定位候选克隆

当前,人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移,一个以基因组功能研究为主要内容的所谓“后基因组时代”(post-genomics),也即功能基因组(functional genomics)时代,即将到来。如何获取基因的功能信息,即与人类重大疾病和重要生理功能相关的基因信息,就摆在了我们面前。定位候选克隆策略(positional candidate cloning)是传统定位克隆(positional cloning)的改进和发展,并以其在克隆疾病相关基因中的有效性而日益受到重视。 人类基因组计划已确定了一系列分布于全基因组24条染色体上的分子标记。根据这些分子标记的序列和定位信息,结合杂交或PCR的方法可以快速检测染色体上与肿瘤或遗传性疾病相关的热点位置,进而从中克隆疾病相关基因。定位候选克隆克服了经典的定位克隆纯粹依靠连锁分析进行染色体定位的繁冗而缓慢的弊端,大大加快了克隆工作的进程,而且它也不仅仅局限于遗传病,现......阅读全文

定位候选克隆

当前,人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移,一个以基因组功能研究为主要内容的所谓“后基因组时代”(post-genomics),也即功能基因组(functional genomics)时代,即将到来。如何获取基因的功能信息,即与人类重大疾病和重要生理功能相关的基因信息,就摆在了我们面前。

定位候选克隆的基本步骤

定位候选克隆包括三个基本步骤:基因组定位、候选cDNA的获得、全长及功能分析。本文即对此策略的发展和应用作一概要介绍。基因组定位新发展起来的,尤其在分离肿瘤易感基因中常用的方法是用PCR方法检测多样本的杂合性丢失(LOH)或纯合性丢失的高发频率区,从而获得疾病候选基因定位。体细胞抑癌基因的失活是导致

定位克隆的操作步骤

定位克隆首先是获取基因在染色体上的位置的信息,然后采用各种实验方法克隆基因和进行定位。基因的定位克隆策略大体上可以分成四个步骤。①通过家系连锁分析资料或染色体微小缺失(杂合性丢失,LOH)等数据,确定基因在染色体上的位置;②通过染色体步移(chromosomewalking)、染色体区带显微切割等技

定位克隆技术的概念

根据目的基因在染色体上的位置进行基因分离,即通过分析突变位点与已知分子标记的连锁关系确定突变基因在染色体上的位置。

猪克隆胚胎发育关键候选基因被找到

  近日,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物基因工程与种质创新团队研究发现与猪体细胞克隆胚胎初次分裂时间相关的关键候选基因,为提高猪克隆胚胎的发育效率、解析体细胞克隆机制提供了理论基础。相关研究成果在线发表在《基因》上。 该团队研究员牟玉莲介绍,猪体细胞克隆技术是目前唯一可以通过体细胞遗传物质

一种新的数量性状定位方法克隆水稻产量性状优势基因

  7月5日,中国科学院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所国家基因研究中心韩斌研究组与上海师范大学黄学辉研究组、中国水稻所和福建农科院合作在《自然-通讯》(Nature Communications)杂志上发表了题为Dissecting a heterotic gene through G

表达基因的克隆策略与分离表达基因序列的技术方法

人类基因组计划的主要任务之一就是要从大片段基因组区域或整条染色体DNA 上鉴定出基因表达序列(gene expressed sequences)或转录单位(transcription units)。在人类基因组30亿个碱基对中,发生转录的表达序列(即基因)仅占总序列的3~5%。基因组中绝大部

用缺失定位法进行基因定位

缺失定位法一个细胞中的两个同源染色体中的一个上有一个突变基因,另一染色体上有一小段已知范围的缺失,如果这一突变基因的位置在缺失范围内,便不可能通过重组而得到野生型重组体;如果突变基因不在缺失范围内,那么就可以得到野生型重组体。利用一系列已知缺失位置和范围的缺失突变型,便能测定突变型基因的位置。

