小量细菌克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 主琼脂板上和覆盖于另一块琼脂板表面的硝酸纤维滤膜或尼龙膜上的细菌克隆可以被定位， 经过一段时间，已经在滤膜上生长的克隆可以被原位裂解以备杂交之用。同时，主琼脂板可置于 4℃ 保存，直到筛选的结果出来为止。 实验材料 E.coli 试剂、试剂盒 LB 或 SOB 琼脂板 仪器、耗材 硝酸纤维素膜 注射器 针头 防水黑色墨汁 木制牙签或接种环 ......阅读全文
细菌接合与基因定位———中断杂交
实验方法原理 在大肠杆菌细胞内,F因子与染色体DNA之间的交换可使F因子插入到宿主细胞的染色体DNA中。带有一个整合F因子的细胞称为高频重组(Hfr)细胞。不同的Hfr菌株中F因子的整合的位置不尽相同。在Hfr细菌和F-接合中,Hfr细胞染色体可以进入F-细胞,发生重组。Hfr细菌中染色体的转移从F
流式荧光杂交法和PCR反向点杂交法优劣对比
流式是检测相对荧光强度的，最后的信号高低取决于检测时机器PMT上所施加的电压。而PCR是核酸体外扩增的一种手段。所以两者是不同的哟。。
杂交瘤细胞系的产生与筛选
脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT培养基中培养（内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。细胞融合物中包含：脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途 径利用叶酸还原酶合成嘌呤。氨基蝶呤对叶
杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发
Part 1前言ELISA方法用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是为广泛的高通量的抗体发现的筛选方法，其实质是亲和力测定方法的一种变种，其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法，用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点，1.待测
分子杂交的分类
分子杂交基因探针根据标记方法不同可粗分为放射性探针和非放射性探针两大类，根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探针，RNA探针，cDNA探针，cRNA探针及寡核苷酸探针等几类，DNA探针还有单链和双链之分。下面分别介绍这几种探针。DNA探针DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DN
核酸分子杂交法介绍
这是最早用于性病诊断的重组DNA技术。基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记，以利于杂交信号的检测。 所谓
PCR扩增产物的克隆——TA克隆法
实验方法原理TA克隆 系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3'末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3'T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位
常用的分子生物学基本技术1
DNA重组技术（或基因工程）是20世纪生物学的伟大成就，并已渗透到生命科学包括医学 各个领域，为肿瘤的实验研究和临床诊断及治疗提供了崭新的技术和有用的工具。本附录扼要介绍在分子肿瘤学领域中常用的分子生物学基本技术及其在肿瘤研究中的应用，着重介绍它们的原理和应用。至于具体的技术方法和操作步骤可参阅《分
血清学筛选克隆新抗原/新基因（一）
一、E.coli/phage 裂解液预吸附血清 1. 将E.coli /phage lysate 以1:10-20 稀释在TBST 溶液中。 2. 将4 张82mm 的nitrocellulose membranes（NC）浸入稀释后的E.coli/ phagelysate 中，室温下水平摇动30
转化克隆的筛选和鉴定——酶切鉴定法
利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片断的克隆菌落。实验材料重组大肠杆菌试剂、试剂盒LB培养基氨苄青霉素乙醇质粒提取试剂盒限制性内切酶缓冲液甘油硫酸镁Tris盐酸琼脂糖仪器、耗材试管记号笔酒精灯冰箱牙签旋涡混合器镊子微量移液取样器
血清学筛选克隆新抗原/新基因（二）
19. 第一轮筛选得到阳性克隆需要进行第二轮筛选以去除假阳性并获得阳性单克隆噬菌体。过程如第一轮筛选，只不过用直径90mm 平板；具体过程见步骤4，这时所加入的噬菌体溶液是第一轮筛选得到的噬菌体上清（见步骤18），在用前要滴定好噬菌体的滴度，噬菌斑的数量以可区分出单个克隆，同时密度不能太稀为
细胞杂交与选择培养
（1）融合：细胞杂交之前，要分别准备好脾脏的B细胞悬液和小鼠骨髓瘤细胞（如SP2/0—Agl4细胞株）。免疫后的小鼠脾脏在无菌条件下破碎，将B细胞悬浮在没有血清的培养液中（通常使用RPMIl640商品配制），并洗涤3次去掉小鼠的血清。SP2/0细胞是用加有10%胎牛或小牛血清培养的，每天更换新鲜
细胞杂交和选择培养
