Cosmid提取技术
Day OneStart overnight cultures of Cosmid in fresh L-Broth + 25 ug/ml kanamycin. 4 x 250 ml each, inoculate each with metal loop from frozen glycerol stocks.Grow cultures for 12 hours(do not let go for more than 14 hrs.)Day TwoSpin down cultures in 250 ml bottles in Beckman JA-17 rotor at 6,000 rpm for 15 min.Pour off sups, freeze pellets at -20°C for 10 min.Resuspend in 10 ml GET solution + 1 mg/ml lysozyme each, tr......阅读全文
微波提取法与其他物质提取方法相比有什么优点
超声法:将样品至于玻璃容器中(不可用铁质或者金属容器),加溶剂,置于超声波仪器中,打开超声,一段时间后,取出过滤得到滤液。需要超声波仪器。 优点 1.提取效率高:超声波独具的物理特性能促使植物细胞组织破壁或变形,使中药有效成分提取更充分,提取率比传统工艺显著提高达50—500%; 2.提取时
SPA的提取、纯化与鉴定(煮沸提取法和溶菌酶消化法)
(一) SPA的提取SPA提取的方法很多,包括煮沸法、溶菌酶法、葡萄球菌溶素法、超生波法以及三氯醋酸法等。现将常用的方法介绍如下:1.煮沸提取法⑴ 将菌株接种于蛋白胨葡萄糖琼脂培养基上,37℃培养20h~24h。⑵ 以 0.15mol/L pH5.9PB液将菌苔洗下,配成10%(V/V)的悬液。⑶
索氏提取法和超声波提取法有什么不同
超声法:将样品至于玻璃容器中(不可用铁质或者金属容器),加溶剂,置于超声波仪器中,打开超声,一段时间后,取出过滤得到滤液。需要超声波仪器。 优点 1.提取效率高:超声波独具的物理特性能促使植物细胞组织破壁或变形,使中药有效成分提取更充分,提取率比传统工艺显著提高达50—500%; 2.提取
病毒-DNA-的提取实验——全血细胞中病毒-DNA-的提取
实验材料全血试剂、试剂盒裂解缓冲液 A裂解缓冲液 B蛋白酶 K仪器、耗材离心机水浴锅实验步骤1. 在 750µl 全血中加入等量裂解缓冲液 A,混匀, 12000 r/min 离心 30 s, 弃上清液。2. 用 1.5mL 裂解缓冲液 A 悬起沉淀,再重复离心 1次,弃上清液。3. 用 117µL
索氏提取器应用举例萃取法提取粗咖啡因
用滤纸制作圆柱状滤纸筒,称取10g茶叶,用研钵捣成茶叶末,装入滤纸筒中,将开口 端折叠封住,放入提取筒中,将150mL圆底烧瓶安装于电热套上,放入2粒沸石,安装好索氏提取装置,从仪器上部的回流冷凝管中加入够两次虹吸量的95 %乙醇(当流入索氏中提取器中的液体量超过虹吸管的高度时,液体会沿着虹吸管全部
水溶液提取法提取氟生物(植物)所需的仪器和试剂
试剂(1)NaOH,优级纯。(2)冰乙酸,分析纯(3)柠檬酸钠,分析纯。(4)电导率为18.2MΩ/cm的二次去离子水(或 Millipore超纯水)(5)氟的标准贮备溶液,1000mg/kg。主要仪器(1)氟离子选择电极。(2)pH计。(3)精确度0.001g的分析天平(4)翻转型振荡机。(5)离
紫锥菊提取物中的天然产物的分离提取
本文将重点讨论Prep150 LC系统用于从紫锥菊提取物等天然产物的提取分离有效成分。系统自带ChromScope软件简单直观,可快速实现化合物的分离。本文原理同样适用于带紫外发色团的任意化合物的分离。 菊苣酸为紫锥菊中主要化合物的一种,它是苯丙素和咖啡酸的衍生物3,4。具有医疗用途,包
关于索氏提取器提取过程中的注意事项
1、一般在实验中水浴的温度不能过高以防止暴沸造成目标物的损失; 2、在索氏提取中,装样品一般都是用滤纸筒,不宜使用金属的筛筒(这会造成部分农药目标物的分解,如,Fe可能会造成某些有机氯农药分解)。此外,应注意滤纸筒在装样之后与提取器的匹配,尤其须注意纸筒不能堵塞虹吸回流管。 3、实验中所使用
DNA提取方法DNA-提取后纯化:将-DNA-与色谱柱结合
