小量细菌克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 主琼脂板上和覆盖于另一块琼脂板表面的硝酸纤维滤膜或尼龙膜上的细菌克隆可以被定位， 经过一段时间，已经在滤膜上生长的克隆可以被原位裂解以备杂交之用。同时，主琼脂板可置于 4℃ 保存，直到筛选的结果出来为止。 实验材料 E.coli 试剂、试剂盒 LB 或 SOB 琼脂板 仪器、耗材 硝酸纤维素膜 注射器 针头 防水黑色墨汁 木制牙签或接种环 ......阅读全文
杂交瘤细胞的克隆化
融合后的细胞在孔里生长时，一般并不是一个单纯的克隆（一般是两个或者多个克隆，就算肉眼看到的是形成一个完整的克隆，但事实上可能是由两个或者多个原始的杂交瘤形成的），如果直接将其扩大培养将会产生两个问题：一是如果有两个或两个以上的克隆或一个克隆实际上是由两个克隆长在一起形成的，并且都分泌抗体，那么就有可
单克隆抗体的杂交细胞
克隆化的细胞可以在体外进行大量培养，收集上清液而获得大量的单一的克隆化抗体。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细胞浓度，且每天要换培养液。而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小
细菌克隆的溶解实验
细菌克隆的溶解实验可以用于：（1）从表达特定融合蛋白质的重组噬菌体构建噬菌体溶源菌；（2）从该溶源菌诱导合成并纯化出融合的目的蛋白质。实验方法原理具有原噬菌体的细菌称为溶原性细菌。噬菌体分为烈性噬菌体和溶原性噬菌体，在感染于寄主细菌细胞时，前者往往在菌体内增殖并将菌体裂解。实验材料大肠杆菌噬菌体试剂
细菌克隆的溶解实验
试剂、试剂盒 IPTG溶源菌抽提缓冲液氯化钠溶菌酶LB 琼脂平板仪器、耗材 气体恒溫箱液氮Millipore 滤纸水浴摇床牙签或接种环噬菌体λgt11λgt18-23λZAP 和λZipLox 重组子大肠杆菌 Y1090 hsdR 菌株及 Y1089 菌株实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试
细菌克隆的溶解实验
细菌克隆的溶解实验 实验方法原理 具有原噬菌体的细菌称为溶原性细菌。噬菌体分为烈性噬菌体和溶原性噬菌体，在感染于寄主细菌细胞时，前者往往在菌体内增殖并将菌体裂
杂交瘤细胞怎么筛选分离方法
第一次用加入氨基蝶呤的选择培养基选择出融合正确的杂交瘤细胞第二次用抗原抗体反应选择出可以产生抗体的杂交瘤细胞。
靶向克隆法
靶向克隆法是一种新的基因克隆方法，该克隆方法的特点是：在基因克隆过程中不使用已有的DNA Ligase，而是使用新开发的靶向克隆酶。靶向克隆酶能够使末端序列相同的双链DNA(14bp-18bp)同源重组，从而达到克隆基因的目的。LP Recco酶，中文名：靶向克隆酶，无需传统基因克隆所需要的限制性内
细菌的转化与平板筛选
[实验原理]感受态是指细菌处于容易吸收外源DNA的状态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导人细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。将细
细菌的转化与平板筛选
实验概要本实验介绍了细菌的转化与平板筛选的原理及操作步骤。实验原理 感受态是指细菌处于容易吸收外源DNA的状态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导人细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面
重组片段的转化及克隆和筛选
一、目的与原理转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。二、材料和方法1.材料：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜
单克隆酶免疫色度分析筛选方法
单克隆酶免疫色度分析筛选方法 AOAC 方法：986.35，987.11，993.0均为单克隆酶免疫色度分析筛选方法。现以 AOAC 公定方法 AOAC993.08《SalmonelIa-Tek）》为例做一介绍。 该方法阳性的检测结果应是客观的，必须用配有450nm 滤光片的光度计来
实验九－转化克隆的筛选和鉴定
1．目的学会用酶切法或PCR法筛选重组质粒转化成功的克隆菌。2．原理利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片段的克隆菌落。3．器材旋涡混合器，小镊子，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴
单克隆酶免疫色度分析筛选方法
（1）原理 沙门氏菌抗原的检测是基于用特异性单克隆抗体进行的酶免疫分析（EIA）用抗沙门氏菌抗原的单克隆抗体包被于聚苯乙烯微量小孔的内表面，将样品和对照加入中。样品中如有沙门氏菌抗原存在，则将被吸附在孔上的特异性抗体吸收。冲洗小孔后，加入接合剂与被抗体吸收的沙门氏菌抗原结合。再冲洗小孔，
DNA探针的功能特性
DNA探针是以病原微生物DNA或RNA的特异性片段为模板,人工合成的带有放射性或生物素标记的单链DNA片段,可用来快速检测病原体。DNA探针将一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或荧光染料等标记后制成的探针。可与固定在硝酸纤维素膜的DNA或RNA进行互补结合,经放射自显影或其他检测手段就可以
关于DNA探针的基本内容介绍
DNA探针是以病原微生物DNA或RNA的特异性片段为模板，人工合成的带有放射性或生物素标记的单链DNA片段，可用来快速检测病原体。DNA探针将一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或荧光染料等标记后制成的探针。可与固定在硝酸纤维素膜的DNA或RNA进行互补结合，经放射自显影或其他检测手段就可以
分子杂交基因所用DNA探针应用介绍
DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多，有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针。这类探针多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的，如细菌的毒力因子基因探针和人类Alu探针。这些DNA探针
关于DNA探的技术发展介绍
DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多，有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针。这类探针多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的，如细菌的毒力因子基因探针和人类Alu探针。这些DNA
关于单克隆抗体有限稀释法克隆法介绍
1．材料 （1）微量培养盘，盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞（即饲养细胞）每孔2万～4万。 （2）HT培养基 2．操作方法 （1）取出抗体阳性孔细胞，用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色，计数。 （2）用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和
脱氧核糖核酸的DNA探针
DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多，有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针。这类探针多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的，如细菌的毒力因子基因探针和人类Alu探针。这些DNA
用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验
实验方法原理 试剂、试剂盒 甲酸铵 寡核苷酸杂交溶液 寡核苷酸预杂交液 TE 噬菌体T4多核
用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验
实验方法原理 试剂、试剂盒 甲酸铵寡核苷酸杂交溶液寡核苷酸预杂交液TE噬菌体T4多核苷酸激酶限制性内切核酸酶琼脂糖凝胶诱变寡核苷酸[γ-32P]ATP2XYT 顶层琼脂和 2xYT 琼脂平皿仪器、耗材 钝端镊子皮下注射用针头（18 号）和印度墨水孵箱硝酸纤维素膜或尼龙膜真空烤箱68°C 水浴What
用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验
本方案主要描述了筛选噬菌体 M13 重组克隆，而一种选择方案是筛选含噬菌粒的细菌克隆。最后也介绍了用 PCR 检测突变体的方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验方法原理试剂、试剂盒甲酸铵寡核苷酸杂交溶液寡核苷酸预杂交液TE噬菌体T4多核
稀释法克隆培养
实验方法原理 低密度接种细胞，培养至集落形成，细胞染色（用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。 实验材料 CHO细胞
稀释法克隆培养
实验方法原理低密度接种细胞，培养至集落形成，细胞染色（用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。实验材料CHO细胞 胰蛋白酶
稀释法克隆培养
实验方法原理低密度接种细胞，培养至集落形成，细胞染色（用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。实验材料CHO细胞胰蛋白酶仪器、耗材培养基吸管培养皿血细胞计数器实验步骤1. 细胞用胰蛋白酶（胰蛋白酶，0.25 %，1 : 250或相当活性）消化制备单细胞悬液。消化不充分会
基因工程操作技术及原理之基因克隆
1．克隆已知序列的基因根据已知基因的序列设计引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同种属之间，基因编码区序列的同源性高于非编码区的序列。在某种植物的同源基因被克隆的条件下，可先构建eDNA文库或基因组文库，然后以该基因(或部分序列)为探针来筛选目的基因的克隆。2．功能克隆根据基因的产物
基因工程操作技术及原理之基因克隆
1．克隆已知序列的基因 根据已知基因的序列设计引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同种属之间，基因编码区序列的同源性高于非编码区的序列。在某种植物的同源基因被克隆的条件下，可先构建eDNA文库或基因组文库，然后以该基因(或部分序列)为探针来筛选目的基因的克隆。 2．功能克隆 根据基
我国克隆首个玉米单向杂交不亲和基因
记者从中国科学院遗传与发育生物学研究所获悉，该所陈化榜研究组与周奕华研究组及薛勇彪研究组合作，在玉米单向杂交不和基因研究领域取得突破，首次克隆了控制玉米单向杂交不亲和现象的基因ZmGa1P，并对其不亲和机理进行了探究。该成果于2018年9月10日在Nature Communications杂志上
单抗到底是怎么⽣产的？
单抗到底是怎么生产的？ 单克隆抗体(MAb)是针对专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术⼜名杂交瘤技术起源于1975年，由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。 杂交瘤技术制备单克隆抗是针对体的主要步骤包括： (1)
细菌接合与基因定位———中断杂交
实验方法原理在大肠杆菌细胞内,F因子与染色体DNA之间的交换可使F因子插入到宿主细胞的染色体DNA中。带有一个整合F因子的细胞称为高频重组(Hfr)细胞。不同的Hfr菌株中F因子的整合的位置不尽相同。在Hfr细菌和F-接合中,Hfr细胞染色体可以进入F-细胞,发生重组。Hfr细菌中染色体的转移从F因