融合：细胞杂交之前，要分别准备好脾脏的B细胞悬液和小鼠骨髓瘤细胞（如SP2/0—Agl4细胞株）。免疫后的小鼠脾脏在无菌条件下破碎，将B细胞悬浮在没有血清的培养液中（通常使用RPMIl640商品配制），并洗涤3次去掉小鼠的血清。SP2/0细胞是用加有10%胎牛或小牛血清培养的，每天更换新鲜
细胞杂交与选择培养的介绍
（1）融合：细胞杂交之前，要分别准备好脾脏的B细胞悬液和小鼠骨髓瘤细胞（如SP2/0—Agl4细胞株）。免疫后的小鼠脾脏在无菌条件下破碎，将B细胞悬浮在没有血清的培养液中（通常使用RPMIl640商品配制），并洗涤3次去掉小鼠的血清。SP2/0细胞是用加有10%胎牛或小牛血清培养的，每天更换新鲜
分子杂交
一、杂交通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的
分子杂交技术（一）
一、概述 前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交
分子杂交技术（一）
一、概述 前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交
单克隆抗体制备过程与原理
单克隆抗体(MAb)是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年，由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。单克隆抗体制备过程有以下几个步骤，下面讲简要介绍。1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠
鸟枪克隆法的定义
中文名称鸟枪克隆法英文名称shotgun cloning method定 义用限制性酶或超声波将基因组DNA切成随机性片段，克隆入DNA载体，转化宿主细胞，构建基因组文库，再从基因组文库中筛选得所需要的序列或基因克隆。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
首个突破－我国克隆玉米单向杂交不亲和基因
记者从中国科学院遗传与发育生物学研究所获悉，该所陈化榜研究组与周奕华研究组及薛勇彪研究组合作，在玉米单向杂交不和基因研究领域取得突破，首次克隆了控制玉米单向杂交不亲和现象的基因ZmGa1P，并对其不亲和机理进行了探究。该成果于2018年9月10日在Nature Communications杂志
单克隆抗体的制备步骤
1、免疫动物的选择：免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。2、细胞融合：采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同
用杂交的方法筛选大片段插入的文库实验
实验步骤由于原代的转化子只能产生数目有限的滤膜，因而随机铺板不适合滤膜的制备以及 YAC、BAC 和 PAC 文库的保存，而且由于克隆增殖率存在差别，因而无论是哪一种扩增形式都会将偏差带人文库中去。因此，原代的转化子应加入微孔板中，放置于-8℃ 保存。这使得制造分配用的文库拷贝变得简单易行，而且使组
用杂交的方法筛选大片段插入的文库实验
由于原代的转化子只能产生数目有限的滤膜，因而随机铺板不适合滤膜的制备以及 YAC、BAC 和 PAC 文库的保存，而且由于克隆增殖率存在差别，因而无论是哪一种扩增形式都会将偏差带人文库中去。因此，原代的转化子应加入微孔板中，放置于-8℃ 保存。这使得制造分配用的文库拷贝变得简单易行，而且使组
通过杂交筛选未扩增的黏粒文库（滤膜影印）
实验方法原理 经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选，该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选（Hanahan and Meselon 1980)。 实验步骤
通过杂交筛选未扩增的黏粒文库（滤膜影印）
实验方法原理 经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选，该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选（Hanahan and Meselon 1980)。实验步骤 一、材料1. 培养基含 25 μg/ml 卡那霉素的 TB 琼脂平板（150 mm )TB 培养基2. 专用设备厚玻璃板皮下注射针头（17号）
通过杂交筛选未扩增的黏粒文库（滤膜影印）
经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选，该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选（Hanahan and Meselon 1980)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选，该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选（Hanahan and
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
粒子筛选实验室法和在线法
1、实验室法粒子色选实验室法有人工挑选法和粒子扫描设备法，以少量粒子试样的实验室分析数据预估实际生产情况。1.1、人工挑选法试验方法：取少量粒子试样，人工肉眼识别挑出带缺陷粒子。但是，人眼观察必然存在误差。人眼误判可能性高，不同人之间误差大，重复性差，人眼不能看到50微米以下的杂质，人眼几乎不能解决