测定蛋白质与DNA结合位点的电泳迁移率变动分析法

放射性标记DNA探针的制备l 聚丙烯酰胺凝胶的制备1.按照(三)中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小,200bp左右的片段需要4~5%的凝胶,小于100bp的片段应灌制6~8%的凝胶。 l DNA的标记1.用两种限制性内切酶从10μg质粒上将待测DNA片段切下。注意务必使至少一种酶酶切后产生5’凸出末端。酶切体系终体积50μl,在适宜的酶反应缓冲液条件下反应1小时。2.向酶切反应混合液中加入[α-32P]dATP(约10μCi/μl)(若5’凸末端含T残基)  ......阅读全文

测定蛋白质与DNA结合位点的电泳迁移率变动分析法

放射性标记DNA探针的制备l      聚丙烯酰胺凝胶的制备1.按照(三)中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小,200bp左右的片段需要4~5%的凝胶,小于100bp的片段应灌制6~8%的凝胶。 l      DN

蛋白质结合位点的定义

分子中能与配体形成稳定相互作用的特定部位。蛋白质的结合位点通常是由多肽链上的一些相互分离的氨基酸残基通过肽链折叠在空间上聚集到一起,形成特定的空间排布方式。

DNA-酶-I-足迹法对-DNA-上的蛋白质结合位点作图实验

实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分试剂、试剂盒 细胞匀浆缓冲液细胞重悬缓冲液细胞淋洗缓冲液乙醇Ficoll 400甲酰胺染色液MgCl2 CaCl2 溶液NaClNonidetP-40酚:氯仿磷酸盐缓冲液聚乙烯醇终止液组织匀浆液组织重悬缓冲液台盼蓝染料DNA 酶 I

DNA-酶-I-足迹法对-DNA-上的蛋白质结合位点作图实验

DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验             实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分

DNA-酶-I-足迹法对-DNA-上的蛋白质结合位点作图实验

本方案介绍在放射性标记的 DNA 片段上确定蛋白质结合位点的作图方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羟自由基断裂 DNA。如果希望得到优化足迹法反应的建议,请参见本方案最后部分的疑难解析以及优化 DNA 酶 I 足迹法反应的栏目。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)

甲基化干扰法鉴定与蛋白结合的DNA位点

放射性标记DNA探针的制备l      聚丙烯酰胺凝胶的制备1.按照(三)中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小,200bp左右的片段需要4~5%的凝胶,小于100bp的片段应灌制6~8%的凝胶。 l      DN

核糖体结合位点的蛋白质构成

  核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoproteinparticle),主要由rRNA和蛋白质构成,其唯一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。  构成核糖体的蛋白质。大肠杆菌核糖体蛋白的初级结构均被确定。大肠杆菌核糖体的30S

核糖体结合位点的蛋白质构成

核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoproteinparticle),主要由rRNA和蛋白质构成,其唯一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。构成核糖体的蛋白质。大肠杆菌核糖体蛋白的初级结构均被确定。大肠杆菌核糖体的30S亚基含S

核糖体结合位点的蛋白质构成的介绍

  核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoproteinparticle),主要由rRNA和蛋白质构成,其唯一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。  构成核糖体的蛋白质。大肠杆菌核糖体蛋白的初级结构均被确定。大肠杆菌核糖体的30S

核糖体结合位点的蛋白质合成的介绍

  真核细胞中,核糖体进行蛋白质合成时,既可以游离在细胞质中,称为游离核糖体(freeribosome)。也可以附着在内质网的表面,称为膜旁核糖体或附着核糖体。参与构成RER,称为固着核糖体或膜旁核糖体,是以大亚基圆锥形部与膜接着游离核糖体(freeribosome)。分布在线粒体中的核糖体,比一般

核糖体结合位点

核糖体结合位点(ribosomebinding site,简称RBS),是指mRNA的起始AUG上游约8~13核苷酸处,存在一段由4~9个核苷酸组成的共有序列-AGGAGG-,可被16SrRNA通过碱基互补精确识别的序列。

研究发现aTF与缺刻DNA的结合位点并建立小分子检测平台

  中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室微生物生理代谢研究组首次发现原核生物別构转录因子(allosteric transcription factor,aTF)在体外能够结合缺刻的DNA结合序列,并利用这一发现建立全新的小分子检测方法平台。相关工作以长文(Research Art

骨桥蛋白的结合位点的介绍

  OPN分布广泛并受多种因素的调控,能与许多物质结合。  (1)结合多种整合素受体:已发现αvβ1、αvβ3、αvβ5、α5β1、α8β1、α4β1和α9β1等7种整合素能与OPN结合,2个α4β1整合素结合部位位于OPN的N-末端凝血酶片酸的38 aa结构域上,α9β1能结合凝血酶断裂的OPN

结合DNA的蛋白质

结构蛋白可与DNA结合,是非专一性DNA-蛋白质交互作用的常见例子。染色体中的结构蛋白与DNA组合成复合物,使DNA组织成紧密结实的染色质构造。对真核生物来说,染色质是由脱DNA与一种称为组织蛋白的小型碱性蛋白质所组合而成;而原核生物体内的此种结构,则掺杂了多种类型的蛋白质。DNA可在组织蛋白的表面

精确转录因子结合位点绘图

  “掌握转录因子活动控制高等生物发育的基本原理非常有用,”纽约大学生物学系教授Stephen Small说。“更具体地讲,这项机理的发现为由于转录因子受到干扰的突变基因导致胚胎发育深层破坏和一系列疾病提供了一个潜在的治疗途径。”  这项研究发表于《Genes & Development》,参与研究

转录因子定义和结合位点

定义人类金属巯基因调节区转录因子(transcription factor)是一群能与基因5`端上游特定序列专一性结合,从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。结合位点转录因子的结合位点(transcription factor binding site,TFBS)是转录因子

