聚合酶链式反应(PCR)
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是:将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。 PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段,并能轻易在皮克(pg)水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。因此,PCR技术一......阅读全文
原位聚合酶链式反应和原位反转录聚合酶链式反应操作
(一)、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 (二)、操作流程 1、原位PCR步骤 1)预处理: (1)切片常规脱蜡; (2)0.2mol/L HCl处理10min; (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃1
原位聚合酶链式反应原位反转录聚合酶链式反应操作规程
(一)、 仪器 设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 (二)、操作流程 1、原位PCR步骤 1)预处理: (1)切片常规脱蜡; (2)0.2mol/L HCl处理10min; (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min; (4)Nase消化组织37℃ 30m
原位聚合酶链式反应原位反转录聚合酶链式反应操作规程
(一)、仪器设备 英国 Thermo Hybaid 原位 PCR 仪。 (二)、操作流程 1 、原位 PCR 步骤 1 )预处理: ( 1 )切片常规脱蜡; ( 2 ) 0.2mol/L HCl 处理 10min ; (
PCR的历史
“聚合酶链式反应” 的设想由Kary Mullis于1983年提出,当时,他在加利福利亚Cetus公司人类遗传研究室任职;他的想法是,利用一种人工的方法、相同程序循环与特定的酶(DNA聚合酶)来扩增特定的DNA片段。此后,他对该设想进行了大量试验验证,并成功完成了PCR实验[1]。 在最初
什么是聚合酶链式反应
聚合酶链反应(PCR)是在试管中,能在较短的时间内使极微量的特定核酸扩增百万倍(106~109),故又称基因扩增技术,其敏感性远远超过包括放射免疫在内的所有血清学检验方法。其是目前世界上研究感染性疾病、遗传性疾病的早期诊断和癌细胞基因检测、基因突变的先进技术。只要患者体内极微量的乙肝病毒和丙肝、庚肝
聚合酶链式反应的原理
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DN
什么是PCR技术
PCR诊断技术又叫多聚酶链式反应技术,它采用分子技术模拟核酸在体内的复制,从而判定疾病病原的种类. PCR技术不需要观察动物的外观表现,所以无论是在潜伏期还是爆发期,只要对动物的相应器官进行检测,在两个小时内就能准确判定出畜禽疾病的原因和种类,这就意味着能够...什么是猪流感? 猪流感是由猪流感病毒
分子生态学词汇聚合酶链式反应
中文名称:聚合酶链式反应外文名称:Polymerase Chain Reaction定 义:聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。
基因扩增仪PCR的原理作用
聚合酶链式反应,简称PCR。聚合酶链式反应,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。
PCR-的起源
聚合酶链式反应(英文:Polymerase chain reaction,缩写:PCR,又称多聚酶链式反应),是一项利用 DNA 双链复制的原理,在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术。这项技术可在短时间内大量扩增目的基因,而不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物体。 诺贝尔化学奖得主凯利·穆
什么是PCR实验室?
