丙烯酰胺胶中肽提取和蛋白消化技术
Digestion of Proteins and Extraction of Peptides from an Acrylamide GelSherry Niessen, Ian McLeod and John R. Yates IIIDepartment of Cell Biology, The Scripps Research Institute, La Jolla, California.Excerpted From Protein: Protein Interactions, Second EditionEdited by Erica A. Golemis and Peter D. Adams.ABSTRACTAnalysis of cellular proteins by Mass Spectrometry requires the isolation of protein complexes, and e......阅读全文
二次鉴别性消化法检测磷酸肽中特定氨基酸实验
实验方法原理 实验材料 洗脱的磷酸肽试剂、试剂盒 消化酶消化缓冲液2-巯基乙醇合适 pH 的电泳缓冲仪器、耗材 适合于酶消化的温度的水浴TLC 平板（20 cm × 20 cm 100 维素）实验步骤 1. 在微量离心管中用 50 μl 合适的缓冲液溶解洗脱下的磷酸肽，短暂离心在管底收集所有的溶液。
如何防止聚丙烯酰胺垂直电泳漏胶现象
如何防止聚丙烯酰胺垂直电泳漏胶现象已成为实验室研究人员比较头疼的问题！1. 固定玻璃板时，先将厚薄玻璃板在桌面对齐后在垂直面上稍微向厚板倾斜20度，使底面薄板略高于厚板。2. 将固定好的玻板固定于放有海绵垫的制胶架上，固定时用手稍用力往下压，此时封闭的灌胶系统准备完毕。3.
DNA－酶－I－足迹法对－DNA－上的蛋白质结合位点作图实验
DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验 实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分
智能程控匀胶机简介和技术指标
智能程控匀胶机是高精密的旋转涂膜仪。主要为高等院校、科研院所、研发中心等进行研究，开发各种功能薄膜所用。适用于半导体硅片、晶片、ITO导电玻璃、光学玻璃、生物薄膜、制版等工艺表面涂覆。 技术指标 镀膜时间设置： 1～9999 sec/ step 旋涂速度：0～ 5,000 rpm 旋涂加
DNA－酶－I－足迹法对－DNA－上的蛋白质结合位点作图实验
实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分试剂、试剂盒 细胞匀浆缓冲液细胞重悬缓冲液细胞淋洗缓冲液乙醇Ficoll 400甲酰胺染色液MgCl2 CaCl2 溶液NaClNonidetP-40酚：氯仿磷酸盐缓冲液聚乙烯醇终止液组织匀浆液组织重悬缓冲液台盼蓝染料DNA 酶 I
采用PACE分析RNA肽相互作用实验
聚丙烯酰胺共电泳（poiyacrylamide coelectrophuresis，PACE ) 检测是相对较晚发展起来的定量分析蛋白质、肽与 DNA 或 RNA 相互作用的方法。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理聚丙烯酰胺共电泳（poiyacrylamide coelec
双向电泳原理及操作步骤
实验概要本文介绍了双向电泳原理及操作步骤（第一向等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳）。实验原理二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术（根据蛋白质等电点进行分离）以及SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（根据蛋白质的大小进行分离）。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。通
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)5
室温下充分混匀，离心10000g×2min。取上层液置另一0.5 ml离心管中，加入100μl氯仿，混匀，离心10000g×2min。将上层液转移至另一0.5ml 离心管中，再加入3M NaAc 10μl、预冷无水乙醇250μl，混匀后，-20OC静置30min。4OC离心13500g×10
拓展：叶绿体中色素的提取和分离
色素的提取和分离是现在的考试模式中处于重要的地位的实验，有一次考试中出现了教材没有的答案“纸层析法”，所以，在教学中还需要适当拓展，甚至需要实验改进。 例如，有一次，学生问到定量测定色素含量实验如何进行，要回答这个问题，需要选修教材中学到的方法的灵活应用，如光密度值的定量测定，得到色素的含量情
三氟拉嗪处理后的白杄花粉管蛋白质组学研究
实验概要本实验运用双向电泳技术、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术研究了。钙调素调节的下游效应蛋白的表达模式和活性，通过鉴定这些蛋白、分析它们的表达模式以及它们依赖于Ca2 的与CaM的相互作用，将有助于我们了解钙-钙调素信号在时间和空间上的特异性，初步探讨了细胞如何通过钙-钙调素信号响
细胞培养液中蛋白的提取方法
蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术.1、透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种.将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替）,结扎,把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配
质谱分析
实验概要本实验在二维电泳图像获取和分析的基础上，利用质谱分析及数据库搜索鉴定部分蛋白质斑点。实验步骤1. 胶内酶切随机选择重复性好，差异显著，无明显变形、拖尾，与周围蛋白点分离明确的蛋白点作为质谱分析对象，进行胶内酶解。 1) 从胶上切取蛋白质凝胶颗粒置入96孔培养板内，用去离子水清洗数次。
花粉管钙通道抑制后蛋白质组学研究
实验概要本实验运用蛋白质组学技术手段对钙通道受抑制后花粉管中蛋白质表达模式进行研究，以期鉴定出与Ca2 调节花粉管生长相关的蛋白质，拓展对Ca2 在花粉管生长调节机制的认识。主要设备IPGphor II等电聚焦系统(Amersham Biosciences，Sweden)ZipTipC18 (Mil
