分子标记—AFLP原理和操作步骤

实验方法原理 AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后PCR反应的引物结合位点。实验中,根据需要通过选择在末端上分别填加了1~3个选择性核苷的不同引物,可以达到选择性扩增的目的。这些选择性核苷酸使得引物能选择性地识别具有特异配对顺序的内切酶片段,进行结合,导致特异性扩增。 实验材料 DNA样品 试剂、试剂盒 Taq酶 EcoRI......阅读全文

分子标记

内容:一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来,植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的,当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时,表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状,如产量等;或多基因控制的质量性状,如抗性等

PCR扩增标记法探针标记

PCR扩增标记法探针标记     PCR扩增标记法的原理与普通的核酸PCR相同。即Taq DNA多聚酶以DNA为模板,在特异引物引导下,在PCR仪中合成cDNA探针。由于在反应体系中加入一定量的标记dNTP,因此扩增的同时又是一个标记过程。cDNA探针PCR扩增法标记原理

分子标记的概念

  分子标记(Molecular Markers),是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是DNA水平遗传多态性的直接的反映。与其他几种遗传标记——形态学标记、生物化学标记、细胞学标记相比,DNA分子标记具有的优越性有:大多数分子标记为共显性,对隐性的性状的选择十分便利;基因组变异极其

分子标记的简介

  分子标记(Molecular Genetic Markers)是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是 DNA 水平遗传多态性的直接的反映。与其他几种遗传标记——形态标记、同工酶标记、细胞标记相比,DNA 分子标记具有的优越性有:大多数分子标记为共显性,对隐性的农艺性状的选择十分便

分子标记的概述

  分子标记的概念有广义和狭义之分。广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异的特异性DNA片段。  分子标记(Molecular Markers),是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是DNA水平遗传多态性的直接的

AFLP分子标记实验

其基本原理是:以PCR(聚合酶链式反应)为基础,结合了RFLP、RAPD的分子标记技术。把DNA进行限制性内切酶酶切,然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”,用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增,只有那些与3-端严格配对的片

常用的几种分子标记

RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段,一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段,利用凝胶电泳分开扩增的片段,从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术,并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术,因此简便易行。 SSR 真核生物

分子标记的技术展望

  分子标记技术已飞速发展,并被广泛应用于动植物的遗传研究中。分子标记中的已在玉米、大豆、鸡、猪等动植物育种和生产中有许多应用研究,主要集中在基因定位、辅助育种、疾病治疗等方面的应用研究工作,取得了一些应用成果。分子标记技术的开发是分子生物学领域研究的热点。随着分子生物学理论与技术的迅猛发展,必将研

双标记签的PCR扩增

试剂、试剂盒溶液与缓冲液LoTEcDNA标签实验步骤实验方案 A 和 B一、连接混合物的 PCR 扩增1.加入 LoTE 使连接混合物的体积增至 20ul。2.按 1% 浓度稀释连接混合物。3.在 50ulPCR 反应中以 Iul 的 1% 稀释后的连接混合物作为模板:4.最后,在 PCR 的反应中

PCR扩增制备带标记探针

实验概要用标记脱氧单核苷酸部分代替PCR反应体系中的脱氧核苷酸(一般是带标记的dUTP代替dTTP),经PCR扩增后标记基团随机搀入扩增产物-DNA探针中。这样使探针浓度高,可检测标记基团量多,灵敏度高,与缺口平移法制备探针相比,具有方便简捷的特点,并且由于具高灵敏度因此在检测低丰度,低拷贝数的目的

双标记签的PCR扩增

试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTEcDNA标签实验步骤 实验方案 A 和 B一、连接混合物的 PCR 扩增1.加入 LoTE 使连接混合物的体积增至 20ul。2.按 1% 浓度稀释连接混合物。3.在 50ulPCR 反应中以 Iul 的 1% 稀释后的连接混合物作为模板:4.最后,在 PCR 的反

PCR-SSCP标记技术

实验概要日本Orita等研究发现,单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象,这种立体结构主要是由其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的,当有一个碱基发生改变时,会或多或少地影响其空间构象,使构象发生改变,空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰胺凝胶中受排阻大小不同.因此,通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(

双标记签的PCR扩增

            试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE cDNA标签 实验步骤 实验方案 A 和 B 一、连

分子生态学显性标记

中文名称:显性标记学       科:生物学解       释:分子标记中,显性和共显性,对等位基因而言,即指所扩增的PCR产物(DNA片段)。像RAPD、ISSR等显性标记,PCR产物无法确切确定,因而无法区分杂合体(heterozygosity),只能按有带无带进行分析,记录为0/1;而SSR等

分子标记基于图谱克隆基因

  图位克隆(Map—bascd cloning))是近几年随着分子标记遗传图谱的相继建立和基因分子定位而发展起来的一种新的基因克隆技术。利用分子标记辅助的图位克隆无需事先知道基因的序列,也不必了解基因的表达产物,就可以直接克隆基因。图位克隆是最为通用的基因识别途径,至少在理论上适用于一切基因。基因

