噬菌体DNA在滤膜上的杂交实验
实验方法原理 通过用 32P 标记探针的原位杂交，可筛选携带有固定化 DNA 的滤膜，这些 DNA 来源于噬菌斑。该技术是强有力的、高度特异的和很灵敏的，能从数千个噬菌斑中鉴别出单一的重组子。 实验材料 噬菌体 DNA 放射性标记探针 试剂、试剂盒 氯仿 预杂交液 SM SSPE 仪器、耗材 煮沸的水浴 玻璃（Pyrex ) 烘烤平皿或其他杂交器......阅读全文
用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3端
实验材料 限制性内切核酸酶T4 噬菌体 DNA 聚合酶模板 DNA试剂、试剂盒 醋酸氨乙醇酚氯仿T4 噬菌体 DNA 聚合酶缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材 Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液醋酸氨（10 mol/L)乙醇酚：氯仿（1:1，V/V)2. 酶和缓冲
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11 和 λORF8）或使用虽含多克隆位点但用单一酶切割的插入型载体（如 λgt18-23 和 λZAP) 时，本方法可被用于抑制非重组子背景。本实验
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
实验方法原理 λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11 和 λORF8）或使用虽含多克隆位点但用单一酶切割的插入型载体（如
M13噬菌体双链（复制型）DNA的制备
实验方法原理 感染 M13 噬菌体的细菌含病毒双链 RF DNA，培养基中粗提病毒颗粒中含单链子代 DNA，双链 RF DNA 可以采用类似于质粒纯化的方法从感染细胞的小量培养物中分离。从 1~2 ml 的感染细胞培养物中可以分离几微克的 RF DNA，这个量足以进行亚克隆和作限制酶酶切
碘化物缓冲液提取噬菌体单链DNA
碘化物缓冲液： 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA, 4 M NaCl。室温避光贮存。不知道这里面哪个是需要避光的？我怎么没有提出DNA来，不知道是为什么？用的是NEB手册上写的方法。1. 按上述方法进行噬菌斑扩增，在第一步离心后，将500 µl含噬菌体上清转入一新
M13噬菌体双链（复制型）DNA的制备
感染 M13 噬菌体的细菌含病毒双链 RF DNA，培养基中粗提病毒颗粒中含单链子代 DNA，双链 RF DNA 可以采用类似于质粒纯化的方法从感染细胞的小量培养物中分离。从 1~2 ml 的感染细胞培养物中可以分离几微克的 RF DNA，这个量足以进行亚克隆和作限制酶酶切图谱。本实验来源「分子克隆
M13噬菌体双链（复制型）DNA的制备
实验方法原理 感染 M13 噬菌体的细菌含病毒双链 RF DNA，培养基中粗提病毒颗粒中含单链子代 DNA，双链 RF DNA 可以采用类似于质粒纯化的方法从感染细胞的小量培养物中分离。从 1~2 ml 的感染细胞培养物中可以分离几微克的
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
实验方法原理 λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11 和 λORF8）或使用虽含多克隆位点但用单一酶切割的插入型载体（如 λgt18-23 和 λZAP) 时，本方法可被用于抑
M13噬菌体双链（复制型）DNA的制备
感染 M13 噬菌体的细菌含病毒双链 RF DNA，培养基中粗提病毒颗粒中含单链子代 DNA，双链 RF DNA 可以采用类似于质粒纯化的方法从感染细胞的小量培养物中分离。从 1~2 ml 的感染细胞培养物中可以分离几微克的 RF DNA，这个量足以进行亚克隆和作限制酶酶切图谱。本实验来源「分子克隆
λ噬菌体DNA提取试剂制备、操作步骤和注意事项
λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径：其一是裂解生长，环状DNA 分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；其二是溶源性生长，即感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体D
cDNA的筛选3
免疫学染色1.为了洗去顶层琼脂上的残余物和细胞碎片，将硝酸纤维素滤膜一次最多5张转移放在摇床上的盘子（10×10cm）内，用25ml TBS室温洗涤10 min 2次。2.然后滤膜用25ml封闭缓冲液（每张90mm直径的滤膜至少15ml）于室温温育 30min，以封闭滤膜上的非特异性结合位点。不断晃
λ噬菌体DNA限制性内切酶图谱分析
实验方法原理λDNA是线状双链DNA,EcoRⅠ在其上有5个切点,产生6个片段,通过琼脂糖凝胶电泳可将这几条片段分离开。如何重建这6个片段呢?可用两种限制性内切酶同时或先后作用于λDNA。例如λDNA经EcoRⅠ切割后在凝胶上分离开来的6条带可洗脱出来,然后分别将这6条片段用HindⅢ切割。结果表明
λ噬菌体DNA限制性内切酶图谱分析
实验方法原理 λDNA是线状双链DNA,EcoRⅠ在其上有5个切点,产生6个片段,通过琼脂糖凝胶电泳可将这几条片段分离开。如何重建这6个片段呢?可用两种限制性内切酶同时或先后作用于λDNA。例如λDNA经EcoRⅠ切割后在凝胶上分离开来的6条带可洗脱出来,然后分别将这6条片段用HindⅢ切割。结果表
有机过滤膜和水系过滤膜的区别
材料，原理。1、有机膜是由高分子材料加工而成。水系,不耐有机溶剂。2、有机的是通过化学反应进行过滤。水系是物理反应进行。3、过滤膜全称微孔过滤膜，应用于原料药.药用溶剂。
细胞系的多位点DNA指纹检测——经标记的－M13－噬菌体－DNA制备
实验方法原理用随机引物延伸法标记 M13mp9 DNA [ Finberg and Voglstein，1983 ]，并用葡聚糖柱（Sephadex） 纯化。实验材料模板HEPESDTM试剂氧核苷酸牛血清蛋白P-dGTPKlenow 酶试剂、试剂盒DTM试剂OL试剂标记缓冲液洗柱缓冲液仪器、耗材Se
