WesternBlot实验关键
Western Blot操作步骤多，每一步的失误都会造成全盘失败，综合而言，抗体仍然是决定成败的关键，如果抗体不好，就是神仙也没招。其中内参抗体很重要，因为内参抗体的选择关系到全盘实验的考评。Actin，Tubulin，GAPDH我们都用过，Actin，Tubulin的缺点是有时候会出现复带，比较稳定的还是GAPDH。如果用心看看cell，nature，science上的文章，大多用GAPDH做内参。进口的，国内分装的，国产的，我们都用过，效果都还可以。从western实验我们总结出，实验上根本省不下来钱，一个环节的烂货就会导致全盘失败。对于实验设计而言，也是如此，一个步骤的疏忽会导致整个实验立题和评估的逻辑混乱。如果要追求性价比，也就是如何发挥穷人的劳斯莱斯的最大收益，那从一开始就要按秋后算账的原则选择试剂，要算总账；如果要让实验顺顺利利，那就得注意每一个环节，步步为营，细节决定成败。......阅读全文
Western－Blot实验（二）
小巧的体格，却一应俱全，可以灵活控制多种应用程序，包括化学发光，荧光，DNA/蛋白胶。可以满足对实验室各种样品成像的要求。是目前市面上唯一的一款既可进行Cy3, Cy5, Cy2 多色荧光LED成像，又可在700和800nm处进行近红外激光定量荧光western 成像系统。这达到对成像最完美
Western－Blot实验步骤
实验步骤： 1.分别配制 5%浓缩胶和12%分离胶 12%分离胶10mL 5%积层胶6mL H2O 3.3mL H2O 4.20mL 30% Acrylamide 4mL 30% Acrylamide 1mL pH8.8 Tris HCl（1.5M） 2.5mL PH6.8Tris
Western－Blot实验（一）
大家都知道Western Blot时间周期较长，大致可以分为忙碌的第一天，和心痛的第二天，像极了爱情。人生若只如初见，何事秋风悲画扇。经历转瞬即逝的新手曙光后，便进入漫长的黑夜。第一天，从最一步的配胶，到最后一步的孵育膜都极细心像极了爱情的萌芽期，需要精心的呵护。第二天经过繁琐的洗膜，孵二抗，洗膜，
Western－Blot实验关键
Western Blot操作步骤多，每一步的失误都会造成全盘失败，综合而言，抗体仍然是决定成败的关键，如果抗体不好，就是神仙也没招。其中内参抗体很重要，因为内参抗体的选择关系到全盘实验的考评。Actin，Tubulin，GAPDH我们都用过，Actin，Tubulin的缺点是有时候会出现复带，比较稳
Western－Blot技术实验流程
Western Blot又称为蛋白质印迹，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗体抗原之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。 基本原理：聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离，分离后的蛋白被转移到固相支撑物（杂交膜）上，抗体特异性识别目标蛋白，通过酶促反应或
western－blot的实验原理
蛋白免疫印迹（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测三个部分组成。第一步是做 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持物上， 用得最多的材料是硝酸
Western－Blot－Protocol实验步骤
一、提取抗原蛋白 将提取RNA途中留存的样品，加入150μl100%酒精充分混匀，静置5min(RT),2000×g,4℃离心5min,吸取上清至新管中,加入750μl异丙醇,混匀,静置10min(RT),12000×g,4℃离心10min,弃上清,加入1ml0.3mol/L盐酸胍/95%酒精重悬
western－blot的实验原理
Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品(跑PAGE 胶的原理你懂吧~~~)，转移到固相载体（硝酸纤维素膜NC膜）上
Western－Blot技术实验流程
Western Blot又称为蛋白质印迹，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗体抗原之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。基本原理：聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离，分离后的蛋白被转移到固相支撑物（杂交膜）上，抗体特异性识别目标蛋白，通过酶促反应或者化学发光等
westernblot实验过程
Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。可按照以下步骤操作。1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品
western－blot实验结果怎么分析
灰度扫描目标条带，与内参条带灰度值比较，进行标准化数据。根据比值绘制图表。IP=immunoprecipitation 免疫沉淀（富集样品或避免抗体同原材料中其他物质发生非特异反应）IB=immunoblotting 免疫印迹 （不一定是蛋白免疫印迹=Western blotting）
Western－Blot－Protocol实验操作步骤
一、提取抗原蛋白 将提取RNA途中留存的样品，加入150μl100%酒精充分混匀，静置 5min(RT),2000×g,4℃离心5min,吸取上清至新管中,加入750μl异丙醇,混匀,静置10min(RT),12000×g,4℃离心 10min,弃上清,加入1ml0.3mol/L盐酸胍/95%酒
Western－Blot实验操作进阶技巧（一）
除非是Western blot实验方面的高手，要不就像在我看来，Western blot发展至今好像与其1979年刚被发明出来的时候一样一样，同样也是根据蛋白不同的大小（或电荷）进行电泳分离，然后转膜，利用抗体筛选出目标蛋白。 多年来这种技术已经成为了蛋白研究方面的一种主要技术，研究人员可以利
Western－blot如何进行实验质控
