常用免疫组织化学方法的原理
1. 免疫荧光细胞化学技术 将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量. 2. 免疫酶细胞化学技术 是免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究. 3. 免疫胶体金技术 就是用胶体金标记一抗,二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性,定位或定量研究.由于胶体金的电子密度高,多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究......阅读全文
常用免疫组织化学方法的原理
1. 免疫荧光细胞化学技术 将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量. 2. 免疫酶细胞化学技术 是免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标
常用免疫组织化学方法的原理
1. 免疫荧光细胞化学技术 将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量. 2. 免疫酶细胞化学技术 是免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标
常用免疫组织化学方法的原理免疫荧光方法
是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高
常用免疫组织化学方法的原理免疫酶标方法
免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是最常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是:定位准确,
常用的免疫组织化学方法
一. 直接法: 是zui早出现的方法,是将酶直接标记在特异性抗体上,与标本中的抗原结合,让酶催化底物反应产生有色物质,可以在光镜下检测. 直接法放大作用小,不够敏感, 且标记一种抗体只能检测一种抗原,所以应用就受到了限制.二 . 间接法是将酶标记在第二抗体上,形成抗原/一抗 /二抗-酶复合物,zui
常用免疫组织化学方法的原理免疫胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金
免疫组织化学常用的检测方法
免疫组织化学(immunohistochemistry)技术的基本原理是抗原-抗体的反应。利用带有标记物(如荧光素或辣根过氧化物酶等)的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起
免疫组织化学常用染色方法
根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素——抗生物素染色法最常用。
常用免疫组织化学染色方法-1
一)、ABC法: (注,下面各种方法,均为手工操作,如没特别说明,均在室温下进行)1.切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。2.切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。3. 无水酒精Ⅰ 30秒。4. 无水酒精Ⅱ 30秒。5. 95% 酒精Ⅰ 30秒。6. 95%酒精Ⅱ 30秒。7. 90%酒精 30秒。8.80%酒精 30秒。9
常用免疫组织化学染色方法-2
五)免疫组化双染色法。(ⅰ) (Ionmuno- Histochemistry double staimimg method) 1.切片脱蜡至水。2.0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。3.水洗。4.抗原修复。5.PBS洗3次,每次1分钟。6.加入非免疫性动物血清,孵育 10分钟。7.PBS洗3次
免疫组织化学法的方法原理
免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理,检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛,成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。
常用的灭菌方法的原理
(1)加热灭菌法利用高温来杀死微生物(超过最高生长温度)的方法。加热灭菌的原理:当高温作用于微生物时,首先引起细胞内生理生化反应速率加快,机体内对温度敏感的物质如蛋白质、核酸等,随着温度的增高而遭受不可逆的破坏,尽而导致细胞内原生质体的变化、酶结构的破坏,从而使细胞失去了生活机能上的协调,停止了生长
常用的灭菌方法的原理
(1)加热灭菌法利用高温来杀死微生物(超过最高生长温度)的方法。加热灭菌的原理:当高温作用于微生物时,首先引起细胞内生理生化反应速率加快,机体内对温度敏感的物质如蛋白质、核酸等,随着温度的增高而遭受不可逆的破坏,尽而导致细胞内原生质体的变化、酶结构的破坏,从而使细胞失去了生活机能上的协调,停止了生长
常用灰分测定原理及方法
一、粮食灰分的测定 粮食中除含有大量有机物质外,还含有较丰富的无机成分。经高温灼烧遗留的无机物质称为灰分。各种粮食的灰分因品种、土壤、气候、肥料及灌溉等条件的不同而有差异。禾谷类粮食中的灰分质量分数一般在1.5~3.0%。 灰分在粮粒中的分布极不均匀,胚乳灰分含量最低,胚部次之,皮层
常用的分离方法沉淀的工作原理
从液相中产生一个可分离的固相的过程,或是从过饱和溶液中析出的难溶物质。沉淀作用表示一个新的凝结相的形成过程,或由于加入沉淀剂使某些离子成为难溶化合物而沉积的过程。产生沉淀的化学反应称为沉淀反应。物质的沉淀和溶解是一个平衡过程,通常用溶度积常数Ksp来判断难溶盐是沉淀还是溶解。溶度积常数是指在一定温度
免疫组织化学技术原理