电泳迁移率变动分析

中文名电泳迁移率变动分析外文名electrophoretic mobility shift assay定义用放射性同位素标记待检测的片段(即探针DNA),然后与细胞提取物共温育,形成DNA-蛋白复合物,将该复合物加到非变性聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳。

DNA结合分析法的功能特点

中文名称DNA结合分析英文名称DNA-binding assay定  义一种研究DNA结合蛋白与其DNA靶序列相互作用的方法。将蛋白质与标记的DNA片段在一定条件下作用,进行非变性凝胶电泳,可以检测到DNA与蛋白质结合后电泳迁移率降低的条带。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级

核糖体结合位点的定义

核糖体结合位点(ribosomebinding site,简称RBS),是指mRNA的起始AUG上游约8~13核苷酸处,存在一段由4~9个核苷酸组成的共有序列-AGGAGG-,可被16SrRNA通过碱基互补精确识别的序列。

核糖体结合位点的简介

  核糖体结合位点是指起始密码子AUG上游的一段富含嘌呤的非翻译区。包含SD(Shine-Dalgarno)序列。  RBS序列(生物):所谓RBS,是指起始密码子AUG上游的一段非翻译区.在RBS中有SD(Shine-Dalg-arno)序列,长度一般为5个核苷酸,富含 G,A,该序列与核糖体16

核糖体结合位点的形成

  真核细胞的大小亚基是在核中形成的,在核仁部位rDNA转录出45SrRNA,是rRNA的前体分子,与胞质运来的蛋白质结合,再进行加工,经酶裂解成28S,18S和5.8S的rRNA,而5SrRNA则在核仁外合成28S,5.8S及5SrRNA与蛋白质结合,形成RNP分子团。为大亚基前体,分散在核仁颗粒

核糖体结合位点的形成

真核细胞的大小亚基是在核中形成的,在核仁部位rDNA转录出45SrRNA,是rRNA的前体分子,与胞质运来的蛋白质结合,再进行加工,经酶裂解成28S,18S和5.8S的rRNA,而5SrRNA则在核仁外合成28S,5.8S及5SrRNA与蛋白质结合,形成RNP分子团。为大亚基前体,分散在核仁颗粒区,

α微管蛋白:新的药物结合位点

  微管(Microtubule)是抗肿瘤药物研发的重要靶点。微管是“细胞的骨架”主要成分之一,在许多细胞重要事件中起着关键作用。微管是由α-和β-微管蛋白(Tubulin)异二聚体可逆地组装成而成的线性管装结构(图1)。  图1:微管蛋白已知的六个结合位点及微管蛋白组装形成微管示意图  目前,微管

转录因子的结合位点的相关介绍

  转录因子的结合位点(transcription factor binding site,TFBS)是转录因子调节基因表达时,与基因模板链结合的区域。按照常识,转录因子(transcription factor)的结合位点一般应该分布在基因的前端,但是,新的研究发现,人21和22号染色体上,只有2

核糖体结合位点生物合成

抗体是由核糖体合成细胞内定位核糖体的功能就是将mRNA上的遗传密码(核苷酸顺序)翻译成多肽链上的氨基酸顺序。因此,它是肽链的装配机,即细胞内蛋白质合成的场所,细胞合成的蛋白质可分为两类:外输性蛋白和内源性蛋白。1.外输性蛋白:主要在固着核糖体上合成,分泌到细胞外发挥作用,如抗体蛋白、蛋白类激素、酶原

核糖体结合位点理化特性

核糖体的主要成份为蛋白质和rRNA,二者比例在原核细胞中为1.5:1,在真核细胞中为1:1,每个亚基中,以一条或二条高度折叠的rRNA为骨架,将几十种蛋白质组织起来,紧密结合,使rRNA大部分围在内部,小部分露在表面。由于RNA的磷酸基带负电荷超过了蛋白质带的正电荷/负电性,易与阳离子和碱性染料结合

核糖体结合位点的分类介绍

  按核糖体存在的部位可分为三种类型:细胞质核糖体、线粒体核糖体、叶绿体核糖体。  按存在的生物类型可分为两种类型:真核生物核糖体和原核生物核糖体。  原核细胞的核糖体较小,沉降系数为70S,相对分子质量为2.5x103kDa,由50S和30S两个亚基组成;而真核细胞的核糖体体积较大,沉降系数是80

核糖体结合位点的生物合成

  抗体是由核糖体合成  细胞内定位  核糖体的功能就是将mRNA上的遗传密码(核苷酸顺序)翻译成多肽链上的氨基酸顺序。因此,它是肽链的装配机,即细胞内蛋白质合成的场所,细胞合成的蛋白质可分为两类:外输性蛋白和内源性蛋白。  1.外输性蛋白:主要在固着核糖体上合成,分泌到细胞外发挥作用,如抗体蛋白、

核糖体结合位点的理化特性

  核糖体的主要成份为蛋白质和rRNA,二者比例在原核细胞中为1.5:1,在真核细胞中为1:1,每个亚基中,以一条或二条高度折叠的rRNA为骨架,将几十种蛋白质组织起来,紧密结合,使rRNA大部分围在内部,小部分露在表面。由于RNA的磷酸基带负电荷超过了蛋白质带的正电荷[/ur颂翘逑?颂翘逑郧康肿u

核糖体结合位点的相关介绍

  核糖体是最小的细胞器,光镜下见不到的结构。在1953年由Ribinson和Broun用电镜观察植物细胞时发现胞质中存在一种颗粒物质。1955年Palade在动物细胞中也看到同样的颗粒,进一步研究了这些颗粒的化学成份和结构。1958年Roberts根据化学成份命名为核糖核蛋白体,简称核糖体Ribo