PrimerPremier引物设计
Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司开发的专业用于PCR或测序引物以及杂交探针的设计,评估的软件,和Plasmid Premier2.02一起是该公司推出的最新的软件产品。其主要界面同样也是分为序列编辑窗口(Genetank),引物设计窗口(Primer Design),酶切分析窗口(Restriction Sites)和纹基分析窗口(Motif)。这里我们主要介绍其引物设计功能,其他功能的介绍请参看Plasmid Premier2.02。打开程序首先进入的是序列编辑参看,与Plasmid Premier相比,其多了一个语音校正的功能,即在输入序列的时候,程序自动将碱基读出,以便用户进行校正,保证输入的正确和快速。点击该界面的按钮即可进入到程序的引物设计窗口。该界面共分为四层,最上面一层左面是5个控制按钮,用于实现引物设计中的各种功能,包括引物自动寻找,寻找结果查看和引物编辑;右边是观察两个引物在模板......阅读全文
Primer-Premier-引物设计
Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司开发的专业用于PCR或测序引物以及杂交探针的设计,评估的软件,和Plasmid Premier2.02一起是该公司推出的最新的软件产品。其主要界面同样也是分为序列编辑窗口(Genetank),引物设计窗口(Primer Design),
使用Primer-Premier-4.10引物设计方法
Primer Premier 4.10Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司开发的专业用于PCR或测序引物以及杂交探针的设计,评估的软件,和Plasmid Premier2.02一起是该公司推出的最新的软件产品。其主要界面同样也是分为序列编辑窗口(Genetank),引物设
Primer-引物设计原则
概念 引物,是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-OH,必须是游离的。类型 存在有自然中生物的DNA复制引物(RNA引物)和聚合酶链式反应(
primer-primer5怎么设计引物
首先打开软件左上角来操作file——new——dna sequence这一项可以把你复制的序列粘贴进去当然,你也可以选择另一个file——open——dna sequence去open一个新的文件。在接下来的界面里复制你的序列,于是就将序列导入了点击search进入下图界面开始设计引物在此图中有6个
Primer-3-在线引物设计攻略
开始之前:其实非常简单,不需要你下载任何软件,但是你得有一台电脑能上网。当然,最重要的是,你要很清楚用于做引物的模板序列,至于怎么找模板序列,不再本次讨论范围。另外,要先对PCR目的序列的长度有个大致估计,好了,马上开始吧:第一步:找到Primer3的站点。 你不用记住这个站点,但是要记住“Prim
引物设计(Primer-Design)的原则
首先引物要跟模板紧密结合,其次引物与引物之间不能有稳定的二聚体或发夹结构存在,再次引物不能在别的非目的位点引起DNA聚合反应(即错配)。围绕这几条基本原则,设计引物需要考虑诸多因素,如引物长度(primer length)、产物长度(product length)、序列Tm值(melting t
primer-3-设计引物怎么知道产物大小
如果你要扩展的基因已经测序完成,你在网上找到序列,输入primer5,然后点primer就可以了,然后你可以手动或自动更改,知道达到的你的要求。如果你扩增的基因还未测序完成,你只能通过别人克隆出来的相关基因设计引物,方法同上
Primer-Premier中文使用说明
Primer Premier 4.10Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司开发的专业用于PCR或测序引物以及杂交探针的设计,评估的软件,和Plasmid Premier2.02一起是该公司推出的最新的软件产品。其主要界面同样也是分为序列编辑窗口(Genetank),引物设
引物设计原则(Principle-of-realtime-quantiation-PCR-primer-)
1、引物的长度一般为15-30bp,常用的是18-27bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74°C,不适于Taq DNA聚合酶进行反应。2、引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3’端相似性较高的序列,否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基,如GGG或CCC,也会使错误
primer5和Oligo结合设计引物步骤及心得
一、引物设计step by step1、在NCBI上搜索到目的基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。2、用Primer Premier5搜索引物①打开Primer Premier5,点击File-New-
primer5和Oligo结合设计引物步骤及心得
一、引物设计step by step1、在NCBI上搜索到目的基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。2、用Primer Premier5搜索引物①打开Primer Premier5,点击File-New-
引物延伸分析(primer-extension-analysis)
引物延伸分析(primer extension analysis)主要用于mRNA 5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mRN
引物延伸分析(primer-extension-analysis)
引物延伸分析(primer extension analysis)主要用于mRNA 5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mR
