转录产生RNA的结构，数量，水平及合成的速率抑制RNA
细菌RNA制备实验
革兰氏阴性细菌中提取 革兰氏阳性细菌中提取 实验材料 RNA 试
RNA干扰制备方法
化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的siRNA的情况
细菌RNA制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 STET氯仿乙酸钠氯化铯无水乙醇EDTA仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 培养100 ml 大肠杆菌或500 ml 蓝细菌至对数生长期，加入1/20体积终止缓冲液，置于冰上。2. 于4℃用JA-10转子17 700 g 离心5 min 收集细胞。3.
反义RNA的制备实验
实验材料 限制性内切核酸酶酶水解模板 DNA大肠杆菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ试剂、试剂盒 氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液转录缓冲液Tris-Cl盐酸亚精胺NaCl胎盘RNase抑制物牛血清白蛋白RNA聚合酶DEPC仪器、耗材 DNA合成仪琼脂糖凝胶电泳微量离心管实验步骤 一、化学合成的 RN
植物RNA的制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 TELiCl无水乙醇乙酸钠氯仿仪器、耗材 匀浆器离心管离心机水浴锅实验步骤 1. 研钵和研棒先用液氮冷却，称出15 g 冻结植物组织于研钵中（加液氮保持冻结）。2. 用研棒磨成粉末，立即转移到一个盛有150 ml，研磨缓冲液和50 ml TLE缓冲液平衡酚的500
真菌总－RNA－的制备
试剂、试剂盒 酚氯仿异戊醇 12mol L 氯化锂 3mol L 乙酸钠 乙醇 DEPC 处理的水仪器、耗材 水浴 低温高速离心机实验步骤 一 材料与设备1) 酚：氯仿：异戊醇 (25：24:1)。2) 氯仿：异戊醇 (2：1)3)12mol/L 氯化锂。4)3mol/L 乙酸钠。5)70% 乙醇。
反义RNA的制备实验
实验材料 限制性内切核酸酶酶水解 模板 DNA 大肠杆菌 DNA 多聚酶 胰 DNaseⅠ 试剂、试剂盒
酵母总RNA的制备
试剂、试剂盒 AE 缓冲液。 苯酚 10%SDS 酚 氯仿 无水乙醇 乙醇. 3mol L 乙酸钠 无 RNase
poly（A）+－RNA的制备实验
利用cND A微阵列技术可用于：（1）并行分析检测成千上万个基因的表达情况；（2）在新基因的发现、基因组功能的研究、疾病的预测和诊断、药物靶标的确定和药物毒性预测等多方面发挥着重要的作用。实验方法原理大多数的信使RNA（mRNA）都带有poly（A）尾，而结构RNA没有。使用本工作方案，可以将带po
植物RNA的制备实验
酚/SDS法 实验材料 RNA 试剂、试剂盒
酵母总RNA的制备
试剂、试剂盒 AE 缓冲液。 苯酚 10%SDS 酚 氯仿 无水乙醇 乙醇. 3mol L 乙酸钠 无 RNase 的水仪器、耗材 髙速离心机实验步骤 一 材料与设备1)AE 缓冲液：50 mmol/L 乙酸钠 (PH5.3)，lOmmol/LEDTA。2) 苯酚 (用 AE 缓冲液预先平衡）。3)
poly（A）+－RNA的制备实验
实验方法原理 大多数的信使RNA（mRNA）都带有poly（A）尾，而结构RNA没有。使用本工作方案，可以将带poly（A）的RNA从rRNA和tRNA中分离出来。 实验材料
反义RNA的制备实验
RNA 也可以由线状 DNA 为模板，通过 RNA 聚合酶（如T3、T7 或 SP6 ) 在体外合成。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验材料限制性内切核酸酶酶水解模板 DNA大肠杆菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ试剂、试剂盒氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液转录缓冲液Tris-Cl盐
poly（A）+－RNA的制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 NaOH寡聚脱氧胸苷纤维素poly（A）样品缓冲液LiClEDTATE乙酸钠仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的层析柱，然后用水冲洗。2. 取0.5 g oligo（dT）纤维素干粉加1 ml 0.1 m
真菌总－RNA－的制备
真菌总 RNA 的制备 试剂、试剂盒 酚 氯仿 异戊醇 12mol L 氯化锂
真核细胞总RNA的制备（Total－RNA－Isolation）1
