基于脾坏死病毒的载体
实验步骤 基 于 S N V 载体体系的反转录病毒的生成以及它们在各种细胞类型转导中的应用 材料 试剂 氯 化 钙（CaCl2) (2mol/L) 溶 解 14. 7 g CaCl2 于 IOOml H2O 中。过滤除菌或高压灭菌。 转染的细胞系： 293T 和 D17 (ATCC) 甘 油（1 0 % 〜2 0 % ) (合适的） H ank 平衡盐溶液（HBSS) 2 X H E P E 缓 冲 液（HBS: 280m m ol/LN aCl、 1 0 m m o l/L K C l 、 1.5Imnol/LNa2 H P 0 4< ! > 、 12m m ol/L 葡萄糖、 50m m ol/LH EPES， pH 7.5) LacZ 染 色 试 剂（Chemicon) 培养基 完全培养基： D ......阅读全文
基于脾坏死病毒的载体
实验步骤 基 于 S N V 载体体系的反转录病毒的生成以及它们在各种细胞类型转导中的应用材料试剂氯 化 钙（CaCl2) (2mol/L)溶 解 14. 7 g CaCl2 于 IOOml H2O 中。过滤除菌或高压灭菌。转染的细胞系： 293T 和 D17 (ATCC)甘 油（1 0 % 〜2
基于脾坏死病毒的载体
这一章描述的实验方法是基于我们关于来自S N V 及其紧密相连的R E V -A 载体的实 验 （P a r v ee n e t a L 2000)。我们曾用这两种病毒载体对各种细胞进行基因转移，包括初期的造血细胞、人脑及有丝分裂后的神经元细胞（Parveen etal.2000)。与其他反转录病
基于脾坏死病毒的载体
实验步骤 基 于 S N V 载体体系的反转录病毒的生成以及它们在各种细胞类型转导中的应用 材料 试剂 氯 化 钙（CaCl2) (2mol/L) 溶 解 14. 7 g CaCl2 于 IOOml H2O 中。过滤除菌或高
基因转移的转移方法
基因转移是用物理的、化学的或生物学的方法将目的基因导入受体细胞并使之表达的一种技术。物理方法包括显微镜注射法、电脉冲介导法。显微注射法是应用特别的玻璃显微注射器在显微镜下把重组DNA导入靶细胞；电脉冲介导法又称电穿孔法，是指在高压电脉冲的作用下，使细胞膜上出现瞬间微小的孔洞，从而介导不同细胞之间的原
基因转移的转移方法
基因转移是用物理的、化学的或生物学的方法将目的基因导入受体细胞并使之表达的一种技术。物理方法包括显微镜注射法、电脉冲介导法。显微注射法是应用特别的玻璃显微注射器在显微镜下把重组DNA导入靶细胞；电脉冲介导法又称电穿孔法，是指在高压电脉冲的作用下，使细胞膜上出现瞬间微小的孔洞，从而介导不同细胞之间的原
在动物中发现介导水平基因转移的载体：病毒样转座子
几十年来，科学家们已经知道基因可以从一种物种转移到另一种物种，无论是动物还是植物。然而，这类看似不可能发生的事件是如何发生的，其机制仍然是未知的。如今，来自奥地利科学院分子生物技术研究所Alejandro Burga实验室的研究人员在线虫中发现了一种水平基因转移（horizontal gene
基因转移的转移步骤
（1）配制下列溶液①2×HEPES-缓冲盐溶液（HBS）②2mol/L CaCl2③0.1×TE(pH8.0)用0.22μm滤器过滤除菌，分装贮存于4℃。④DNA：将DNA（约20μg/106细胞）溶于0.1×TE（pH8.0），使用浓度为40μg/ml。为使转化效率达到最高，质粒DNA应用CsCl
基因转移的转移步骤
（1）配制下列溶液①2×HEPES-缓冲盐溶液（HBS）②2mol/L CaCl2③0.1×TE(pH8.0)用0.22μm滤器过滤除菌，分装贮存于4℃。④DNA：将DNA（约20μg/106细胞）溶于0.1×TE（pH8.0），使用浓度为40μg/ml。为使转化效率达到最高，质粒DNA应用CsCl
基因转移的转移步骤
（1）配制下列溶液①2×HEPES-缓冲盐溶液（HBS）②2mol/L CaCl2③0.1×TE(pH8.0)用0.22μm滤器过滤除菌，分装贮存于4℃。④DNA：将DNA（约20μg/106细胞）溶于0.1×TE（pH8.0），使用浓度为40μg/ml。为使转化效率达到最高，质粒DNA应用CsCl
基因转移方法
（1）特异正常基因的分离与克隆：应用重组DNA和分子克隆技术结合基因定位研究成果，已有不少基因并将会有更多人类基因被分离和克隆，这是基因治疗的前提，在当代分子生物技术条件下，一般来说，只要有基因探针和准确的基因定位，任何基因都可被克隆。除此，如今既可人工合成DNA探针，还可用DNA合成仪在体外人工合
基因转移技术
基因转移技术分为两类：第一类是将目的基因转导入体外培养的细胞或导入从体内取出的细胞，观察目的基因在细胞中的表达，这项技术称基因转染（gene transfection）技术。通常情况下，该技术转入的目的基因不与细胞染色体发生整合，而是在细胞质呈现暂时性表达，随时间推移而逐渐减弱或消失。第二类是将
如何阅读基因载体图谱？
基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。
基因克隆的载体类型
①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制，且对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。②有多个限制酶（Restriction enzymes）切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入。③含有复制起始位点，能够独立复制；通
