痘苗病毒DNA提取实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 纯化的痘苗病毒 试剂、试剂盒 Tris•Cl 溶液 SDS 蔗糖溶液 蛋白酶 K 用 50 mmol／L Tris • Cl 溶液平衡的苯酚 1：1苯酚氯仿 1 mol／L 乙酸钠 乙醇 仪器、耗材 分光光度计 ......阅读全文
痘苗病毒DNA提取实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 纯化的痘苗病毒
痘苗病毒DNA提取实验
如果提取的痘苗病毒DNA用于转染，则应在蛋白酶 K 消化和苯酚抽提后分离。具体方法见本实验。实验材料纯化的痘苗病毒试剂、试剂盒Tris•Cl 溶液SDS蔗糖溶液蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris • Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸钠乙醇仪器、耗材分光光度计Sorval
痘苗病毒DNA提取实验
实验方法原理 实验材料 纯化的痘苗病毒试剂、试剂盒 Tris•Cl 溶液SDS蔗糖溶液 蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris • Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸钠乙醇仪器、耗材 分光光度计Sorvall 离心机实验步骤 1. 在 260 nm 处确定纯化的疸苗病毒的光密
痘苗DNA检测实验
实验方法原理 实验材料 贴壁生长良好的单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒 PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取缓冲液乙酸钠乙醇PCR 扩增缓冲液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培养基完全 MEM-10／BrdU 培养基筛选试剂4
痘苗DNA检测实验
PCR 法 斑点杂交法 Southern 杂交法 实验方法原理 实验材料
痘苗病毒纯化实验
实验方法原理 对于很多研究，部分纯化的病毒就足够了（进行到本实验步骤 14）， 如果是纯化 MVA 病毒，则不能用胰酶消化，也不能用 CEF 细胞或 BHK-21 细胞代替 HeLa 细胞。实验材料 痘苗病毒储液HeLa S3 细胞（悬浮培养）试剂、试剂盒 胰酶Tris • Cl蔗糖仪器、耗材 旋转
痘苗病毒纯化实验
痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度离心的方法纯化。纯化的病毒可用于制备痘苗病毒 DNA ，用于不允许存在感染细胞蛋白污染的研究中，同时也可以用作高滴度的病毒储液。对于大规模的纯化（至少 1 L 的培养物），最好的方法是用 HeLa 细胞悬液作为感染的对象，而不要用单层培养的细胞。内容来源于《精编分子生物学
痘苗病毒纯化实验
大规模纯化 实验方法原理 对于很多研究，部分纯化的病毒就足够了（进行到本实验步骤 14）， 如果是纯化 MVA 病毒，则不能用胰酶消化，也不能用 CEF 细胞
病毒－DNA－的提取实验
实验方法原理 实验材料 全血试剂、试剂盒 裂解缓冲液 A裂解缓冲液 B蛋白酶 K仪器、耗材 离心机水浴锅实验步骤 1. 在 750µl 全血中加入等量裂解缓冲液 A,混匀， 12000 r/min 离心 30 s, 弃上清液。2. 用 1.5mL 裂解缓冲液 A 悬起沉淀，再重复离心 1次，弃上清液
病毒－DNA－的提取实验——培养细胞中病毒－DNA－的提取
实验材料细胞试剂、试剂盒裂解液TE 缓冲液仪器、耗材培养瓶EP管真空泵实验步骤1. 贴壁培养细胞倾去培养液，加 PBS 洗 2次,加胰蛋白酶消化 (37℃, 5~10 min)后移入Ep管中，2000 r/min 离心 10 min, 弃上清液，用 PBS 悬浮细胞，离心洗涤 2~3次，用 PBS
痘苗DNA检测实验——PCR－法
除了 PCR 和 Southern 杂交可以检测病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 点迹杂交方法检测在分离的噬斑中的重组病毒。本实验主要介绍用这3种方法来检测痘苗DNA。实验材料贴壁生长良好的单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
病毒－DNA－的提取实验——全血细胞中病毒－DNA－的提取
实验材料全血试剂、试剂盒裂解缓冲液 A裂解缓冲液 B蛋白酶 K仪器、耗材离心机水浴锅实验步骤1. 在 750µl 全血中加入等量裂解缓冲液 A,混匀， 12000 r/min 离心 30 s, 弃上清液。2. 用 1.5mL 裂解缓冲液 A 悬起沉淀，再重复离心 1次，弃上清液。3. 用 117µL
病毒－DNA－的提取实验——拭子标本中病毒－DNA－的提取
实验材料拭子标本试剂、试剂盒TE 缓冲液裂解液蛋白酶K仪器、耗材离心机棉签实验步骤预操作：将采有口腔、鼻腔或生殖道等处分泌物标本的棉签置于 2 ml 生理盐水中，洗下标本。若标本在 4 h 内处理，可置于室温保存，否则需 4℃保存。1. 将生理盐水中的标本以 2 000 r/min 离心 5 min
痘苗病毒系统基因表达实验
重组痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂质体转染 两种重组痘苗病毒共感染细胞 实验方法原理 本方案从构建外源基因位于 PT7 和 T7 终止子之间的质
痘苗病毒系统基因表达实验
实验方法原理 本方案从构建外源基因位于 PT7 和 T7 终止子之间的质粒载体开始，然后用重组质粒通过脂质体介导转染已经被vTF7-3（可以持续表达T7 RNA聚合酶的痘苗病毒）感染的细胞。收获后，基因产物在细胞内的表达可以用脉冲标记的方法或用「重组痘苗病毒及其产物的鉴定实验」中叙述的方法分