从细胞中分离RNA的纯度于完整性对于许多分子生物学实验至关重要。如Northern印迹与杂交分析、寡聚（dT）纤维素选择分离 mRNA，cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上决定于RNA的质量。RNA分离的最关键因素是尽量减少RNA酶的污染。快速一步法提取总RNA组织及有核细胞在匀浆过程中
真核细胞总RNA的制备（Total－RNA－Isolation）2
Total RNA Isolation Guanidine-based isolation Objective: To obtain total RNA from zebrafish embryos. Required Materials Denaturing Solution
小规模快速制备果蝇RNA
小规模快速制备果蝇RNA 试剂、试剂盒 Northern 样品缓冲液 lmol L 乙酸
酚/SDS法制备植物RNA
试剂、试剂盒 液氮 研磨缓冲液 TLE 缓冲液平衡酚) 氯仿 IiCl 溶液 (DEPC 处理） 乙酸钠 (DEPC 处理）
小规模快速制备果蝇RNA
试剂、试剂盒 Northern 样品缓冲液 lmol L 乙酸 酚氯仿 DEPC 处理的水 GHCL 溶液 无水乙醇实验步骤 一 材料与设备1)Northern 样品缓冲液：2.2mol/L 甲醛，1mol/LMOPS，50% 甲酰胺2)lmol/L 乙酸3) 酚：氯仿（1:1)4)DEPC 处理的
组织和细胞RNA的制备
一、 组织和细胞总RNA提取：异硫氰酸胍法（一）试剂准备1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助
RNA的制备方法步骤1
来源于任何细胞的RNA都可以通过反转录酶的作用拷贝成双链DNA并克隆化，获得相应的于特定细胞来源的cDNA文库。因此，RNA制备的意义有两个方面* 获得特定细胞来源的cDNA文库，克隆目的基因* 分析基因的表达，阐明基因调控的特性，了解从基因转录产生RNA的结构，数量，水平及合成的速率抑制RNA酶活
2.6－真菌总－RNA－的制备
试剂、试剂盒酚氯仿异戊醇 12mol L 氯化锂3mol L 乙酸钠乙醇DEPC 处理的水仪器、耗材水浴低温高速离心机实验步骤一 材料与设备1) 酚：氯仿：异戊醇 (25：24:1)。2) 氯仿：异戊醇 (2：1)3)12mol/L 氯化锂。4)3mol/L 乙酸钠。5)70% 乙醇。6)DEPC
酵母菌RNA制备实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 TES酸性酚氯仿乙酸钠乙醇仪器、耗材 离心管离心机摇床实验步骤 1. 酵母细胞在10 ml 培养基中生长至指数中期（OD600=1.0）。 2. 将培养液转移到50 ml，离心管，于4℃，1 500 g 离心3 min。 3. 弃上清，菌体沉淀用1 ml 冰冷的水
酚/SDS法制备植物RNA
试剂、试剂盒 液氮 研磨缓冲液TLE 缓冲液平衡酚)氯仿IiCl 溶液 (DEPC 处理）乙酸钠 (DEPC 处理） 无水乙醇DEPC 处理水仪器、耗材 Folytron 匀浆器（BrinkmarmPT10 35)实验步骤 一 材料与设备1) 液氮2) 研磨缓冲液 18mol/LTris，0.09m
2.5.1－酵母总RNA的制备
试剂、试剂盒AE 缓冲液。 苯酚10%SDS酚氯仿 无水乙醇乙醇. 3mol L 乙酸钠无 RNase 的水仪器、耗材髙速离心机实验步骤一 材料与设备1)AE 缓冲液：50 mmol/L 乙酸钠 (PH5.3)，lOmmol/LEDTA。2) 苯酚 (用 AE 缓冲液预先平衡）。3)10%SDS4)
RNA制备的问题与解答
1、塑料制品、玻璃和金属物品的处理(a)塑料制品：尽可能使用无菌，一次性塑料制品。已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过，通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理方法如下：(1)在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意：
FFPE样本核酸（DNA/RNA）制备
福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片的存档代表了珍贵且来源广泛的生物医学研究材料。随着越来越多的研究人员转向 FFPE 样品的分子分析，开发特定的操作步骤，考虑这些样品的独特性质就变得越来越重要。QIAGEN 在 FFPE 样本纯化及下游检测整个流程中都提供完善的解决方案。QIAamp
果蝇RNA的大规模制备
试剂、试剂盒 5mol LLiCl 70% 乙醇 酚：氯仿（1:1) 20 mg ml 蛋白酶 K 95%(V V) 乙醇 .RNA 匀浆缓冲液 3mol L 乙酸钠实验步骤 一 材料与设备1)5mol/L LiCl2)70% 乙醇：70% (V/V)Ethanol，l0 mmol/L Tris-H