第八章:常用引物设计工具大集合
Oligo 6作为目前最好、最为专业的引物设计软件,Oligo 的功能很强大,他主要功能有:普通引物对的搜索、测序引物的设计、杂交探针的设计以及评估「引物对」质量的功能。如何使用Oligo6 请参看:「两分钟教你学会 Oligo 7」BLASTBLAST(Basic Local Alignment
常用引物设计工具大集合
Oligo 6作为目前最好、最为专业的引物设计软件,Oligo 的功能很强大,他主要功能有:普通引物对的搜索、测序引物的设计、杂交探针的设计以及评估「引物对」质量的功能。如何使用Oligo6 请参看:「两分钟教你学会 Oligo 7」BLASTBLAST(Basic Local Alignment
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp;2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp;2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3
引物设计的引物设计原则
1、长度:15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性。2、G十C含量:应在40%一60%之间,PCR扩增中的复性温度一般较Tm值低等于引物的Tm值减去5—10度。引物长度小于20时,
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp;2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3
做-realtime-PCR之前,你应该如何着手设计引物
正在着手做 real-time PCR 的朋友们,我想最开始肯定要考虑引物设计的问题。看完下面的文字,我保证你得到想要的引物设计方法和引物序列。第一步:拿到你所要研究的基因的序列。不要告诉我你不会找序列。如果真的不会,请参考丁香园内其他版块,如NCBI使用,序列查找等。第二步:确定你想用哪种方法。T
PCR引物设计及评价
【实验目的】1、掌握引物设计的基本要求,并熟悉使用Primer premier5.0软件进行引物搜索。2、掌握使用软件oligo6.0对设计的引物进行评价分析。【实验原理】一、引物设计原则聚合梅链式反应(polymerase chain reaction)即PCR技术,是一种在体外快速扩增特定基因或
PCR引物设计及评价
【实验目的】1、掌握引物设计的基本要求,并熟悉使用Primer premier5.0软件进行引物搜索。2、掌握使用软件oligo6.0对设计的引物进行评价分析。【实验原理】一、引物设计原则聚合梅链式反应(polymerase chain reaction)即PCR技术,是一种在体外快速扩增特定基因或
RNA引物设计怎么设计
一般就是设计引物能够跨越至少一个exon-exon junction的,就是引物在两个exon的交界处,这样pcr的时候就不会有DNA污染现在NCBI可以直接有引物设计,还可以选择上述的设计方式或者可以通过找到cDNA序列然后自己在primer3上设计也可以
怎么设计引物
选择引物的一般规则设计和选择引物时有5个要素必需注意。1 引物的3′末端不互补 引物的3′末端一定不能有很大的互补性,因为它们的互补会形成引物二聚体,这就会带来很大的问题,例如合成出非专一的产物,极大地减少所期望产物的得量。有实验表明,3′末端双链的ΔG是0~-2 kcal/mol时,PCR产量几乎
怎样设计引物
一般是通过设计软件,例如oligo6,primer5等,你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明,是比较容易的。至于设计引物的一般原则如下:* 序列选取应在基因的保守区段* 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对,避免引物自身形成环状发卡结构* 典型的引物18到24个核苷长。引物需要
设计引物遵循原则、引物保存和各种PCR的引物设计
一 设计引物应遵循以下原则1 、引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。2 、引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。3 、引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上
如何利用LAMP引物设计平台设计IMSA引物?1
IMSA,全称为isothermal multiple-self-matching-initiated amplification,中文名为等温多自配引发扩增。该技术的详细介绍可见本公众号历史文章:“分子诊断万花筒” 开篇——等温多自配引发扩增技术简介。在这里隆地熊为大家介绍一种如何利用LAMP引物
如何利用LAMP引物设计平台设计IMSA引物?2
6. 更改ParameterCondition中默认的Normal至AT rich。默认显示Normal说明我们所上传VP1 gene的序列中GC含量位于40%-65%的正常范围内。高于65%属于GC rich;低于40%属于AT rich。7. 再次点击Generate时平台显示有1000或高于1
如何利用LAMP引物设计平台设计IMSA引物?3
(3)找到该文档,邮件选择打开方式为记事本,可得引物信息。再次点击文档,另存为Up-LF或Down-LB.txt文件。这里的第16套引物,我们需要它的下游环引物即LB,故名为Down-LB。这样命名的目的是为了防止混淆; (4)同样打开LAMP引物设计平台(http://primerexp
PCR引物设计及评价实验(一)
实验方法原理聚合梅链式反应(polymerase chain reaction)即PCR技术,是一种在体外快速扩增特定基因或DNA 序列的方法,故又称基因的体外扩增法。PCR技术已成为分子生物学研究中使用最多,最广泛的手段之一,而引物设计是PCR技术中至关重要的一环,使用不合适的PCR引物容