WesternBlottingProtocols
back to topProtocolStandard vs. Rapid Immunodetection ProceduresThere are two types of protocols for immunodetection: Standard and rapid.Standard vs. Rapid ImmunodetectionStepStandard ImmunodetectionRapid ImmunodetectionBlock the membrane1 hrNoneIncubate with primary antibody1 hr1 hrWash the membrane3 x 10 min3 x 5 minIncubate with second antibody1 hr30 minWash the membrane3 x 10 min3 x 5 minAdd substrate5 min5 minTo......阅读全文
弯曲条带以及我们该如何进行处理？
如果你曾经做过SDS-PAGE和Western blotting实验，你肯定会看到弯曲的或模糊的条带，不同于你的抗体数据表上显示的那些完美的条带形状。虽然这些弯曲的条带本身并不吸引人，但它们会影响到分子量，这可能会影响到条带密度测量的分析，尤其是在使用自动化程序或分析分子量相近的蛋白 不要担心，通
直接或间接western－blot检测方法之抗体介绍
在直接检测方法中，酶直接连接到一抗上(图1.5)。操作简单，检测步骤少。虽然直接检测是快速和直接的，但它往往比间接检测的灵敏度低，因为在这个过程中可以发生信号放大的步骤更少。此外，酶直接标记到一抗上可能会造成成本和资源上的限制。 间接western blot检测方法 间接检测方法
Nature－Protocols－快速重复地对肿瘤蛋白进行深度分析和定量
Broad研究所蛋白质组学平台的研究人员近日在《Nature Protocols》杂志上报道了一个经过优化的新流程，能够快速且重复地对肿瘤蛋白进行深度分析和定量。 在过去十年中，基因组学研究已经系统绘制了人类癌症的遗传改变，但这些改变对蛋白质组的直接影响还知之甚少。NIH临床蛋白质组学肿瘤分析
Nature－Protocols:－纳米生物分子冠分析表征方法学取得重要进展
7月23日，国家纳米科学中心陈春英院士团队和英国伯明翰大学lseult Lynch教授团队在纳米生物分子冠分析表征方法学方面取得重要进展，相关研究成果总结以Analysis of nanomaterial biocoronas in biological and environmental su
蛋白质截短试验_非放射性蛋白质截短试验
实验材料患者和正常人的保存于乙醇中的 RNA 或 DNA 样品试剂、试剂盒乙酸钠随机引物反转录试剂盒二硫苏糖醇4dNTP 混合液RNase 抑制剂特异性的 PCR 引物RNase H10 X PCR 缓冲液Taq 酶丙烯酰胺 双丙烯酰胺SDSTris • Cl过硫酸铵运行缓冲液电转缓冲液（冰预冷）甲
细胞裂解液作为对照的原因
WCL的全称是whole cell lysate,中文就是全细胞裂解液对吧?如果是这样的话,这个部分的目的就是研究细胞里面你想要研究的蛋白表达情况.IP的就是你用抗体pull down以后得到的目的蛋白.我们做co-IP研究A和B蛋白相互作用的时候,一般会在细胞里面转染质粒,分别表达A和B蛋白.等蛋
蛋白质截短试验
实验材料 患者和正常人的保存于乙醇中的 RNA 或 DNA 样品试剂、试剂盒 乙酸钠随机引物反转录试剂盒二硫苏糖醇4dNTP 混合液RNase 抑制剂特异性的 PCR 引物RNase H10 X PCR 缓冲液Taq 酶丙烯酰胺 双丙烯酰胺SDSTris • Cl过硫酸铵运行缓冲液电转缓冲液
western－需要买什么试剂
试剂：tris、Hcl、Nacl、脱脂牛奶、甲醇、甘氨酸、tween 20、一抗、二抗、显色剂及SDS PAGE需要的试剂（tris、Hcl、TEMED、SDS、过硫酸铵、丙烯酰胺、N N 甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、非预染蛋白Marker、甲醇、乙酸、考马斯亮蓝R250）、预染蛋白Marker耗材：滤
western－blot－marker的作用
电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；2 确认转膜效率；3 根据marker的条带估计分子量；4 确定目的蛋白位置.