WB实验总做不好，那么如何进行WB实验质控呢？ 做过WB实验的小伙伴都经历过成像时忐忑不安，出来结果时的彷徨无措，为什么条带没有出啦，为什么背景这么高，为什么受伤的总是我，看着旁边小伙伴漂亮的结果图，心生羡慕嫉妒，那么小编给大家整理总结了如何进行WB的质控和注意哪些检查点。 蛋白样品
western－blot实验经验总结（二）
问题4：有阳性条带，但条带比较弱（1）抗体染色不充分增加抗体浓度，延长孵育时间。（2）酶活性降低直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。（3）标本中靶蛋白含量太低增加标本上样量。（4）洗膜过度缩短洗涤时间。（5）HRP抑制剂所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。
Western－blot如何进行实验质控？
WB实验总做不好，那么如何进行WB实验质控呢？做过WB实验的小伙伴都经历过成像时忐忑不安，出来结果时的彷徨无措，为什么条带没有出啦，为什么背景这么高，为什么受伤的总是我，看着旁边小伙伴漂亮的结果图，心生羡慕嫉妒，那么小编给大家整理总结了如何进行WB的质控和注意哪些检查点。蛋白样品：准备好裂解液后，使
western－blot实验经验总结（一）
做了很久的WB（western blot），走了很多弯路，其实发现WB想要做好并不难，总结了WB实验中可能会遇到的问题，分析了可能的原因及对应的解决方案，希望能成为你实验成功的基石。 问题1：转膜不充分(1)膜没有完全均匀湿透使用100% methanol浸透膜。(2)靶蛋白分子量小于10 000选
Western－Blot－Protocol
一、提取抗原蛋白将提取RNA途中留存的样品，加入150μl 100%酒精充分混匀，静置5min(RT), 2000×g , 4℃离心5min, 吸取上清至新管中, 加入750μl异丙醇, 混匀, 静置10min(RT), 12000×g, 4℃离心10min, 弃上清, 加入1ml 0.3mol/L
Western－Blot－(AP)
主要试剂1. Membrane Blocking buffer:5% Milk 0.05% of Tween 20 PBS2. antibody dilution buffer: PBS 0.05% of Tween20 1.0% Milk(or BSA) 3. washing buffer:
western－blot原理
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检
Western－Blot详解
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、分类
Western免疫印迹（Western－Blot）实验原理和主要试剂
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。实验原理与Southern或 Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电
实验室Western－Blot荧光实验干货分享
听说隔壁实验室买了一台新成像，可以做Western Blot荧光扫描式Azure Sapphire成像，效果很好，操作也简单，小师妹一脸羡慕，问了句，我从来没做过荧光实验，现在期刊杂志要求也在升级，也建议使用荧光的方法，之前因为没有合适的仪器，所以不能尝试，现在可以准备我的实验了，那从化学到荧光
实验室Western－Blot荧光实验干货分享
听说隔壁实验室买了一台新成像，可以做Western Blot荧光扫描式Azure Sapphire成像，效果很好，操作也简单，小师妹一脸羡慕，问了句，我从来没做过荧光实验，现在期刊杂志要求也在升级，也建议使用荧光的方法，之前因为没有合适的仪器，所以不能尝试，现在可以准备我的实验了，那从化学到荧光
Western－Blot实验相关试剂的配制（一）
30%(w/v)丙烯酰胺溶液 丙烯酰胺 29g甲叉双丙烯酰胺 1g加去离子水，定容至 100ml 调整溶液 pH 值不超过 7.0，置棕色瓶中贮存于室温或4℃。 10%SDS SDS 10g蒸馏水至
Western－Blot－实验试剂选购指南（二）
美国Pierce公司化 学 发 光 底 物 系 列4. Western Blotting检测试剂盒我们开发了此步免疫检测的完整的试剂盒,即HRP标记的二抗检测系统(含封闭液,洗液,底物,HRP/亲和素-二抗),您只需准备好一抗,并选择和一抗动物来源相应的试剂盒就可以.对于实验来说,采用完整的试剂盒可
Western－Blot实验相关试剂的配制（二）
100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）BSA 0.1g0.15 mol/L NaCl 1ml溶解后-20℃保存。制作蛋白标准曲线时，用0.15 mol/L NaCl进行100倍稀释成1mg/ml，-20℃保存。
Western－blot实验步骤及注意事项
2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒。该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。(2) 样品处理在收集的蛋白样品中加入适
电泳做Western－Blot实验的方法技巧
电泳做western blot的时候，大家往往会摸索一抗、二抗的浓度，封闭时间，曝光时间等等，而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜，甚至重新提蛋白，这样会浪费大量的时间。其实完全没有必要这样。一次转膜后，将PVDF膜晾干，裁减成小块，保存起来，用的时候取出一块，没有任何影响。这对于摸索条
Western－Blot－实验试剂选购指南（一）
(一)蛋白质电泳1.请参照常规电泳操作.2.分子量标准:可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时,要注意其优点和缺点:优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态; 可指示转印中蛋白质的转印效率.缺点: 染料影响蛋白质移动速度;分子量测定略欠精确;影响蛋白质与膜的结合力. 购