膜蛋白和细菌总蛋白提取的三大方法
一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。该裂
脂肪组织和细胞的总蛋白提取
脂肪组织特别是白色脂肪组织（WAT）已经被证实除了具有能量储存功能外，还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理 / 病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）中高脂肪和低蛋白含量，所以在技术上极具挑战性。众所周知目前生物样品中水油乳化
人用重组DNA蛋白制品提取和纯化
制品的提取、纯化主要依赖于各种蛋白质分离技术。采用的分离纯化方法或技术，应能适用于规模化生产并保持稳定。应对纯化工艺中可能残存的有害物质进行严格检测，这些组分包括固定相或者流动相中的化学试剂、各类亲和色谱柱的脱落抗体或配基以及可能对目标制品关键质量属性造成影响的各种物质等。 采用细胞培养或酵母
采用PACE分析RNA肽相互作用实验
实验方法原理 聚丙烯酰胺共电泳（poiyacrylamide coelectrophuresis，PACE ) 检测是相对较晚发展起来的定量分析蛋白质、肽与 DNA 或 RNA 相互作用的方法。实验材料 低放射性标记物RNA 底物试剂、试剂盒 TBE 凝胶储存缓冲液电泳缓冲液丙烯酰胺储存液过硫酸铵考
采用PACE分析RNA肽相互作用实验
实验方法原理 聚丙烯酰胺共电泳（poiyacrylamide coelectrophuresis，PACE ) 检测是相对较晚发展起来的定量分析蛋白质、肽与 DNA 或 RNA 相互作用的方法。
跑胶蛋白质弥散
estern Blot（WB）可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了，然而好看的 WB 总是别人的，自己的 WB 总是杂带丛生，尤其是新课题、新抗体，总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子，咱们一起研究一下。 案例一：啥也
跑胶蛋白质弥散
estern Blot（WB）可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了，然而好看的 WB 总是别人的，自己的 WB 总是杂带丛生，尤其是新课题、新抗体，总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子，咱们一起研究一下。 案例一：啥也没有 原因：比较多
跑胶蛋白质弥散
estern Blot（WB）可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了，然而好看的 WB 总是别人的，自己的 WB 总是杂带丛生，尤其是新课题、新抗体，总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子，咱们一起研究一下。 案例一：啥也没有 原因：比较多
磷酸化位点分析实验——高分辨凝胶电泳分离磷酸肽
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤在聚丙烯酰胺凝胶上用 2-DE 纯化磷酸肽是最近发表的制备技术，其结果与 2D-PP 结果相似。非变性凝胶等电聚焦结合碱性 40%PAGE 胶用于磷酸肽分离及比较分析。 32p 标记样品用放射自显影或磷储屏检测。用 Edman 测序方法鉴定蛋白质并确定磷酸化位
膜分离技术在果胶提取中的应用
由于膜分离过程不需要加热，可防止热敏物质失活、杂菌污染，无相变，集分离、浓缩、提纯、杀菌为一体，分离效果高，操作简单，费用低，特别适合食品工业的应用．周仲实采用超滤膜装置对果胶提取液进行处理，初步浓缩除去大部分对胶凝度无贡献的杂质后，再经电渗析脱去大部分盐酸和无机离子，所得提取液可直接干燥获得高
植物蛋白质组学和糖基化实验（四）
3.3 我的糖基化蛋白在哪实验人员可通过这个方法获得关于糖苷在蛋白骨架上的分布及糖苷本身的结构信息。这类实验可在纯化的糖蛋白或者从 1D 或 2D 电泳胶上分离出来的蛋白上进行，首先，用蛋白内切酶消化蛋白质，通过高效液相色谱（HPLC) 分离消化后的肽和糖肽混合物。对含有糖苷的收集组分进行糖
不均一核糖核蛋白复合物的制备实验
在核内，RNA 聚合酶 Ⅱ 的转录产物同大量不同类型的核前体 mRNA/mRNA 结合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucUoprotein，hnRNP) 结合形成 hnRNP 复合物。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理在核内
高效毛细管凝胶电泳仪简介
高效毛细管凝胶电泳仪（CGE）是20世纪80年代后期发展起来的毛细管电泳分离模式。它是将凝胶电泳仪对生物大分子的高效分离能力与毛细管电泳仪的快速、微量和定量分析相结合，是当今分离度极高的一种分离技术。一、工作原理： 将聚丙烯酰胺等在毛细管中交联生成凝胶，以凝胶作为载体
高效毛细管凝胶电泳仪简介
高效毛细管凝胶电泳仪（CGE）是20世纪80年代后期发展起来的毛细管电泳分离模式。它是将凝胶电泳仪对生物大分子的高效分离能力与毛细管电泳仪的快速、微量和定量分析相结合，是当今分离度极高的一种分离技术。一、工作原理： 将聚丙烯酰胺等在毛细管中交联生成凝胶，以凝胶作为载体进
毛细管凝胶电泳仪简介
毛细管凝胶电泳仪（CGE）是20世纪80年代后期发展起来的毛细管电泳分离模式。它是将凝胶电泳仪对生物大分子的分离能力与毛细管电泳仪的快速、微量和定量分析相结合，是当今分离度极高的一种分离技术。一、工作原理：将聚丙烯酰胺等在毛细管中交联生成凝胶，以凝胶作为载体进行电泳，凝胶具有多孔性，类似分子筛的作用
琼脂糖胶和PAGE胶制备方法
一、琼脂糖凝胶的特点 天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80％）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫
冷胶喷胶机的简介和用途
在糊盒机上使用冷胶喷胶系统替代传统的滚轮上胶，具有高效、灵活、稳定性好、操作维护简便等优势，是快速、高质量生产各种纸盒的必备产品。高压活塞泵和高压电子喷枪等具有先进的性能和可靠性，是全自动糊盒机的最佳搭档。 冷胶喷胶机的用途 科祺冷胶喷胶系统具有高效、灵活、稳定性好、维护简便等特点，是快速、