使用转录定位法进行基因定位

许多 RNA病毒的整个基因组往往作为一个单位转录。随着转录的进行,由基因组上各个基因所编码的蛋白质也依序在寄主细胞中出现。当寄主细胞被紫外线照射使本身的蛋白质合成受到抑制时,病毒蛋白的出现更为明显。紫外线照射也起着抑制病毒基因组的转录的作用。紫外线在 RNA分子的某一部位造成损伤后,损伤的部位和它后

基因定位方法介绍单元化定位法

在构窠曲霉这一类真菌的准性生殖过程中,杂合二倍体细胞在有丝分裂时常随机地丢失它的染色体。染色体在多次有丝分裂过程中逐条丢失而使二倍体细胞终于转变为单倍体细胞的过程称为单元化。如果一对染色体中带有显性的野生型基因的染色体丢失了,那么同源染色体上隐性基因的性状便得以表现。此外,通过体细胞交换也可以从杂合

我科学家找到戒毒候选靶标和候选药物

  记者4月2日从军事医学科学院了解到,经过近20年潜心研究,该院毒物药物研究所李锦课题组在戒毒研究领域取得重要进展:不仅发现了一条新的阿片成瘾调节机制,还找到一个较为理想的抗阿片成瘾候选靶标和候选药物胍丁胺。相关成果在《分子药理学》等国际SCI杂志上发表研究论文40余篇。  

地下电缆故障定位仪的定位测深

  通过发射机对地下电缆发送出1千赫兹电磁波信号,利用电缆定位仪探头与磁力线地平面垂直相切时,收到的信号最小(几乎为零)的原理来测定电缆的走向和深度。当探头与地平面平行前进,信号音响突然变小时,即为电缆的断路点和短路点。  1、零值法(最小法):将探头垂直于地面,在电缆正上方时,收到的信号最小(表头

转录定位法进行基因定位的方法介绍

许多 RNA病毒的整个基因组往往作为一个单位转录。随着转录的进行,由基因组上各个基因所编码的蛋白质也依序在寄主细胞中出现。当寄主细胞被紫外线照射使本身的蛋白质合成受到抑制时,病毒蛋白的出现更为明显。紫外线照射也起着抑制病毒基因组的转录的作用。紫外线在 RNA分子的某一部位造成损伤后,损伤的部位和它后

缺失定位法进行基因定位的方法介绍

一个细胞中的两个同源染色体中的一个上有一个突变基因,另一染色体上有一小段已知范围的缺失,如果这一突变基因的位置在缺失范围内,便不可能通过重组而得到野生型重组体;如果突变基因不在缺失范围内,那么就可以得到野生型重组体。利用一系列已知缺失位置和范围的缺失突变型,便能测定突变型基因的位置。

细胞共定位

实验试剂 高保真聚合酶(pfu ultra),限制性内切酶(XhoI、SpeI、BamHI、SpeI、SacI),金粉,无水乙醇,2.5MCaCl2 ,20ul 0.1M亚精胺实验设备 PCR扩增仪,PDS-1000/He型基因枪,激光共聚焦显微镜(Carl Zeiss LSM 510 )实验材料 

酶标仪中心定位

仪器会自动对酶标孔进行中心定位,中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时,仪器其实要进行35个点的测量,选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。

血尿定位诊断

血尿的定位诊断除紧密结合临床病史、体征和X线、B超等辅助诊断手段外,尿液的实验室检查是一项非常重要的方法。 尿常规分析是血尿定位诊断的基础。血尿标本中若有明显的尿蛋白,医学教谕网整理尤其是肾小球性蛋白尿则提示尿中红细胞的起源可能来自于肾小球。肾小球性蛋白尿常以白蛋白及一些大分子的蛋白为主,而肾

共定位系数

共定位系数 m(1)用于描述通道 1 对共定位区域的贡献,而共定位系数 m(2)用于描述通道 2 对共定位区域的贡献。注意,如 S2(i)大于 0 时,变量 S1(i,coloc)等于 S1(i);对于变量 S2(i,coloc)也是这样的。相对于每个荧光通道的总荧光量来说,这些系数正比于 merg

