PhageDNA
IntroductionThe phage lysate from the plate contains bacterial DNA and RNA, as well as phage DNA encased in the phage coat. The following procedure, digests bacterial RNA and DNA, precipitates the phage particles, then removes the phage coat with organic extraction. Finally, the DNA is purified by precipitation with alcohol and visualized by gel electrophoresis.Protocol 1. Add RNase A and DNase I, each to a fina......阅读全文
Lambda－DNA－Preparation
Lambda DNA PreparationThis is a plate method that gives very good yield for cloning. I have combined the Promega and Maniatis protocols.Solutions T-TY
λ－噬菌体末端酶的基本信息
中文名称λ 噬菌体末端酶英文名称λ phage terminase定 义λ噬菌体编码的末端酶。能识别结合λDNA连环体中的cos序列，结合后特异性地切割DNA形成12个碱基的黏性末端。此酶还有识别蛋白质衣壳前体和ATP酶的功能，水解ATP提供能量。将切割后所形成的酶-DNA二元复合体运送到蛋白质衣
λ－噬菌体末端酶的基本信息
中文名称λ 噬菌体末端酶英文名称λ phage terminase定 义λ噬菌体编码的末端酶。能识别结合λDNA连环体中的cos序列，结合后特异性地切割DNA形成12个碱基的黏性末端。此酶还有识别蛋白质衣壳前体和ATP酶的功能，水解ATP提供能量。将切割后所形成的酶-DNA二元复合体运送到蛋白质衣
关于位点专一重组的基本介绍
λ噬菌体感染大肠杆菌后，或是进入裂解生长，或是进入溶原生长。当噬菌体裂解宿主细胞的功能受到抑制，噬菌体DNA整合进宿主染色体并随宿主染色体而进行复制，或作为一个独立的郊犹?/SPAN>(如P22)。这称为溶原性(lysogeny)，这类噬菌体称为溶原性噬菌体(lysogenic phage)。当
Isolation－and－Quantification－of－Genomic－DNA－from－Mycobacterium－tuberculosis
Part A. Isolation of Nucleic AcidsNOTE: CAUTION! STEPS 1-10 SHOULD BE PERFORMED USING APPROPRIATE PROCEDURES FOR HANDLING MATERIAL POTENTIALLY CONTAMI
关于转座因子的基本介绍
转座因子（又叫可移，可动因子），是一类在很多后生动物中（包括线虫、昆虫和人）发现的可移动的遗传因子。 一段DNA顺序可以从原位上单独复制或断裂下来，环化后插入另一位点，并对其后的基因起调控作用，此过程称转座。这段序列称跳跃基因或转座子分插入序列（Is因子），转座（Tn），转座phage。转座子是
武汉两高校合作发表Nature论文，揭开这种病毒防御机制的工作原理
众所周知，噬菌体（Phage）是细菌等原核生物的天敌，而它们也进化出了抵御噬菌体的防御系统，包括限制修饰系统、CRISPR系统，以及Gabija系统。Gabija系统存在于大约15%的细菌和古菌基因组中，Gabija仅由两个基因组成——GajA和GajB。 GajA是克服溶解缺陷（overco
酵母人工染色体
· Easy YAC Preparation Method (Andrew Davies,Shaw lab)· Screening YAC libraries (Donis Keller Lab)This is a method for screening YAC l
血清学筛选克隆新抗原/新基因（二）
19. 第一轮筛选得到阳性克隆需要进行第二轮筛选以去除假阳性并获得阳性单克隆噬菌体。过程如第一轮筛选，只不过用直径90mm 平板；具体过程见步骤4，这时所加入的噬菌体溶液是第一轮筛选得到的噬菌体上清（见步骤18），在用前要滴定好噬菌体的滴度，噬菌斑的数量以可区分出单个克隆，同时密度不能太稀为
人工转录因子的部件——人类锌指结构2
Table 2: Binding sites and identity of ZFPs used in VEGF activationWe then generated artificial transcription factors by fusing the three-finger domai
如何借助epMotion－5073l移液工作站完成微量体积的...（一）
如何借助epMotion 5073l移液工作站完成微量体积的qPCR反应体系构建在进行微量体系的液体操作时，如何避免人为误差与日间变化，如何保证结果的一致性提高实验效率？如果减少冗长枯燥的重复操作，减少昂贵试剂的使用，提升操作体验节省实验经费？本篇应用旨在介绍如何用10 μL分液工具实现全自动的微量
人工转录因子的部件——人类锌指结构1
Human zinc fingers as building blocks in the construction of artificial transcription factorsKwang-Hee Bae1, 4, Young Do Kwon1, 2, 4, Hyun-Chul Shin1,
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定3
2．利用末端转移酶和α-32P-ddNTP标记DNA的3ˊ-末端 在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羟基末端，如果作为底物的核苷酸经过修饰（如ddNTP），则可以在DNA的3ˊ-OH上仅加入一个核苷酸。对于双链DNA片段，亦存在DNA的两侧均被标记问题，可通过上述同
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定2
目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法（双脱氧链终止法）和Maxam（1977）提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都同样生成相互独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组核苷酸都有共同的起点，却随机终止于一种（或多种）特定的残基，形成一系列以某一特定核苷酸
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定1