Western－Blot哪种染色好？
阴离子染料是较常用的，特别是氨基黑，脱色快，背景低检测极限可达1.5ug，考马斯亮蓝虽然与氨基黑有相同的灵敏度，但脱色慢，背景高。丽春红S和快绿在检测后容易从蛋白质中除去，以便进行随后的氨基酸分析。胶体金，灵敏度高，检测范围可达到pg级，但染色稳定。 生物素话灵敏度位于1.2之间，可用于任何一种膜。
western－blot－marker的作用
电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；2 确认转膜效率；3 根据marker的条带估计分子量；4 确定目的蛋白位置.
western－blot－中甲醇作用
westernblot转膜不用甲醇可以蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即westernblot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息
western－blot结果怎么分析
western blot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。然后就是有条带之后，各个条带灰度值的分析，而对其灰度值的量
western－blot结果怎么分析
western blot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。然后就是有条带之后，各个条带灰度值的分析，而对其灰度值的量
western转膜放置问题
1. 定义转膜时与胶接触的一面为“正”2. 封闭时使用封闭液，液体盖过膜就好，所以无所谓正反3. 假如用暗室显影法，将显影的试剂与“正”面接触，胶片与“正面”接触4. 假如用荧光的话，理论上“正”面朝下，扫描，但实际操作过程中貌似都可以的
western－blot－条带怎么分析
把条带圈出来然后点测量 就是measure 出来的那个mean的数值就是灰度 应该说是白度值 条带越深数值越小
western－blot－marker的作用
电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；2 确认转膜效率；3 根据marker的条带估计分子量；4 确定目的蛋白位置.
western－blot－marker的作用
电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；2 确认转膜效率；3 根据marker的条带估计分子量；4 确定目的蛋白位置.
western－blot的条带分析
你的对照组是什么？对照组有没有出现问题？有问题的话是很可能是你在操作过程中有问题膜的质量是否有问题？
Western－Blot主要试剂
主要试剂 1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O**100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.
western－blot结果怎么分析
western blot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。然后就是有条带之后，各个条带灰度值的分析，而对其灰度值的量
western－blot－marker的作用
电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；2 确认转膜效率；3 根据marker的条带估计分子量；4 确定目的蛋白位置.
Western－Blot－蛋白样品制备
一、单层贴壁细胞总蛋白的提取：1.倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。2.每瓶细胞加 3 ml 4℃ 预冷的 PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动 1 min 洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次
Western印迹法检测蛋白
实验概要Western印迹法检测蛋白的敏感性约为1-5ng，0.75mm厚的SDS-PAGE板的一个孔可上总蛋白量约为100μg，所以只要被检蛋白不低于总蛋白量的万分之一，即可被检测出来。如果所分析的样品为未知时，应同时作阳性对照。杂交技术主要有NC膜的封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗
Western印迹法检测蛋白
实验概要Western印迹法检测蛋白的敏感性约为1-5ng，0.75mm厚的SDS-PAGE板的一个孔可上总蛋白量约为100μg，所以只要被检蛋白不低于总蛋白量的万分之一，即可被检测出来。如果所分析的样品为未知时，应同时作阳性对照。杂交技术主要有NC膜的封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗
WesternBlot操作流程
试剂配制（一）母液1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g蒸馏水 200ml溶解后，用浓盐酸调pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。 PH HCl7.4 约17ml7.5 约16m7.6 约15ml8.0 约10ml1.
Western－Blot实验关键
Western Blot操作步骤多，每一步的失误都会造成全盘失败，综合而言，抗体仍然是决定成败的关键，如果抗体不好，就是神仙也没招。其中内参抗体很重要，因为内参抗体的选择关系到全盘实验的考评。Actin，Tubulin，GAPDH我们都用过，Actin，Tubulin的缺点是有时候会出现复带，比较稳
western如何孵一抗
将抗体稀释到推荐浓度，这要是看你放膜的容器大小，如果容器刚好和膜差不多，只要配少量的一抗溶液就可以完全覆盖膜，但是如果容器较大，就需要事先看多少ml的溶液才能够用。抗体溶液倒到膜上后，将容器放到一个水平摇床，或者是染色摇床上，缓慢的摇动。可以在4C过夜孵育，也可以在室温孵育1h即可。
western－blot－marker的作用
电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；2 确认转膜效率；3 根据marker的条带估计分子量；4 确定目的蛋白位置.
Western－Blot详解－主要试剂
主要试剂1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以