流式细胞仪标本制备1

流式细胞仪(FCM)是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器,已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断,对淋巴细胞群和亚群进行精确分类,还能分离纯化某一群或亚群细胞。活细胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备,染色后也能在荧光显微镜下进行观察,在某些实验条件下,活细胞免疫荧光染色后的特异性和敏感性要优于滴片固定的常规间接免疫荧光的结果。(一) 原理活细胞表面保留有较完整的抗原或受体,先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合,再用荧光标记的第二抗体结合,根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。(二) 操作步骤制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法)↓用10%FCS RPMI1640调整细胞浓度为5×106~1×107/ml......阅读全文

染色体GTG标本制备实验

基本方案             实验方法原理 非显带染色体除可根据形态分辨部分染色体,其他多数染色体难以确认,而显带技术则可使染色体纵向长度上出现不同带纹,以辨认全部染色体。GT

水稻根尖染色体标本制备

实验概要        水稻根尖染色体标本制备实验步骤1.取材: 选取水稻种子,充分浸种后,将它们摆在铺有滤纸的培养皿内,在约28℃条件下发芽培养,当胚根长至1~1.5cm时,剪下备用。2.预处理     压片法:采用0.1%秋水仙素处理2h左右    去壁低渗法可采用以下四种方法处理       

病毒透射电镜病毒标本制备实验——悬滴标本法

实验方法原理病毒等微小颗粒标本可取其培养物经稀释或分离提纯后直接滴于附有支持膜的载网上用电镜观察。实验材料病毒试剂、试剂盒稀释液仪器、耗材透射电镜实验步骤悬液应尽量除去杂质如培养基残渣,细胞碎片、糖类及各种盐类的结晶等,这些杂质的存在会干扰染色及电镜观察。用该法的缺点是由于电子穿透能力很弱,只能观察

羊水细胞染色体标本的制备

一、原理    人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养,但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞,依据其外形和生长特征可区分为以下三类:上皮细胞(E)、成纤维细胞(F)和羊水细胞(AF)。E细胞在胰酶消化的连续培养中不再生长,所以在培养过程中的生长期最短。AF细

染色体提前凝集标本制备实验

实验方法原理七十年代初,由于发现M期细胞内有某种促进染色体凝集因子,它无种属特异性,所以在细胞融合和染色体技术的基础上,建立了制备染色体提前凝集标本的方法。即让M期细胞与间期(I期)细胞融合,从而诱导I期细胞染色质提前浓缩成染色体。形成的这种染色体称提前凝集的染色体(PrematurelyConde

染色体提前凝集标本制备实验

基本实验实验方法原理七十年代初,由于发现M期细胞内有某种促进染色体凝集因子,它无种属特异性,所以在细胞融合和染色体技术的基础上,建立了制备染色体提前凝集标本的方法。即让M期细胞与间期(I期)细胞融合,从而诱导I期细胞染色质提前浓缩成染色体。形成的这种染色体称提前凝集的染色体(PrematurelyC

豚鼠离体气管标本制备实验

实验材料豚鼠仪器、耗材木棍Kerbs营养溶液手术剪实验步骤1. 气管连环标本 豚鼠1只,体重500g,用木槌击毙,立即从腹面正中切开皮肤和皮下组织,细心分离出气管,自甲状软骨下剪下整段气管,置于盛有Kerbs营养溶液的平皿中,剪除气管周围组织。从软骨环之间由前向后和由后向前进行交叉横切,均不完全切断

豚鼠离体气管标本制备实验

实验材料 豚鼠仪器、耗材 木棍Kerbs营养溶液手术剪实验步骤 1. 气管连环标本 豚鼠1只,体重500g,用木槌击毙,立即从腹面正中切开皮肤和皮下组织,细心分离出气管,自甲状软骨下剪下整段气管,置于盛有Kerbs营养溶液的平皿中,剪除气管周围组织。从软骨环之间由前向后和由后向前进行交叉横切

离体蛙心标本的制备实验

实验材料蛙仪器、耗材蛙板小玻板粗剪刀直剪刀大镊子小镊子眼科剪刀探针玻璃分针大烧杯小烧杯滴管培养皿棉线任氏液锌铜叉实验步骤(1)暴露蛙心:取蟾蜍一只,毁坏脑和脊髓,将其仰卧固定在蛙板上。从剑突下将胸部皮肤向上剪开或剪掉,然后剪掉胸骨,打开心包,暴露心脏和动脉干。 (2)观察心脏的解剖结构:在腹面可以看