离液盐对于裂解至关重要,而且对于将 DNA(或 RNA)与色谱柱结合也是如此。此外,为了增强和影响核酸与二氧化硅的结合,还添加了酒精。大多数情况下这是乙醇,但有时可能是异丙醇。乙醇百分比和体积有很大的影响。太多,你会带入大量降解的核酸和小物种,这会影响 A260 读数并降低你的一些产量。太少,可能难
土壤样品有机污染物的提取方法介绍索式提取
1.使用范围和原理索式提取法适用于提取土壤样品中非挥发性和半挥发性有机化合物,样品制备时可用于分离和浓缩不溶于水和微溶于的有机污染物但当物质受热易分解和萃取剂沸点较高时,不宜用此种方法。索式提取从原理上讲属于液固萃取的一种,是利用溶剂对固体混合物中所需成分的溶解度大,对杂质的溶解度小来达到提取分离的
土壤样品有机污染物的提取方法介绍微波辅助提取
1.使用范围和原理微波辅助提取是对土壤中的有机物(包括稠环芳香碳烃化合物、取代苯酚类化合物、邻苯二甲酸酯类化合物、有机氯农药、有机磷以及多氯联苯等)进行提取处理,适用于提取土壤中的有机物。微波辅助提取法具有萃取时间短、加热均匀、节能高效、安全无害的优点,属于绿色工程。微波辅助提取技术是利用微波加热的
氟生物(植物)有效态的化学提取方法水溶液提取法
一、方法要点本方法适用于各种类型土壤中氟的生物(植物)有效态的化学提取分析。提取剂采用电导率为18.2MΩ/cm的二次去离子水。提取液中氟的浓度可用氟离子选择电极法进行测定。二、试剂(1)NaOH,优级纯。(2)冰乙酸,分析纯(3)柠檬酸钠,分析纯。(4)电导率为18.2MΩ/cm的二次去离子水(或
种子DNA提取仪在黄瓜种子DNA快速提取中的应用
市面上出售的很多作物种子在正式销售之前,都需要进行种子纯度鉴定,而采用最多的种子纯度鉴定技术为SSR技术,该技术的应用是建立在良好的种子DNA提取方法之上的,因此在进行种子纯度检测的时候,可以利用种子DNA提取仪来快速提取种子DNA。 种子DNA提取仪可以说是实验室样品前处理名副其实
病毒-DNA-的提取实验——拭子标本中病毒-DNA-的提取
实验材料拭子标本试剂、试剂盒TE 缓冲液裂解液蛋白酶K仪器、耗材离心机棉签实验步骤预操作:将采有口腔、鼻腔或生殖道等处分泌物标本的棉签置于 2 ml 生理盐水中,洗下标本。若标本在 4 h 内处理,可置于室温保存,否则需 4℃保存。1. 将生理盐水中的标本以 2 000 r/min 离心 5 min
DNA提取试剂盒与苯酚氯仿提取DNA法的异同
酚-氯仿方法是提取核酸的经典方法,主要原理是利用核酸、蛋白等杂质在水相和有机相中溶解度不同而重新分配。试剂盒原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(一般是硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,再改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE中。酚氯仿方法经典、便宜,用的都是实验室常用试剂,提纯效率和
荧光原位杂交探针和荧光探针有什么区别
荧光原位杂交探针和荧光探针有什么区别 荧光原位杂交技术问世于70年代后期,其曾多用于染色体异常的研究,近年来随着FISH所应用的探针钟类的不断增多,特别是全Cosmid探针及染色体原位抑制杂交技术的出现,使FISH技术不仅在细胞遗传学方面,而且还广泛应用于肿瘤学研究,如基因诊断基因定位等 。原
生物分子的提取概述
生物分子分生物小分子和生物大分子。生物小分子的结构由较强的共价键决定。生物大分子中除较强的共价键外,还含有较弱的共价键和次级键,需温和的条件才能保证生物大分子的活性不被破坏。这两类生物分子的提取液成分和操作条件差别很大。 生物分子的提取在离心机分离纯化的前期。将样品研磨,
多克隆抗体提取实验
实验材料 血清试剂、试剂盒 DEAE纤维素磷酸盐缓冲液仪器、耗材 烧杯布氏滤斗滤纸实验步骤 1. 称取DEAE-纤维素(DE32或DE52)50 g,置于1 000 ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05 mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡
痘苗病毒DNA提取实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 纯化的痘苗病毒