Real-time-PCR-的标记方法介绍

 Real time PCR 的标记方法一般包括以下几类:荧光染料嵌合法(SYBR Green I)和荧光探针法(Taqman探针)和分子信标法。    SYBR Green I 法        Taqman探针法        分子信标法    

标记PCR和彩色PCR技术的定义及特点介绍

标记PCR(Labelled Primers,LP-PCR) 是利同位素或荧光素对PCR引物的5‘端进行标记,用来检测靶基因是否存在。彩色PCR(Color Complementation assay PCR,CCAPCR),是LP-PCR的一种,它用不同颜色的荧光染料;标记引物的5'端,因

分子间相互作用分析:荧光标记VS无标记

同无标记技术相比,利用荧光技术检测分子间相互作用的实验成本较低,例如荧光共振能量转移和凝胶迁移实验,无需昂贵的仪器便可完成结合分析。然而,基于荧光标记的检测技术也存在自己的局限性,像凝胶迁移实验就只能用来检测蛋白和核酸间的相互作用。那么在具体的实验中,研究人员该如何选择合适的检测技术呢?不要着急,下

分子标记—AFLP原理和操作步骤

            实验方法原理 AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后

分子标记—AFLP原理和操作步骤

AFLP可用于:(1)构建遗传连锁图谱;(2)利用AFLP快速鉴别与目的基因紧密连锁的分子标记;(3)AFLP辅助的轮回选择育种;(4)研究基因表达与调控;(5)分类和进化研究;(6)甲基化研究等。实验方法原理AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行

分子标记——AFLP原理和操作步骤

一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺

分子标记的概念和方法特点

分子标记(Molecular Genetic Markers)是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是 DNA 水平遗传多态性的直接的反映。与其他几种遗传标记——形态标记、同工酶标记、细胞标记相比,DNA 分子标记具有的优越性有:大多数分子标记为共显性,对隐性的农艺性状的选择十分便利;

分子生态学词汇标记基因

中文名称:标记基因外文名称:labelled gene专属名词:基因工程广泛应用:分子生物学、细胞生物学选择基因:选择标记基因定义:标记基因,原本是基因工程的专属名词,但是它已经成为一种基本的实验工具,广泛应用于分子生物学、细胞生物学、发育生物学等方面的研究。标记基因是一种已知功能或已知序列的基因,

分子生态学词汇标记基因

中文名称:标记基因外文名称:labelled gene专属名词:基因工程广泛应用:分子生物学、细胞生物学选择基因:选择标记基因定义:标记基因,原本是基因工程的专属名词,但是它已经成为一种基本的实验工具,广泛应用于分子生物学、细胞生物学、发育生物学等方面的研究。标记基因是一种已知功能或已知序列的基因,

分子遗传学词汇标记基因

中文名称:标记基因外文名称:labelled gene定义:标记基因,原本是基因工程的专属名词,但是它已经成为一种基本的实验工具,广泛应用于分子生物学、细胞生物学、发育生物学等方面的研究。标记基因是一种已知功能或已知序列的基因,能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说,它是重组DNA载体的重要

分子遗传学词汇标记获救

中文名称:标记获救英文名称:marker rescue定  义:带突变标记的噬菌体和正常噬菌体感染宿主细胞,裂解产生的子代噬菌体中大多数为正常噬菌体,少数噬菌体则由于突变基因掺入了正常噬菌体的基因组而使突变标记得到保留,称为标记获救。应用学科:遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

分子标记——AFLP原理和操作步骤

一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺

微卫星DNA分子标记及其应用

  微卫星(Microsatellite,MS)又称短串联重复(Short Tandem Repeats,STR)或简单序列重复(Simple Sequnce Repeat,SSR),是指基因组中以少数几个核苷酸(多数为2-4个)为单位多次串联重复组成的长达几十个核苷酸的序列。其中最常见的是双核苷酸

理想的分子标记有哪些要求?

  理想的分子标记必须达以下几个要求:⑴ 具有高的多态性;⑵ 共显性遗传,即利用分子标记可鉴别二倍体中杂合和纯合基因型;⑶ 能明确辨别等位基因;⑷ 遍布整个基因组;⑸ 除特殊位点的标记外,要求分子标记均匀分布于整个基因组;⑹ 选择中性(即无基因多效性);⑺ 检测手段简单、快速(如实验程序易自动化);

特异引物的PCR标记的相关介绍

  特异引物的PCR标记所用引物是针对已知序列的 DNA 区段而设计的,具有特定核苷酸序列(通常为 18—24 bp),可在常规PCR复性温度下进行扩增,对基因组 DNA 的特定区域进行多态性分析。  ①序列标志位点  (Sequence Tagged Sites,STS)  STS是对以特定对引物