正常细胞常规核型的标本制备实验

微量全血培养 人淋巴细胞染色体标本制备 肿瘤细胞的染色体标本制备 人体染色体常规核型的分析             实验方法原理 采用微量全血培养人体外

正常细胞常规核型的标本制备实验

微量全血培养 人淋巴细胞染色体标本制备 肿瘤细胞的染色体标本制备 人体染色体常规核型的分析             实验方法原理 采用微量全血培养人体外

正常细胞常规核型的标本制备实验

微量全血培养人淋巴细胞染色体标本制备肿瘤细胞的染色体标本制备人体染色体常规核型的分析实验方法原理采用微量全血培养人体外周血中淋巴细胞,在淋巴母细胞分裂高峰时加入秋水仙素,破坏细胞纺锤体的形成,使细胞停止在分裂中期。然后收集细胞,低渗处理,使细胞胀大,染色体伸展。接着进行固定并除去中期分裂相中残存的蛋

羊水细胞染色体标本的制备

一、原理人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养,但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞,依据其外形和生长特征可区分为以下三类:上皮细胞(E)、成纤维细胞(F)和羊水细胞(AF)。E细胞在胰酶消化的连续培养中不再生长,所以在培养过程中的生长期最短。AF细胞在再培

病毒透射电镜病毒标本制备

实验方法原理 病毒等微小颗粒标本可取其培养物经稀释或分离提纯后直接滴于附有支持膜的载网上用电镜观察。实验材料 病毒试剂、试剂盒 稀释液仪器、耗材 透射电镜实验步骤 悬液应尽量除去杂质如培养基残渣,细胞碎片、糖类及各种盐类的结晶等,这些杂质的存在会干扰染色及电镜观察。用该法的缺点是由于电子穿透能力很弱

离体蛙心标本的制备实验

实验材料 蛙仪器、耗材 蛙板小玻板粗剪刀直剪刀大镊子小镊子眼科剪刀探针玻璃分针大烧杯小烧杯滴管培养皿棉线任氏液锌铜叉实验步骤 (1)暴露蛙心:取蟾蜍一只,毁坏脑和脊髓,将其仰卧固定在蛙板上。从剑突下将胸部皮肤向上剪开或剪掉,然后剪掉胸骨,打开心包,暴露心脏和动脉干。 (2)观察心脏的解剖结构:在腹面

免疫标记电镜技术标本制备的要求

  为保持组织的抗原性,固定剂不宜过强。  1.包埋前染色  优点是切片染色前不经过锇酸固定、脱水及树脂包埋等过程,抗原未被破坏,易于获得良好的免疫反应。特别适用于含抗原量较少的组织。  2.包埋后染色  优点是超微结构保存较好,方法简便,阳性结构有高度的可重复性,能在同一张切片上进行多重免疫染色。

抗原的制备1

抗原的制备  除完整的细胞可作为抗原外,各种不同的细胞内存在的各种分子量不同的物质,也都具有全抗原或半抗原的性质,某种抗原物质可能是某一类细胞所特有的,可作为这种细胞的一个标志。由于细胞存在着许多性质不同的抗原物质,有时要从这众多的物质中提取、纯化某种抗原物质,以供科学研究之用。  一、抗原的提取 

制备细菌染色标本时,应注意哪些问题

1.首先挑取一环(接种环)生理盐水于玻片上.2.再挑一点菌落(量要少,看你键盘上小键盘上的"."那么大就够了)3.先在玻片上生理盐水附近磨菌落,把菌落都磨到玻片上,再将生理盐水拉进来,与菌落混合涂匀.****如果直接放到生理盐水里,很可能菌落整块从环上脱落就不容易涂开了.4.涂好后,在酒精灯火焰上来

姊妹染色单体互换标本制备与分析实验

实验方法原理 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridinc简称BrdU)是胸腺嘧啶核苷的类似物。人体淋巴细胞在含有BrdU的培养液中进行DNA复制时,BrdU可专一替代胸腺嘧啶核苷,而掺入到新复制的DNA核苷酸链中。因此只要通过两个复制周期,就可使姊妹染色单体中一条单体的DNA链中,

