几种海藻及海洋细菌的DNA制备方法

所周知,海藻由于富含多糖,DNA提取是一大难题,一下是本人在试验过程中收集的海藻DNA制备方法,经试验验证可行,现在贴出来,以觞众战友。一、可大量培养的海洋细菌1、取1ml目的菌菌液至1.5ml的EP管中,5000r/m离心5分钟弃上清,菌体加入500μl水洗涤一次,5000r/m离心5分钟,弃上清,向菌体中加入200μl悬浮缓冲液。2、在200μl悬浮缓冲液中加人55℃Tirs饱和酚200μl和10%的SDS 45μl混匀,在微型蜗旋混和仪上混匀,55℃温浴15分钟,并且不断振荡混匀。3、12000r/m离心5分钟,取上层水相移至新的EP管中。4、加入等量的氯仿/异戊醇抽提,12000r/m离心5分钟,转移上层水相至新管,反复抽提至界面澄清。5、取上层水相加入0.1倍的3M醋酸钠和2.5倍体积的无水乙醇混匀于-20℃放置2h沉淀DNA。6、12000r/m离心20分钟,沉淀DNA弃上清,用预冷的的70%的乙醇洗2次,在室温下晾......阅读全文

几种海藻及海洋细菌的DNA制备方法

所周知,海藻由于富含多糖,DNA提取是一大难题,一下是本人在试验过程中收集的海藻DNA制备方法,经试验验证可行,现在贴出来,以觞众战友。一、可大量培养的海洋细菌1、取1ml目的菌菌液至1.5ml的EP管中,5000r/m离心5分钟弃上清,菌体加入500μl水洗涤一次,5000r/m离心5分钟,弃上清

海藻酸的制备方法

常见的褐藻如海带、马尾藻、泡叶藻、巨藻都是海藻酸的主要来源。海藻用氢氧化钠处理后抽提液与硫酸等强酸反应制得海藻酸。固氮菌和伪单胞菌也可以用于生物合成海藻酸,通常细菌合成的海藻酸可以产生微米级或纳米级结构用于生物医学工程领域 。

常见的几种细菌染色方法及细菌染色方法的改良

细菌是一类原核细胞型微生物。因菌体小半透明,要想更清楚地观察其大小和形态,需经染色和显微镜放大后才能看到。常用的细菌染色法有单染法和复染法。复染法是用两种以上的染料染色,可将细菌染成不同颜色,除可观察细菌的形态外还能鉴别细菌。主要有革兰染色法、抗酸染色法、特殊染色法[1] 。笔者为了克服传统染色

细菌质粒-DNA-的小量制备

实验方法原理 由于大肠杆菌染色体 DNA 比通常用作载体的质粒 DNA 分子大得多,因此在提取过程中,染色体 DNA 易断裂成线型 DNA 分子,而大多数质粒 DNA 则是共价闭环型,根据这一差异便可以设计出各种分离、提纯质粒 DNA 的方法。碱裂解法就是基于线型的大分子染色体 DNA 与小

细菌质粒-DNA-的小量制备实验

细菌质粒的发现是微生物学对现代分子生物学发展的重要贡献之一。特别是自 70 年代末以来,根据质粒分子生物学特性而构建的一系列克隆和表达载体更是现代分子生物学发展、改良生物品种和获得基因工程产品不可缺少的分子载体,发展十分迅速,而质粒的分离和提取则是最常用和最基本的实验技术,其方法很多。仅大肠杆菌质粒

几种DNA定量方法

Quantitation of DNAFluorescent quantitationWear gloves and goggles protecting from EtBr and UV lightWith an EDP (dilute mode) pick up 9 µl TE and 1 µl

几种细菌染色方法的改良

  细菌是一类原核细胞型。因菌体小半透明,要想更清楚地观察其大小和形态,需经染色和放大后才能看到。常用的细菌染色法有单染法和复染法。复染法是用两种以上的染料染色,可将细菌染成不同颜色,除可观察细菌的形态外还能鉴别细菌。主要有革兰染色法、抗酸染色法、特殊染色法[1] 。笔者为了克服传统染色方法存在

几种细菌染色方法的改良

细菌是一类原核细胞型微生物。因菌体小半透明,要想更清楚地观察其大小和形态,需经染色和显微镜放大后才能看到。常用的细菌染色法有单染法和复染法。复染法是用两种以上的染料染色,可将细菌染成不同颜色,除可观察细菌的形态外还能鉴别细菌。主要有革兰染色法、抗酸染色法、特殊染色法[1] 。笔者为了克服传统染色方法

细菌中制备基因组DNA实验——小量制备

真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。实验方法原理提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液

DNA提取的方法有几种

关于DNA的提取方法在《分子克隆》一书中有详细介绍,其中最常用的质粒提取方法包括:SDS碱裂解法制备质粒DNA煮沸裂解法制备质粒DNA牙签法小量制备质粒DNASDS裂解法提取质粒DNA这其中SDS碱裂解法又是最常使用的提取方法。当然针对不同组织样品DNA的提取方法是不同的,具体还是要参考《分子克隆》

制备互补DNA的方法

制备互补DNA,往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质,则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分。就胰岛B细胞而论,此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA,后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体,如果用特异抗体结合所表达的蛋白质(抗原),则可从沉淀

DNA片段的制备方法

常用以下方法获得DNA片段:①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段;②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段;③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下,用人工方法合成对应的基因片段;④从mRNA反转录产生cDNA。

质粒DNA的制备方法

有多种分离质粒的方法,如碱裂解法、煮沸裂解法、层析柱过滤法等。

DNA探针的制备方法

基因组DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针,常常是比较烦琐的。以细菌为例,细菌的基因组大小约为5×106碱基,约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针,通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法,即将细菌DNA切成小片段后(如用限制性内切酶做不完全水解)分别

细菌中制备基因组DNA实验

实验方法原理 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。实验材料 细菌试剂、试剂盒 TE氯化铯溴化乙锭NaCl乙醇CTAB仪器、耗材 离心机摇床实验步骤 1

细菌中制备基因组DNA实验

小量制备 氯化铯法             实验方法原理 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿

鸟嘌呤的制备方法有几种?