细胞共定位

实验概要本实验子在构建了中间载体pA7-CFP和pA7-YFP的基础上,构建了pA7- CFP- AtCOP1,pA7-AtCRY1-YFP,pA7- CFP-OsCOPl和pA7-OsCRY1b-YFP载体。利用基因枪将重组质粒轰击入洋葱内表皮。主要试剂高保真聚合酶(pfu ultra),限制性内

基因定位概述

  基因组是生物的生殖细胞中所含全部基因的总和。人类基因组具有极其复杂的结构,其编码蛋白质的结构基因大约有100 000个,每个单倍体DNA含有3.2×109 bp,分布在24条常染色体和X,Y性染色体上。此外,还含有大量的非编码的重复DNA序列。基因定位(gene location)是

四轮定位仪进行定位的相关因素

  四轮定位仪的作用是使汽车保持稳定的直线行驶和转向轻便,并减少汽车在行驶中轮胎和转向机件的磨损。由于各汽车生产厂家对四轮定位原设计的不同、制造的不同,使得各轮的各种倾角和束值就各有不同,并且有可调部分和不可调部分之分。那么,您知道四轮定位仪进行四轮定位的相关因素有哪些吗?   1、外倾角   

用克隆环分离细胞克隆

实验方法原理将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料胰蛋白酶                                                          试剂、试剂盒

用克隆环分离细胞克隆

            实验方法原理 将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。 实验材料

单克隆与克隆的区别

无性增殖(分裂、生殖)叫做克隆,克隆是一个很大的范围,单克隆是指的单克隆抗体,它由融合的细胞得来。是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。“单”和“克隆”要分开看,克隆是因为它是无性增殖来的,通常是一种人工诱导的无性生殖方式或者自然的无性生殖方式(如植物)。是原来细胞的基因的

用克隆环分离细胞克隆

实验方法原理 将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料 胰蛋白酶试剂、试剂盒 硅油仪器、耗材 克隆培养环巴氏吸管生长培养基多孔板无菌镊移液器粗头笔实验步骤 1. 观察细胞克隆,用毡制粗头笔

用克隆环分离细胞克隆

实验方法原理将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料胰蛋白酶试剂、试剂盒硅油仪器、耗材克隆培养环巴氏吸管生长培养基多孔板无菌镊移液器粗头笔实验步骤1. 观察细胞克隆,用毡制粗头笔或 Nik

ABB阀门定位器实现阀门的准确定位

bb阀门定位器主要用于调控控制阀,采集控制器输出的电流控制信号,通过气压信号调控阀门。调控阀产生动作后,阀杆会产生一定的位移,并将相关的信号传递到阀门定位器。定位器对输入控制信号和阀位反馈信号进行对比分析,如果两种信号不同,则促使阀门的驱动部件进行工作,直至两种信号相同为止。如果两种信号相同,则驱动

共定位中用到免疫荧光,“共定位”是什么

共定位的定义:共定位是对样品内两种荧光标记的信号共同分布的位置进行分析。 共定位就如字面意思上所说的,只能够表明蛋白A和B都在此细胞有表达,并且在同样的细胞内位置/细胞器。相关短语:共定位通道 PDM Channel细胞共定位 Cellular co localization细胞内共定位信息 cel

简述分子克隆化克隆的选择

  ①直接筛选:有些载体带有可辨认的遗传标记,能有效地将重组分子与本底区分。例如:有些λ噬菌体携带外源基因后形成的噬菌斑就会从原来的混浊变为清亮;还有些载体分子携带外源基因后,形成的菌落或噬菌斑的颜色有明显变化,如蓝色变为无色;有些λ噬菌体能侵染甲菌而不能侵染乙菌,携带外源DNA片段后便能侵染乙菌,

单克隆抗体的克隆方法

经过抗体测定的阳性孔,可以扩大培养,进行克隆,以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长,互相争夺营养和空间,而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早,太早细胞性状不稳定,数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞,经过