质粒提取的小技巧
现在用质粒提取试剂盒非常方便,而且菌体培养后,可以多管浓缩提取,提到的质粒量多,可以-20℃保存,以后用于酶切、转化等实验,可以提前跑个胶,只要不降解,就可以继续用,避免每次要用,都要培养一遍再提取一遍。 提取质粒的时候,后一步的酒精挥发很关键,基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以这
细胞总RNA的提取
提取细胞RNA的步骤:1) 六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol,冰上放置5min,枪头吹打。2) 将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中,加入氯仿0.2ml/管,用力振摇15s。15-30℃下孵育2-3min,离心(4℃,12,000g,15min)。3) 离心后液体分为三层(上层-无色
什么是核酸提取仪
核酸提取仪,是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器,核酸提取仪分为两类:一类是大型的自动化的,一般称为自动液体工作站;另一类是小型自动核酸提取仪,利用封装好的配套试剂自动完成提取纯化过程。大型自动液体工作站因为设备成本高昂,运行成本高,适合一次提取几千个同一种类标本,所以真正
超声辅助提取的优势
缩短提取时间和提高提取效率。 超声波提取不对提取物的结构、活性产生影响。 应用广泛,不受成分极性、分子质量大小的限制,适用于绝大多数有效成分的提取 [2] 。 操作简单易行、提取料液杂质少、有效成分易于分离、纯化。
小麦总RNA的提取
实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片,迅速在液氮中研磨成粉末,转入已准备好的离心管中,剧烈震荡。
如何改善RNA提取质量
1.在收获组织及细胞死亡之后,应立即灭活内源的RNA酶,以防止RNA降解。以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活:1)用含离液(如胍盐)的细胞裂解液收获样品,并立即匀浆。2)用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是:组织块必须保证足够小,在浸入液氮的瞬间就能冻结,以确保瞬间令RNA酶失活3)立即将样品置
如何提取蛋白质?
对于每个大肠杆菌表达的目的蛋白,确定其产生、定位及估计培养基或细胞中的产量都相当重要。为了简化确定工作,通常对总细胞蛋白及培养液、周质、可溶胞质和不溶胞质部分进行小规模分析。分析的结果有利于诱导条件优化或确定大规模诱导条件,以及采用合适的蛋白抽提方法用来纯化目的蛋白。下面简单的介绍总细胞蛋白的提
什么是抗原提取细胞-?
抗原提取细胞是指具有摄取、处理抗原并将抗原信息提呈给T淋巴细胞的一类细胞,又称为辅佐细胞。在胸腺依赖性抗原诱导B淋巴细胞产生抗体的过程中,不仅需要T、B淋巴细胞的协同作用,还需要另一类细胞的协助,遂将该类细胞称为辅佐细胞。在机体的免疫识别、免疫应答与免疫调节中起重要作用。 T细胞按照功能和表面标志
核酸提取仪的特点
核酸提取仪,是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器,核酸提取仪分为两类:一类是大型的自动化的,一般称为自动液体工作站;另一类是小型自动核酸提取仪,利用封装好的配套试剂自动完成提取纯化过程。大型自动液体工作站因为设备成本高昂,运行成本高,适合一次提取几千个同一种类标本,所以真正得到
小麦总RNA的提取
实验概要从黄化小麦苗中提取总RNA,可以为cDNA文库的构建做好准备。实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄
索氏提取器简介
防水卷材可溶物含量检测是按照GB328中,关于防水卷材可溶物含量分析而设计的仪器。是各种防水卷材物理检验的必备仪器设备,它的加热装置采用电热套加热,温度可调,无明火,更具有安全性。该仪器执行新标准选用高精度智能仪表,全程采用电脑信息采集处理器完成整个生产实验过程,具有操作简单,实验数据准确的优点,享