PCR实验室又叫基因扩增实验室,PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术,是用来研究聚合酶链式反应,放大特定DNA片段,其目的在于通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精度可达纳米级别,能够对患者的病情进行科学、准确、
临床化学检查方法介绍聚合酶链式反应介绍
聚合酶链式反应介绍: 聚合酶链式反应是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称为基因的体外扩增法。PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。聚合酶链式反应正常值: 体内菌群的种类和比例正常,人体处于动态平衡健康状态。聚合酶链式反应临床意义:
DNA的化学检测项目介绍聚合酶链式反应
聚合酶链式反应介绍: 聚合酶链式反应是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称为基因的体外扩增法。PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。聚合酶链式反应正常值: 体内菌群的种类和比例正常,人体处于动态平衡健康状态。聚合酶链式反应临床意义:
聚合酶链式反应模板的制备
PCR的模板可以是DNA,也可以是RNA。 模板的取材主要依据PCR的扩增对象,可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。 标本处理的基本要求是除去杂质,并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难
聚合酶链式反应的发展背景
Khorana (1971)等最早提出核酸体外扩增的设想:“经DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可合成tRNA基因。”但由于当时基因序列分析方法尚未成熟,热稳定DNA聚合酶尚未报道以及引物合成的困难,这种想法似乎没有实际意义。加上分子克隆技术的出现提供了一种克隆
聚合酶链式反应的原理简介
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,
聚合酶链式反应检查的简介
聚合酶链式反应是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称为基因的体外扩增法。PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
聚合酶链式反应及其产物分析
实验原理:PCR扩增是模拟天然DNA复制过程,利用DNA聚合酶在体外(试管中)扩增一对引物之间特异性DNA片段的方法。其主要热循环过程可分为三个步骤: (1)高温变性(denature):提供DNA复制的有效模板。 (2)低温退火(anneal):引物与模板DNA复性,提供游离3’-OH端
聚合酶链式反应及其产物分析
实验原理:PCR扩增是模拟天然DNA复制过程,利用DNA聚合酶在体外(试管中)扩增一对引物之间特异性DNA片段的方法。其主要热循环过程可分为三个步骤: (1)高温变性(denature):提供DNA复制的有效模板。 (2)低温退火(anneal):引物与模板DNA复性,提供游离3’-OH端供
DNA聚合酶链式反应的概述
这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题,被广泛地应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、基因克隆和DNA序列测定等各方面。DNA聚合酶(DNA polymerase I)最早于1955年发现 ,而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli
聚合酶链式反应的特点介绍
特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDN
递减聚合酶链式反应的简介
递减PCR,亦称降落PCR(touchdown PCR)是一种PCR(聚合酶链式反应)方法,用来避免非特异性序列的扩增。PCR中引物的黏合温度(annealing temperature)决定了黏合的特异性,温度越高特异性越强,但过高则不能实现引物和模板的结合,而过低会产生大量非特异性产物。因此
PCR的应用
1 鉴定基因 人体内的细胞共有有约为30亿个碱基对的DNA,每个人的DNA会有差异,具有差异的碱基对数目达几百万之多,因此通过分子生物学方法显示的DNA图谱也因人而异,由此可以识别不同的人。所谓“DNA指纹”,就是把DNA作为像指纹那样的独特特征来识别不同的人。由于DNA是遗传物质,因此通过
关于逆转录PCR的简介
逆转录PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
逆转录PCR的定义
逆转录PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
新型冠状病毒核酸检测与PCR技术应用
首先需要采集患者的病毒样本,而由于采集的临床标本中病毒含量往往是非常少的,提取分离出的遗传物质更加少,需要扩增到可检测数量,才能做出诊断,即需要做PCR反应,它叫作聚合酶链式反应(PolymeraseChain Reaction),实际上就是一个基因的扩增反应。由于2019新型冠状病毒为RNA病毒
qpcr原理及应用
qpcr原理是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法;应用于对PCR进程进行实时检测。1、qPCR即实时荧光定量核酸扩增检测系统。将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与
浅谈PCR基因扩增仪
聚合酶链式反应,简称PCR。聚合酶链式反应,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。生命科学仪器
PCR基因扩增仪用途和特点介绍
聚合酶链式反应,简称PCR。聚合酶链式反应是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。PCR基因扩增仪的用途:用于科研及临床的基因扩增定性PCR基因扩增荧光/酶免终点定
动物源性成分分析方法
目前,动物源性成分分析方法包括光学显微镜、聚合酶链式反应(PCR)、免疫学方法、近红外漫反射光谱、近红外显微5种方法。 其中,光学显微镜是唯一确定饲料中动物源成分的官方认可方法,但定量重复性较差;聚合酶链式反应(PCR)、免疫学方法两种方法检测成本高;近红外漫反射光谱因检出能力不高以作为掺假和意外