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验1
一个DNA位点识别探针被用来从表达文库中检测合适的重组克隆，并对 之进行纯化，证明其中编码了具有一定序列特异性的DNA结合域。这种策略排除了为 分离其基因而对序列特异性DNA结合蛋白进行纯化的过程；只需要一个合适的构建于 λgtll载体中的cDNA文库和一个DNA识别位点的探针。用位点识别DNA筛选
菌落的裂解及DNA结合于硝酸纤维素滤膜的介绍
（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。 （2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤（1）。 （3） 吸干
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
用位点识别DNA筛选λgtll表达文库 用盐酸胍进行干燥膜的变性/复性循环 从重组溶源菌中制备粗提物鉴定DNA结合蛋白的活性 实验方法原理
CDNA文库筛选
CDNA文库筛选（一）λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1．用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基（Y1088用于噬菌斑杂交，Y1090用于免疫筛选），于37℃振荡培养过夜。2．将过夜培养物以3000×g离心5min。3．分别用2ml λ-dil（10 mmol/L
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
实验方法原理 实验材料 含有多个串联拷贝识别位点的、缺乏识别位点的（或含识别位点突变的）pUC重组质粒DNA试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶EcoRI及HhdIII1 mol L Tris • Cl pH 7. 55 mmol L dCTPdGTPdTTPdATP5000 Ci mmol [α32P]
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
实验方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效，但在某种意义上它比以前的操作方法更快。实验材料 限制性内切核酸酶λ 噬菌体颗粒试剂、试剂盒 EDTA乙醇甲酰胺NaClTETris-Cl仪器、耗材 琼脂糖凝胶硼硅酸盐巴斯德吸管实验步骤 一、材料1.
λ噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接实验
实验方法原理 当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔比，以及在反应混合物中各类 DNA 的浓度。实验材料 噬菌体 T4 DNA 连接酶基因组 DNAλ 噬菌体包装混合物λ 噬菌体臂 DNA试剂、试剂盒 ATPSM 和 SM+ 明胶仪器、耗材
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA
实验方法原理 本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要，其次可用于检测纯化过程，以找到出问题步骤。
λ噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接实验
当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔比，以及在反应混合物中各类 DNA 的浓度。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔
借助于噬菌体ELISA的DNA/RNA结合活性的分析方法
实验概要本实验从含有源自文库筛选的噬菌体克隆制备了噬菌体上清液，通过噬菌体ELISA，评估筛选出DNA/RNA结合区域的特异性序列的结合活性。实验步骤1. 噬菌体的制备 1) 挑取含有源自文库筛选的噬菌体克隆的单菌落。用灭菌牙签挑取单菌落接种于灭菌圆底培养板的微孔内，其中加有150ul含15
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
实验方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效，但在某种意义上它比以前的操作方法更快。 实验材料 限
含尿嘧啶的单链噬菌体－M13－DNA－制备实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 乙醇 氯化钠 苯酚 醋酸钠 TE 琼脂糖凝胶 原始的重组 M13 噬菌体
含尿嘧啶的单链噬菌体－M13－DNA－制备实验
经典的 Kunfcel 寡核苷酸指导的诱变方法利用大肠杆菌中的尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (glycosylase) 特异地筛除去含尿嘧啶碱基的 DNA 的选择性作用（请参考寡核苷酸诱变信息栏）。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒缓
含尿嘧啶的单链噬菌体－M13－DNA－制备实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液乙醇氯化钠苯酚醋酸钠TE琼脂糖凝胶原始的重组 M13 噬菌体单链 DNAYT 培养基仪器、耗材 Corex 离心机管巴斯德滴管柱层析树脂大肠杆菌菌株 CJ236大肠杆菌菌株 TG1JM109 或相当的菌株实验步骤 材料缓冲液和溶液各种贮存液，缓冲液和试剂成分请参阅附录 1。
借助于噬菌体ELISA的DNA/RNA结合活性的分析方法
A.噬菌体的制备 1．挑取含有源自文库筛选的噬菌体克隆的单菌落。用灭菌牙签挑取单菌落接种于灭菌圆底培养板的微孔内，其中加有150ul含15ug/ml的四环素的2×TY培养基。用一个微孔培养展示野生型DNA/RNA结合区域的噬菌体，作为阳性对照。以250r/min的速度小心振荡微孔板，30℃