如何阅读基因载体图谱
基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细
如何阅读基因载体图谱
基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目
基因载体的相关介绍
基因载体本身是DNA,除根据其来源分为质粒载体、噬菌体载体、病毒载体等外，还可以根据它们的主要用途分为克隆载体与表达载体。根据它们的性质分为温度敏感型载体(temperature sensitive vector)、融合型表达载体、非融合型表达载等。 基因载体(vector) 的作用是运载目的
基因转移的步骤
（1）配制下列溶液 ①2×HEPES-缓冲盐溶液（HBS） ②2mol/L CaCl2 ③0.1×TE(pH8.0)用0.22μm滤器过滤除菌，分装贮存于4℃。 ④DNA：将DNA（约20μg/106细胞）溶于0.1×TE（pH8.0），使用浓度为40μg/ml。为使转化效率达到最高，质
基因转移的简介
最常用的将克隆重组的DNA片段导入哺乳动物细胞的方法是用磷酸钙介导的转染。转染的DNA可能是通过吞饮作用进入细胞质，然后进入细胞核。
基因转移的方法
基因转移是用物理的、化学的或生物学的方法将目的基因导入受体细胞并使之表达的一种技术。 物理方法 包括显微镜注射法、电脉冲介导法。显微注射法是应用特别的玻璃显微注射器在显微镜下把重组DNA导入靶细胞；电脉冲介导法又称电穿孔法，是指在高压电脉冲的作用下，使细胞膜上出现瞬间微小的孔洞，从而介导不同
基因转移的定义
基因转移指应用物理、 化学或生物学方法将目的基因转移入受体细胞内的过程。基因转移技术在基因工程、生物医学研究、基因治疗、植物农作物品种改 造等领域被广泛应用。通过基因转移将遗传信息从一个基因组向另一个基因组转移，使 转移的遗传信息在受者生物表达。
基因转移的简介
最常用的将克隆重组的DNA片段导入哺乳动物细胞的方法是用磷酸钙介导的转染。转染的DNA可能是通过吞饮作用进入细胞质，然后进入细胞核。
基因转移方法介绍
（1）特异正常基因的分离与克隆：应用重组DNA和分子克隆技术结合基因定位研究成果，已有不少基因并将会有更多人类基因被分离和克隆，这是基因治疗的前提，在当代分子生物技术条件下，一般来说，只要有基因探针和准确的基因定位，任何基因都可被克隆。除此，如今既可人工合成DNA探针，还可用DNA合成仪在体外人工合
病毒介导基因转移
病毒介导基因转移：前述的化学和物理方法都是通过传染方式基因转移。病毒介导基因转移（viral mediatedgene transfer）是通过转换方式完成基因转移，即以病毒为载体（vector），将外源目的基因通过基因重组技术，将其组装于病毒上，让这种重组病毒去感染受体宿主细胞，这种病毒称为病毒运
关于基因转移的化学转移方法介绍
有DNA-阳离子-二甲基亚砜法。基因转移的生物学方法包括细胞融合法、脂质体介导法、原生质体融合法等。除以上三种方法外，又出现了颗粒轰击技术，就是将外源DNA包被在金属上，在电场中包被DNA的金属颗粒获得能量并以高速度运动，穿入靶细胞组织或器官内，由于这种金属颗粒可以涂成薄膜状，所以可实现较多细胞
基因转移的物理方法转移法介绍
包括显微镜注射法、电脉冲介导法。显微注射法是应用特别的玻璃显微注射器在显微镜下把重组DNA导入靶细胞；电脉冲介导法又称电穿孔法，是指在高压电脉冲的作用下，使细胞膜上出现瞬间微小的孔洞，从而介导不同细胞之间的原生质膜发生融合，使外源DNA通过细膜上出现的瞬间小孔而进入细胞。
基因工程的载体2
2、pUC质粒载体 1987年，J.Messing和J.Vieria采用MCS技术在pBR322基础上构建的。 结构： （1）来自于pBR322的Ori （2）氨苄青霉素的抗性基因(ampr)。 但核苷酸序列发生
如何阅读基因载体图谱？（二）
二、选择和准备载体选择载体主要依据构建的目的，同时还要考虑载体中应有合适的限制酶切位点等。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。选用哪种载体，还是要结合目的基因及载体特点以实验目的为准绳。 载体选择主要考虑下述3点： 1、构建DNA重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的
如何阅读基因载体图谱？（三）
三、改造载体 1、改造启动子：一般在过表达载体中CMV属于广谱型的强启动子，具体可根据实验需求，选用不同启动子，尤其是对于AAV载体构建时选用组织特异性启动子。 启动子名称启动子大小组织特异性ALB2.4kb肝脏特异性CAG944bp广泛表达的强启动子CamKIIa1.2kb大脑皮层和海马神经元特异
如何阅读基因载体图谱？（一）
基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件载体分类1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。可发生于完整活体或
目的基因片段与载体连接
1．目的学会DNA片段的体外连接技术。2．原理在Mg2+和ATP存在下，T4 DNA连接酶能催化载体分子的粘性末端与外源DNA的相同粘性末端联接成重组DNA分子。3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式离心机，干式恒温气浴。易生物仪器库：http