㈣ DNA聚合酶 如前所述，选用合适的DNA聚合酶进行测序反应也是保证测序质量的重要因素之一。常用于双脱氧末端终止法测序的有几种不同的酶： 1．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow片段） 此酶是最早用于建立Sanger测序的酶。但通常会有两个问题：①Klenow片段的持续合成能力较
Cesium－Chloride－Purification－of－T7
SummaryCleaner stocks of T7 that concentrates and purifies T7 bacteriophage.ProtocolGrow 100mL of permissive cells to a density of 108 to 109 cells/ml
DNA重组技术(DNA－Recombination)
一、DNA 的酶切与连接（1）酶切反应：同质粒DNA 的鉴定，只不过是质粒DNA 换为载体DNA 。若大量酶切，则成比例增加。（2）加2倍体积的预冷无水乙醇和1/10体积的3mol/l NaAc混匀，-20℃2h以上。（3）15000rpm离心15min，弃上清。（4）加入75%乙醇洗涤2次，离心弃
Nature重磅：首次在活体动物中实现对肠道细菌的原位、精准基因编辑
近年来，微生物组研究揭示了体内的共生细菌表达的基因通过多种机制影响我们的健康。例如，体内的细菌还能够影响癌症免疫疗法的效果；细菌蛋白质与神经退行性疾病和自身免疫性疾病有关；细菌毒素能够引发包括癌症在内的一系列急性和慢性疾病；细菌能够改变或隔离药物，影响治疗效果。这些研究和发现激发了人们对操纵微生
Nature重磅：首次在活体动物中实现对肠道细菌的原位、精准基因编辑
近年来，微生物组研究揭示了体内的共生细菌表达的基因通过多种机制影响我们的健康。例如，体内的细菌还能够影响癌症免疫疗法的效果；细菌蛋白质与神经退行性疾病和自身免疫性疾病有关；细菌毒素能够引发包括癌症在内的一系列急性和慢性疾病；细菌能够改变或隔离药物，影响治疗效果。这些研究和发现激发了人们对操纵微生
Preparation－of－nucleic－acid－probes
Preparation of nucleic acid probesIn standard nucleic acid hybridization assays the probe is labeled in some way. Nucleic acid probes may be made as s
外界因素对细菌的影响（二）
有些噬菌体不在敏感细菌内增殖，其基因整合于细菌基因组中，成为细菌DNA的一部分，当细菌分裂时，噬菌体的基因亦随着分布至两个子代细菌的基因中。这种噬菌体称为溶源性噬菌体（Lysogenic phage)或温和噬菌体(Temperat phage)。整合在细菌DNA上的噬菌体基因称为前噬菌体
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定2
（1）CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子（如Ca2+、Mg2+等）低渗溶液中时，细菌细胞膨胀成球形，处于感受态；此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面，在丰富培养基中生长数小时后，球状细胞恢复原
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定3
当多克隆位点有外源DNA片段插入时，破坏此酶的N端阅读框架，产生无α互补功能的N端片段，因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色，见图7-11 。如果外源DNA插入片段相当短，不破坏β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的阅读框，有时产生的重组体菌落不呈白色而是呈浅蓝色。4
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体2
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体3
在作为载体时，这些噬菌体有一个很大的优点，即克隆到M13mp载体的外源DNA片段（双链），在子代噬菌体便成为了单链形式。故应用M13mp进行克隆，可方便地分离到大量含有外源DNA某一单链的DNA分子。这种单链DNA可在下列工作中作模板：①主要用作双脱氧链终止法进行DNA序列测定的模板；②制备仅有一条
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体1
载体（vector）是携带靶DNA（目的DNA）片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具。常用的载体是通过改造天然的细菌质粒、噬菌体和病毒等构建而成。目前已构建成的载体主要有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体和人工染色体等多种类型，亦可根据其用途不同分为克隆载体和表达载体二类。载体的构建和选择应考虑以下
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定1
重组DNA是在体外用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异地切割，获得的目的基因或DNA片段与载体重新连接，从而组成一个新的DNA杂合分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，在宿主细胞中进行无性增殖，获得大量的目的基因或DNA片段，此过程称基因克隆。重组的DNA分子也能够在
噬菌体的相关介绍
噬菌体（phage）是侵袭细菌的病毒，也是赋予宿主菌生物学性状的遗传物质。噬菌体必须在活菌内寄生，有严格的宿主特异性，其取决于噬菌体吸附器官和受体菌表面受体的分子结构和互补性。噬菌体是病毒中最为普遍和分布最广的群体。通常在一些充满细菌群落的地方，如：泥土、动物的肠道里，都可以找到噬菌体。 噬菌
General－Laboratory－Procedures,－Equipment－Use,－and－Safety－Considerations
A. Storage .The following properties of reagents and conditions are important considerations in processing and storing DNA and RNA. Heavy metals promo
Cosmid－Cloning:－Cell－preparation,－DNA－packaging,－and－Cell－Transfection
Cosmid Cloning: Cell preparation, DNA packaging, and Cell TransfectionProtocol taken from Stratagene's Gigapack packaging extracts instruction man