鸟嘌呤的制备方法有2种.方法一:5-氨基-4-咪唑酰胺与异硫氰酸苯甲酯进行酯化成酯,再与碘甲烷、氨水依次反应制得。方法二:在四口烧瓶中按比例投入制得的N5-甲酰基-2,4,5-三氨基-6-羟基嘧啶、88%甲酸,加热到110℃,回流反应10小时,然后,常压蒸除甲酸至黏稠,冷却至50℃,加水200mL,

土壤总DNA的几种提取方法

SDS 高盐法(方案1)   具体步骤: 称取1 g 土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨;再倒入适量的液氮,研磨,重复3 次,使土壤颗粒研成粉末; 将13.5 ml 提取缓冲液(0.1 mol/L磷酸盐[pH = 8.0 ] ,0.1 mol/L EDTA [pH 8.0 ] ,0.1 mo

人工海藻糖酶多肽片段的合成和重组海藻糖酶的制备

国外采用标准9-甲氧羰基荧光素固相合成法合成氨基酸残基序列291-307肽段(SKDVEIADT[~PEGDREA)。用反相高效液相色谱法(HPLC)分析并提纯多肽。HPLC主要是根据分子的亲水性(反相)和电荷(离子交换)方面的差别来实现样品的分离的。反相HPLC的优点是分辨率大。利用分子生物学方法

制备互补DNA的方法过程

制备互补DNA,往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质,则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分   。就胰岛B细胞而论,此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA,后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体,如果用特异抗体结合所表达的蛋白质(抗原),则可

Nature:利用食用海藻操纵肠道细菌!

  肠道细菌依赖于我们吃的食物茁壮成长。反过来,它们提供必要的营养物让我们保持健康、击退病原体,甚至有助于指导我们的免疫反应。  了解我们摄入的某些细菌菌株如何和为何能够成功地在大肠中站稳脚跟而其他的细菌菌株被快速地驱逐,可能有助于科学家们了解如何以增强我们的健康或协助抵抗疾病的方式操纵在那里存在的

几种DNA提取方法的优缺点比较

  文章来源:洛阳吉恩特生物科技有限公司   自然界中无论是植物、动物还是病毒,DNA作为大部分生物的遗传物质,在遗传中起着不可替代的作用,为了研究生物的基因,就需要将DNA从细胞中提取出来,这个过程有很多方法可以实现,目前比较常用的有苯酚氯仿抽提法、离心柱法和磁珠法,吉恩特实验室就这三种提取方法

几种DNA提取方法的优缺点比较

自然界中无论是植物、动物还是病毒,DNA作为大部分生物的遗传物质,在遗传中起着不可替代的作用,为了研究生物的基因,就需要将DNA从细胞中提取出来,这个过程有很多方法可以实现,目前比较常用的有苯酚氯仿抽提法、离心柱法和磁珠法,吉恩特实验室就这三种提取方法进行了梳理和比较,总结出各方法的优缺点供广大科研

几种DNA提取方法的优缺点比较

  几种DNA提取方法的优缺点比较   文章来源:洛阳吉恩特生物科技有限公司   自然界中无论是植物、动物还是病毒,DNA作为大部分生物的遗传物质,在遗传中起着不可替代的作用,为了研究生物的基因,就需要将DNA从细胞中提取出来,这个过程有很多方法可以实现,目前比较常用的有苯酚氯仿抽提法、离心柱法

粉末样品制备有几种方法

使用固体溶剂压片是其溶剂的性质不能与待 测物质相近,然后就是溶剂的使用量的问题。直接压片时晶粒要细小,试样取向无规则。一般来说粉末样品分为导电样品和不导电样品两种。导电样品:在样品台上贴上一小块导电胶,取少量粉末撒到导电胶上,再用洗耳球吹吹,将没有沾牢的样品去掉,便可直接装样观察了。不导电样品:只需

关于互补DNA的制备方法介绍

  制备互补DNA,往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质,则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分 [2] 。就胰岛B细胞而论,此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA,后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体,如果用特异抗体结合所表达的蛋白质(抗原

制备互补DNA的方法和过程

制备互补DNA,往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质,则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分。就胰岛B细胞而论,此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA,后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体,如果用特异抗体结合所表达的蛋白质(抗原),则可从沉淀

DNA疫苗的制备方法和特点

DNA疫苗 又称基因疫苗或核酸疫苗,将能编码引起保护性免疫应答的病原体免疫原基因片段和质粒重组,重组体直接注入宿主机体,使体内持续表达该抗原,进而诱导出保护性体液免疫和细胞免疫的新型疫苗.这种核酸既是载体,又能在真核细胞中表达抗原,刺激机体产生特异而有效的免疫反应。优点:免疫效果好,可激发机体全面免

实验常用试剂的几种制备与储藏方法

一.常用贮液与溶液    1mol/L亚精胺(Spermidine):溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。    1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。    10mol/L乙酸

21世纪海洋生物技术发展展望(三)

3.4分子标记技术与遗传多样性研究了将鱼类基因内含子作为遗传多样性评价指标的可行性,应用SSCP和定序的方法研究了大西洋和地中海几种海洋生物的遗传多样性。研究了南美白对虾消化酶基因的多态性;利用寄生性原生动物和有毒甲藻基因组DNA的间隔区序列作标记检测环境水体中这些病原生物的污染程度,应用18S和5