聚合酶链式反应（PCR）
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。 PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段，并能轻易在皮克（pg）水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。因此，PCR技术一......阅读全文
聚合酶链式反应（PCR）扩增仪的分类
普通的PCR仪一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,又叫传统的PCR仪。用途:主要是做一些简单的、对单一退火温度的目的基因进行扩增。(1)梯度PCR仪一次PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常为12种温度梯度的普通PCR仪。用途:研究未知DNA退火温度的扩增。(2)
聚合酶链式反应（PCR）循环参数有哪些？
预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。 变性步骤循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。 引物
聚合酶链式反应（PCR）引物设计软件介绍
Primer Premier5.0 （自动搜索）vOligo6 （引物评价）vVector NTI SuitvDNAsisvOmigavDNAstarvPrimer3 （在线服务）
聚合酶链式反应（PCR）的概念和历史
聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,
聚合酶链式反应（PCR）的原理和具体过程
原理就是DNA半保留复制吧过程只要记住1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物
基因的PCR扩曾反应（聚合酶链式反应）
实验原理： 聚合酶链式反应（PCR，polymerase chain reaction）实质是体内DNA复制的体外模拟。当双链DNA变性为单链以后，DNA聚合酶以单链DNA为模版，并利用反应混合物中的四种dNTP，以与模板互补的寡聚核苷酸链为引物，合成新的DNA互补链。新合
PCR（聚合酶链式反应）反应方法热启动方法
热启动PCR的方法是在反应温度降至80ºC时添加Taq DNA聚合酶，以保证高特异性PCR产物的合成。 1．如基本的PCR方法所述，添加所有的PCR反应的混合物，但不加Taq DNA 聚合酶。 2．将小管中的混合物混匀，并加入50 µl矿物油或硅化油覆盖之。 3．盖紧小管，短暂离心，以便于
PCR（聚合酶链式反应）反应方法注意事项
1. PCR引物设计： 引物设计可能是PCR扩增成功最关键的因素。如引物设计欠佳，可能导致扩增产物不足，甚至扩增失败，其原因是设计欠佳的引物可导致非特异扩增和/或形成引物二聚体，此又成为PCR反应的竞争性产物，从而进一步抑制PCR产物形成。 在引物设计时必须考虑以下几个因素，其中最重要的是引
逆转录聚合酶链式反应（RTPCR）
实验概要提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因
聚合酶链式反应（PCR）最佳复性温度的选择标准
最佳复性温度的选择标准应该是可扩增范围的中间温度。在使用温度梯度的方法寻找最佳复性温度时,新手往往会选择扩增产物最多的温度条件,然而在此后的非梯度扩增时扩增效果又不太理想。出现这种现象的主要原因是最佳复性温度的选择标准不对。本人10多年前做过数千个基因的扩增,通过温度梯度实验发现,能扩增出来的温度范
聚合酶链式反应（PCR）出现假阴性的原因分析
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及溴乙锭的使用， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
聚合酶链式反应（PCR）扩增和扩增产物克隆
PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤：(1) 变性(Denature)：目的双链DNA片段在94℃下解链；(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过
聚合酶链式反应（PCR）－检测肉毒梭菌技术
是运用PCR方法检测肉毒神经毒素基因以鉴定肉毒梭菌，只需2～3天。特别是基层CDC在购买不到试验动物的情况下，PCR所具有快速、简便、特异型强的优点无疑可作为肉毒中毒的辅助检测手段和一项有价值的指标。P．Fach（1993）报道，应用PCR可检出食品样品的肉毒梭菌A型菌株。赵晋、郭宗琪、杨小蓉等（2
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上
原位聚合酶链式反应（in－situ－PCR）和原位反转录
一、仪器设备英国Thermo Hybaid原位PCR仪。二、操作流程（一）原位PCR步骤1、预处理： （1）切片常规脱蜡； （2）0.2mol/L HCl处理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min； （4）Nase消化组织37℃ 30min； （5）梯度酒精脱水，
PCR（聚合酶链式反应）反应方法所需材料和试剂
【材料】 1. 试剂和溶液 （1）10 × PCR缓冲液 500 mM 氯化钾 100 mM Tris-Cl (室温时pH 8.3) 15 mM 氯化镁 （2）10 mM脱氧三磷酸核苷(dNTPs) 溶液－含有所有四种dNTPs(pH 8.0) （3）耐热的DNA 聚合酶： ①
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
第一节 概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆（四）
[注意]1、纯化树脂在使用前必须充分混匀。 2、PCR产物中矿物油应尽量吸去，否则会影响提取DNA的 产量。四、载体加dT尾1、将1μg pUC19用SmaⅠ全酶切。 2、在小管中按上述PCR反应，加入各种混合物，除将4μl 4种dNTP改为4μl 25mM dTTP。 3、加入1μl(
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆（一）
PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤：(1) 变性(Denature)：目的双链DNA片段在94℃下解链；(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目
聚合酶链式反应（PCR）各种热启动酶存在的意义
各种热启动酶存在的意义市场上热启动的酶种类很多,但新手并不完全了解热启动酶存在的意义。非热启动的Taq酶在较低温度时也有活性:我有一本1992年出版的《PCR基因扩增实验操作手册》中提到,酶在70度时的合成速度为60核苷/秒/酶分子,55度时为22,37度时为1.5,22度时为0.25。也就是说此时
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆（三）
材料、设备及试剂一、材料不同来源的模板DNA。二、设备移液器及吸头，硅烷化的PCR小管，DNA扩增仪(PE公司)，琼脂糖凝胶电泳所需设备(电泳槽及电泳仪)，台式高速离心机。三、试剂：1、10×PCR反应缓冲液：500mmol/L KCl， 100mmol/L Tris·Cl， 在25℃下， pH9.
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆（二）
二、PCR反应参数1、变性：在第一轮循环前，在94℃下变性5-10min非常重要，它可使模板DNA完全解链，然后加入Taq DNA聚合酶(hot start)，这样可减少聚合酶在低温下仍有活性从而延伸非特异性配对的引物与模板复合物所造成的错误。变性不完全，往往使PCR失败，因为未变性完全的DNA
聚合酶链式反应（PCR）引物设计的基本原则
引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。引物内部不应出现互补序列。两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。引物与
原位聚合酶链式反应（in－situ－PCR）和原位反转录聚合酶...
原位聚合酶链式反应（in situ PCR）和原位反转录聚合酶链式反应原位聚合酶链式反应（in situ PCR）和原位反转录聚合酶链式反应（in situ RT-PCR）操作规程 （一）、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 （二）、操作流程 1、原位PCR步骤
聚合酶链式反应
实验方法原理 实验材料 热稳定 DNA 聚合酶旁观者 DNA正向引物反向引物模板 DNA试剂、试剂盒 扩增缓冲液氯仿dNTP 贮存液仪器、耗材 聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液（20
聚合酶链式反应
一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液（20 mmol/L，pH 8.0)2. 酶与缓冲液热稳定 DNA 聚合酶3. 凝胶聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶4. 核苷酸与寡聚核苷酸旁观者 DNA正向引物（20 μmol/L）及
聚合酶链式反应
实验方法原理实验材料热稳定 DNA 聚合酶旁观者 DNA正向引物反向引物模板 DNA试剂、试剂盒扩增缓冲液氯仿dNTP 贮存液仪器、耗材聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR仪实验步骤一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液（20 mmol/
分子实验方法8:聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
第八章 聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆第一节 概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Annea
PCR基因扩增仪简介
聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction）聚合酶链式反应 聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应
PCR的原理
聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction）， 聚合酶链式反应简称PCR。聚合酶链式反应，其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期