1. 免疫荧光细胞化学技术将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.2. 免疫酶细胞化学技术是免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或
常用蛋白质测定方法的原理
1、凯氏定氮法准备4个50mL凯氏烧瓶并标号,想1、2号烧瓶中加入定量的蛋白质样品,另外两个烧瓶作为对照,在每个烧瓶中加入硫酸钾-硫酸铜混合物,再加入浓硫酸,将4个烧瓶放到消化架上进行消化。消化完毕后进行蒸馏,全部蒸馏完毕后用标准盐酸滴定各烧瓶中收集的氨量,直至指示剂混合液由绿色变回淡紫红色,即为滴
常用蛋白质测定方法的原理
1、凯氏定氮法准备4个50mL凯氏烧瓶并标号,想1、2号烧瓶中加入定量的蛋白质样品,另外两个烧瓶作为对照,在每个烧瓶中加入硫酸钾-硫酸铜混合物,再加入浓硫酸,将4个烧瓶放到消化架上进行消化。消化完毕后进行蒸馏,全部蒸馏完毕后用标准盐酸滴定各烧瓶中收集的氨量,直至指示剂混合液由绿色变回淡紫红色,即为滴
常用脂肪测定原理及方法汇总
一、糕点、糖果中脂肪的测定 脂肪是食品的主要成分之一,常用的测定方法有:索氏提取法、酸水解法、三氯甲烷冷浸法、罗兹-哥特里法、盖勃法、巴布科氏法和尼霍夫氏碱法等。糕点及糖果食品主要用索氏提取法和酸水解法。 1、索氏提取法 本法适用于各类食品中脂肪含量的测定,操作简便,准确度高,但提取时间长
目的基因分离最常用的方法及原理
1.从生物基因组群体中分离目的基因原核生物基因组较小,基因容易定位,用限制性内切酶将基因组切成若干段后,用带有标记的核酸探针,从中选出目的基因。真核生物一般通过基因组文库的方法获得目的基因。图10-3-1 限制性内切酶限制性内切酶(restrictive enzyme)是20世纪60年代末在细菌中发
目的基因分离最常用的方法及原理
1.从生物基因组群体中分离目的基因原核生物基因组较小,基因容易定位,用限制性内切酶将基因组切成若干段后,用带有标记的核酸探针,从中选出目的基因。真核生物一般通过基因组文库的方法获得目的基因。图10-3-1 限制性内切酶限制性内切酶(restrictive enzyme)是20世纪60年代末在细菌中发
淋巴细胞分离的常用方法及原理
纯淋巴细胞群的采集是利用单核细胞在37℃和Ca2+存在时,能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性,从单个核细胞悬液中除去单核细胞,从而获得纯淋巴细胞群。主要的方法有:①粘附贴壁法;②吸附柱过滤法;③磁铁吸引法。一、粘附贴壁法将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中,
常用化学分析方法及原理
化学分析法分为: 1. 光学分析法:包括分光光度法,原子吸收法,发射光谱法,荧光光谱法等。 2. 电化学分析法:电位法,电导法,电解法,极谱法,库伦法等 3. 色谱分析法:气相色谱法,液相色谱法,薄层色谱法,纸上层析色谱法等 4. 质谱分析法:气质联用,液质联用,等离子体质谱,生物质谱。
免疫组织化学染色方法
实验原理免疫细胞化学(immunocytochemistry)是根据免疫学原理,利用抗体同特定抗原专一结合,对抗原进行定位测定的技术。抗原主要为大分子或与大分子相结合的小分子;抗体则是由浆细胞针对特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果将抗体结合上标记物,再与组织中的抗原发生反应,即可在光镜或电镜下显示出该抗
免疫组织化学染色方法
实验概要免疫组织化学染色法是指在抗体上结合荧光或可呈色的化学物质,利用免疫学原理中抗原和抗体间专一性的结合反应,检测细胞或组织中是否有目标抗原的存在,此方式不只可以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的位置。只要是能够让抗体结合的物质,也就是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、病原体等都可侦测
免疫组织化学染色方法
实验原理免疫细胞化学(immunocytochemistry)是根据免疫学原理,利用抗体同特定抗原专一结合,对抗原进行定位测定的技术。抗原主要为大分子或与大分子相结合的小分子;抗体则是由浆细胞针对特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果将抗体结合上标记物,再与组织中的抗原发生反应,即可在光镜或电镜下显示出该抗
免疫组织化学法的方法特点
免疫组织化学法,英文名称:immunohistochemistry,是通过标记抗体与特异性抗原反应显色的组织化学法。
免疫组织化学概念和基本原理
1、概念和基本原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定位、定性、半定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性和组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜的现像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物
常用密度计的原理
常用的液体密度计和比重计有数显电子密度计、浮子式密度计、静压式密度计、振动式密度计和放射性同位素密度计。 液体密度计: 物体在流体内受到的浮力与流体密度有关,流体密度越大浮力越大。如果规定被测样品的温度(例如规定25℃),则仪器也可以用比重数值作为刻度值。这类仪器中简单的是目测浮子式
免疫组织化学(immunohistochemistry)技术的基本原理介绍
根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应,前者再用标记辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如链霉亲和素等)结合,最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分,在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