动物染色体标本的制备与观察

实验概要本实验介绍了动物染色体标本(cell chromosome)制备的原理及操作步骤。实验原理凡细胞处于活跃增殖状态,或者经过各种处理后,细胞就可进入分裂的任何动物组织,均可用于染色体分析。在正常动物体内,骨髓是处于不断分裂的组织之一。给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中

姊妹染色单体互换标本制备与分析实验

基本方案             实验方法原理 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridinc简称BrdU)是胸腺嘧啶核苷的类似物。人体淋巴细胞在含有BrdU的培养液中

霉菌水浸标本片的制备与观察

(一)实验目的:学习自制水浸片观察霉菌的形态(二)实验原理:霉菌的营养体是分枝的丝状体。其个体比细菌和放线菌大得多,分为基内菌丝和气生菌丝。气生菌丝中又可分化出繁殖丝。不同霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子。霉菌菌丝较粗大,细胞易收缩变形,且孢子容易飞散,所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液

霉菌水浸标本片的制备与观察

(一)实验目的:学习自制水浸片观察霉菌的形态(二)实验原理:霉菌的营养体是分枝的丝状体。其个体比细菌和放线菌大得多,分为基内菌丝和气生菌丝。气生菌丝中又可分化出繁殖丝。不同霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子。霉菌菌丝较粗大,细胞易收缩变形,且孢子容易飞散,所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液

实验动物组织标本的制备实验_解剖法

通常选用家兔、豚鼠、大白鼠或小白鼠等动物,禁食24 小时。击头致昏,以避免麻醉或失血对胃肠道机能的影响。立即打开腹腔,取出所需的胃、肠、胆囊等。去除附着的系膜或脂肪等组织。迅速放入充氧(或95%O2+5%CO2 )保温(37 ℃)的营养液中,并以注射器用营养液将管腔内的食物残渣清洗干净。实验材料家兔

姊妹染色单体互换标本制备与分析实验

基本方案             实验方法原理 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridinc简称BrdU)是胸腺嘧啶核苷的类似物。人体淋巴细胞在含有BrdU的培养液中

动物染色体标本的制备与观察

实验原理凡细胞处于活跃增殖状态,或者经过各种处理后,细胞就可进入分裂的任何动物组织,均可用于染色体分析。在正常动物体内,骨髓是处于不断分裂的组织之一。给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期,然后采用常规空气干燥法制备染色体,即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠,不

骨髓细胞染色体标本的制备

一、原理骨髓染色体标本制备通常用于白血病患者,特别是慢性或急性粒细胞性白血病,因为骨髓反映粒系统细胞增生情况,这些病人不宜用外周血。即使是淋巴细胞性白血病,也不主张用外周血,因为加PHA刺激外周血培养,只能获得正常淋巴细胞分裂相,并不能反映那些病理淋巴细胞的染色体改变。骨髓细胞属不断增殖的细胞,培养

羊水标本的制备、培养和分析实验

实验材料羊水试剂、试剂盒乙醇chang 培养基秋水仙胺低渗液甲醛 冰乙酸固定剂Permount 封固剂仪器、耗材用于细胞培养的20ml 注射器或试管15ml 离心管离心机盖玻片巴氏吸管倒置显微镜精细镊蓝垫或纸巾玻片加热器实验步骤展

制备细菌染色标本时,应该注意哪些环节

1,接种环需以无菌操作,载玻片要洁净无油迹,滴生理盐水和取菌不宜过多,涂片要涂抹均匀,不宜过厚;2,干燥是室温干燥;3,热固定温度不宜过高,以玻片背面不烫手为宜,否则会改变甚至破坏细胞形态;4,染色时滴加染液覆盖上菌体薄膜即可;5,染色过程中,不可使染液干涸。

用于-PCR-的模板-DNA-制备实验——含血标本

实验步骤1. 3 ml 外周血或 1 ml 骨髓液放入含 50 μl 0.5mol/L EDTA 的无菌离心管(15 ml 管)中。2. 2000 r/min 离心 10 min。吸去血浆,用指弹匀剩余的有核细胞和红细胞,加入红细胞溶解液 10 ml 并混匀,常温下放置 30 min。红细胞溶解液配