原位杂交组织化学常用试剂及处理
一、杂交前准备 （一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理水（蒸馏水等）中，经猛烈振摇后，于室温静止数小时，然后高压灭菌，以除去降解DEPC（DEPC分解为CO2和乙醇）。有些试剂可直接加入DEPC，终浓度一般为0.1%～0.4%，原则上在杂交及其以前的步骤中，所有液体试剂均需用DEPC处理，或用DEPC水配制，包括乙醇的稀释。此外，接触标本以及标本有关的空中的洗涤也需DEPC水洗涤。 注意：①DEPC是一种潜在的致癌物质，在操作中应尽量在通风的条件下进行，并避免接触皮肤。②含有Tris缓冲液的溶液中，不能加入DEPC。 （二）载玻片的处理 组织原位杂交，常在载玻片上进行，故载玻片的洗涤至关重......阅读全文
原位杂交组织化学常用试剂及处理
一、杂交前准备 （一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理水（蒸馏
原位杂交组织化学常用试剂及处理2
九、原位杂交信号显示 目前应用原位杂交方法中，信号的显示主要有放射自显影，酶底物及免疫金银等方法，在此归纳有关的主要试剂。 1．A-B显影液 称取上述试剂，按配方分别溶于50ml ddH2O中，于显影前，在室温将两者（A液及B液）按1：1混合，稍加摇动促进混合，即可将贴有切片标本的切片放入显影
原位杂交组织化学杂交前处理
杂交前处理的目的在于提高组织通透性。增加靶核酸的可及性以及防止RNA或DNA探针与组织细胞或载玻片之间的非特异性结合，从而增强杂交信号，降低背景。杂交前处理的具体方法和步骤因所采用的固定剂、组织标本以及探针不同而异。用温和的非交联固定剂固定的细胞培养标本和冰冻切片，不需经特殊的杂交前处理，一般均能获
原位杂交组织化学实验要求及步骤
一、基本要求1. 组织取材：组织取材应尽可能新鲜。由于组织RNA降解较快，所以新鲜组织和培养细胞最好在30 min 内固定。2. 固定目的是：（1）保持细胞结构；（2）最大限度地保持细胞内DNA或RNA的水平；（3）使探针易于进入细胞或组织。最常用的固定剂是多聚甲醛，与其它醛类固定剂（如戊二醛）不同
原位杂交组织化学概述
一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功，核酸自动
原位杂交组织化学实验技术3
（四）杂交后处理（post hybridisation treatment） 杂交后处理包括系列不同浓度，不同温度的盐溶液的漂洗。在原位杂交组织化学的实验程序中，这也是一个重要的环节 。特别因为大多数的原位杂交实验是在低严格度条件下进行的，非特异性的探针片段粘附在组织切片上，从而增强了背景染色。R
原位杂交组织化学实验技术2
DNA合成仪的诞生使制造寡核苷酸探针成为可能，与上述探针不同的是寡核苷酸探针不是克隆性DNA探针，它是由DNA合成仪依照所需杂交的靶核苷酸序列合成的。具有制造方便，价格低廉的优点，也可进行放射性与非放射性标记，但其特异性不如克隆性探针强，亦不如其杂交信号高。 原位杂交组织化学技术在近20年的发展
原位杂交组织化学实验技术5
（8）荧光显示： ①生物素标记DNA探针的荧光显示。 1）应用PBS含5%无脂干奶（5μl每张盖片），也可用1%牛血清白蛋白（BSA）-PBS覆盖孵育5min室温，以封闭非特异性结合部位。 2）移除多余液体，加抗生素-FITC（5μg/ml在PBS含5%奶粉或1%BSA，5μl/cm2）。在湿
cRNA探针在原位杂交组织化学
Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交（见Cox et al 1984），核酸探针为单链的RNA分子，产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆（图20-2）。由于它是单链的，不像双链的DNA探针，在溶液中不会再退火（reanneal），因此，较大百分比的探针可参与杂交反应，较cDNA探针
原位杂交组织化学实验技术1
第一节 原位杂交组织化学概述 一、核酸分子杂交技术 1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、质
原位杂交组织化学实验技术6
二、快速原位杂交细胞化学技术 原位杂交免疫细胞化学技术存在的难点之一是实验手续繁琐，实验周期长。国外Liesi等（1986）和国内学者何彬等应用光敏生物素-链亲合素（Biotin-streptavidin）胶体金系统进行原位杂交，得到了快速满意的结果，全部实验可在数小时内完成。 作用把含某种多肽
原位杂交组织化学杂交体检测
杂交体检测又称杂交体显示，是指通过一定方法使杂交反应形成的杂交体（杂交信号）成为在显微镜下可识别的产物。对原位杂交反应信号进行显示的方法因探针标记物不同而异。 （一）放射性核素标记探针的检测 *个原位杂交实验（1969年）以’H作为核酸探针的标记物，杂交信号用放射自显影术检测。随着
原位杂交组织化学实验技术4
二、生物素标记cRNA探针在原位杂交组织化学中的应用 （一）光敏生物素标记cRNA探针的应用 以线性质粒DNA为模板合成未加标记物的cRNA探针，使其最终浓度为0.5～1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再与等体积的光敏生物素（1μg/μl）混合。在150瓦卤素灯下，距离光源20c
DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学