病毒－DNA－的提取实验——新鲜或冷冻组织中病毒－DNA－的提取
实验材料新鲜或冷冻组织试剂、试剂盒匀浆缓冲液裂解液仪器、耗材剪刀匀浆器离心机实验步骤1. 取新鲜或刚解冻的组织去除血水和结缔组织，在冰浴上剪成小碎块。2. 将组织碎块移入预冷的匀浆器中，按 10 ml/g 加入匀浆缓冲液，混匀，制成匀浆液。3. 将匀浆液移人 Ep 管， 5000 r/min 离心1
痘苗DNA检测实验——Southern－杂交法
实验方法原理以前，用 HindIII 限制性内切核酸酶消化鉴定痕苗病毒 DNA。大部分的外源基因插入重组病毒的 TK 基因中，TK 基因位于 HindIII 5.1 kb 的 J 片段上。这样在重组病毒中，如果插入片段上没有 HindIII 内切酶位点，则J片段就会增大。如果缺乏 HindIII 5
痘苗病毒系统基因表达实验（二）
实验方法原理含有 pT7 控制的外源基因（本实验「重组痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂质体转染」）的重组质粒，通过同源重组可整合到痘苗病毒中,并制备重组病毒储液。将此病毒储液与 vTF7-3 共同感染贴壁或悬浮细胞，在培养过程中，外源基因被高效的 T7 RNA 聚合酶转录，并在感染细胞的细胞质完成
痘苗病毒系统基因表达实验（一）
本节介绍依赖于在哺乳动物细胞质合成噬菌体 T7 RNA 聚合酶的瞬时细胞质表达系统。首先，将感兴趣的基因插入质粒中，使其位于 T7 RNA 聚合酶启动子（PT7）的控制下。应用脂质体转染，重组质粒进入感染了 vTF7-3 的细胞质中，而 vTF7-3 是一种能编码噬菌体T7 RNA聚合酶的重组痘苗病
痘苗DNA检测实验——斑点杂交法
实验材料贴壁生长良好的单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒NaOHTris • Cl2×SSCPBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取缓冲液乙酸钠乙醇PCR 扩增缓冲液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培养基完全 MEM-10／BrdU
痘苗病毒储液制备
基本方案 噬斑分析测定滴度 实验方法原理 实验材料 悬浮培养的 HeLa S3
痘苗病毒储液制备
实验材料悬浮培养的 HeLa S3 细胞痘苗病毒试剂、试剂盒完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶仪器、耗材Sorvall H-6000A 转子150 cm2 组织培养瓶CO2 培养箱实验步骤1. 用血细胞计数器对悬浮培养的 HeLa S3 细胞进行细胞计数。2. 将 5×
痘苗病毒储液制备
实验方法原理 实验材料 悬浮培养的 HeLa S3 细胞痘苗病毒试剂、试剂盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶仪器、耗材 Sorvall H-6000A 转子150 cm2 组织培养瓶CO2 培养箱实验步骤 1. 用血细胞计数器对悬浮培养的 HeLa S3 细胞进行细
动物DNA提取实验
实验方法原理 在浓氯化钠（1-2 mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小，在稀氯化钠（0.14 mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。 将抽提得的
DNA的提取实验
实验方法原理 酚为有效的蛋白质变性剂，并且饱和的酚与水相有效的分开．因此，在含核酸的样品加入酚，可将样品中的蛋白质变性后形成沉淀层，位于水相与有机相的界画，从而达到纯化核酸的目的．但酚不能完全抑制RNA酶的活性，而且酚层中含有10－15%的水
质粒DNA提取实验
实验方法原理 质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。 提取质粒的基本步骤分为三步：①细菌的培养和质粒的扩增②细菌菌体的裂解③质粒DNA的纯化实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒
植物DNA提取实验
实验方法原理 真核细胞基因组在提取过程中一般有以下几步，首先是机械法破细胞抽提；然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染；最后纯化出DNA。实验材料 幼嫩的植物材料试剂、试剂盒 液氮CTAB抽提缓冲液NaACTris-HCl EDTA氯仿异戊醇TE buffer仪器、耗材 瓷研钵离心管离心机实验步骤 一
动物DNA提取实验
标签： 动物肝脏 DNA 提取动物肝脏DNA提取可以：（1）用于法医学鉴定；（2）
dna提取实验步骤
利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐溶液除去RNA，将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，离心后收集上清液。在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M。加入2倍体积95%乙醇，立即用搅拌法搅出。分别用66%，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤，最后在空气中干燥，既得DNA样品。此法提取的DNA中
质粒DNA提取实验
碱解法SDS碱裂解法（试剂盒提取）实验方法原理碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性，再将pH值调至中性使其复性，复性的为质粒DNA，而染色体DNA不会复性，缠结成网状物质，通过离心除去。实验材料大肠杆菌