一、DNA探针的应用 虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针，但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。 在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同，所不同的是：（1）杂交时需先在高温80～95℃短时处理，使DNA探针及细胞内靶DNA变性，解离成单链，迅置于冰上冷却。然
原位杂交组织化学技术的基本方法
一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功，核酸自动
原位杂交组织化学技术的基本方法
一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功，核酸自动
原位杂交组织化学技术的基本方法（二）
如前所述，杂交前的准备只是为杂交的成功奠定基础，要获得满意的实验结果，在杂交这一实验过程中还须注意以下的环节。1．探针的浓度 很难事先确定每一种实验探针的浓度，但要掌握一个原则，即探针浓度必须给予该实验zui大的信/噪比值。背景染色的高低也与探针浓度有关。根据国内外实验工作者的经验，认为zui佳原
常用试剂
一 细菌培养试剂 - 返回 - LB培养基 NaCl 10 g Yeast extract 5 g Peptone 10 g Add dH2O to 1000 ml Aliquot to 500ml f
分子生物学实验室常用有毒试剂及应急处理
本文整合了分子生物学实验室常用有毒试剂及应急处理的方法及注意事项。中毒常见的症状包括：呼吸系统、循环系统、消化系统、泌尿系统、神经系统、血液系统。 常见有毒试剂：溴化乙锭（C21H20N3Br，EB） 【性质】：EB是分子生物学常用染料 【毒性】：强诱变剂、中度毒性 【注
分子生物学实验室常用有毒试剂及应急处理
本文整合了分子生物学实验室常用有毒试剂及应急处理的方法及注意事项。中毒常见的症状包括：呼吸系统、循环系统、消化系统、泌尿系统、神经系统、血液系统。常见有毒试剂：溴化乙锭（C21H20N3Br，EB）【性质】：EB是分子生物学常用染料【毒性】：强诱变剂、中度毒性【注意】：通风橱中配制，接触时需戴手套，
免疫组织化学常用染色方法
根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法最常用。
常用的免疫组织化学方法
一. 直接法: 是zui早出现的方法,是将酶直接标记在特异性抗体上,与标本中的抗原结合,让酶催化底物反应产生有色物质,可以在光镜下检测. 直接法放大作用小,不够敏感, 且标记一种抗体只能检测一种抗原,所以应用就受到了限制.二 . 间接法是将酶标记在第二抗体上,形成抗原/一抗 /二抗-酶复合物,zui
常用生化试剂
>>>常用生化试剂货号品 名规 格价 格(元)备 注B1005 Acridine Orange,1/2 ZnCI2 (吖啶橙)5g/10g190/320Sigma分装B1006Acrylamide (电泳级丙烯酰胺)100g/500g120/500Sigma分装B1007
常用化学试剂分类及用途解析
1.HPLC级高纯液相色谱溶剂 HPLC试剂具有以下优点： • 低紫外吸收; • 非挥发性物质、游离酸、游离碱和水份含量低; • 可用于荧光检测; 用途：用于液相色谱(LC)样品制备、LC样品分析、LC-MS分析。 2.农残级试剂 农残级试
原位杂交组织化学与免疫细胞化学结合法
原位杂交组化（ISHH）与免疫组织化学（IHC）结合法是先后用ISHH和IHC在同一切片或两个相邻切片进行染色，这样就可以同一细胞中显示出某种mRNA和相应的蛋白、多肽或其它抗原，从而可更好地了解某一基因的转录和蛋白、多肽合成的动力学。ISHH与IHC结合法可以在相邻切片上分别进行ISHH和IHC染
常用免疫组织化学方法的原理
1. 免疫荧光细胞化学技术 将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量. 2. 免疫酶细胞化学技术 是免疫组织化学研究中最常用的技术．基本原理是先以酶标
常用免疫组织化学染色方法－1
一)、ABC法： (注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行)1.切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。2.切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。3. 无水酒精Ⅰ 30秒。4. 无水酒精Ⅱ 30秒。5. 95% 酒精Ⅰ 30秒。6. 95%酒精Ⅱ 30秒。7. 90%酒精 30秒。8.80%酒精 30秒。9
免疫组织化学常用的检测方法
免疫组织化学（immunohistochemistry）技术的基本原理是抗原-抗体的反应。利用带有标记物（如荧光素或辣根过氧化物酶等）的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起
常用免疫组织化学方法的原理
1. 免疫荧光细胞化学技术 将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量. 2. 免疫酶细胞化学技术 是免疫组织化学研究中最常用的技术．基本原理是先以酶标
常用免疫组织化学染色方法－2
五)免疫组化双染色法。(ⅰ) (Ionmuno- Histochemistry double staimimg method) 1.切片脱蜡至水。2.0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。3.水洗。4.抗原修复。5.PBS洗3次，每次1分钟。6.加入非免疫性动物血清，孵育 10分钟。7.PBS洗3次