DNA酶I足迹分析实验
DNA 酶 I 足迹分析实验 试剂、试剂盒 32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针 酚 氯仿 乙醇 聚乙烯醇 竞争 DNA 缓冲液 Z'(或缓冲液 Ze) DNA 酶 I MgCl2(10 mmol L) CaCl2(5 mmol L) DNA 酶 I 终止液 蛋白酶 K 甲酰胺加样缓冲液 实验步骤 ......阅读全文
DNA-酶-I-足迹分析实验
DNA 酶 I 足迹分析实验 试剂、试剂盒 32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针 酚 氯仿
DNA-酶-I-足迹分析实验
试剂、试剂盒 32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针酚 氯仿乙醇聚乙烯醇竞争 DNA 缓冲液 Z'(或缓冲液 Ze)DNA 酶 IMgCl2(10 mmol L) CaCl2(5 mmol L)DNA 酶 I 终止液蛋白酶 K甲酰胺加样缓冲液实验步骤 材料32P-标记 DNA 酶 I 足迹探
DNA-酶-I-足迹分析实验
试剂、试剂盒32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针酚 氯仿乙醇聚乙烯醇竞争 DNA 缓冲液Z'(或缓冲液 Ze)DNA 酶 IMgCl2(10 mmol L) CaCl2(5 mmol L)DNA 酶 I 终止液蛋白酶 K甲酰胺加样缓冲液实验步骤材料32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针酚/
DNA酶I足迹分析法
实验方法原理 实验材料 含有DNA结合位点的质粒DNA试剂、试剂盒 适当的限制性内切核酸酶100%乙醇及冰冷的70%乙醇TE缓冲液[α-32P] dNTP (3000〜6000 Ci mmol)水溶液1O× Klenow片段缓冲液E. coli DNA聚合酶1的Klenow片段5 mmol
DNA酶I足迹分析法实验——粗制品的DNA酶足迹分析法
实验方法原理DNA酶足迹分析常用来寻找粗制品中的蛋白质,因而提供了一种在纯化过程中采用的分析方法。通过改变条件,如在反应体系中加入大量的竞争性DNA,或增加反应中盐的浓度,可抑制非特异性的DNA结合蛋白结合到标记的DNA上。实验材料含有DNA结合位点的质粒DNA试剂、试剂盒适当的限制性内切核酸酶10
DNA酶I足迹分析法实验——NA酶I足迹分析法
本分析方法用来检测DNA上特异的蛋白质结合位点。位点上结合的蛋白质可保护 D N A 的 磷 酸 二 酯 键 骨 架 免 于 受 D N A 酶 I 催 化 的 水 解 。 水 解 后 D N A 片 段 在 变 性DNA测序胶上分离,通过放射自显影可使结合位点显示出来。足迹法已进一步发展成为确定D
DNA酶I足迹分析法实验
DNA酶I足迹分析法 用光密度及数值分析法决定蛋白质结合的平衡常数 粗制品的DNA酶足迹分析法 实验方法原理
DNA酶I足迹分析法实验2
实验材料含有DNA结合位点的质粒DNA试剂、试剂盒适当的限制性内切核酸酶100%乙醇及冰冷的70%乙醇TE缓冲液[α-32P] dNTP (3000〜6000 Ci mmol)水溶液1O× Klenow片段缓冲液E. coli DNA聚合酶1的Klenow片段5 mmol L 4dNTP 混合液脱氧
DNA酶足迹法的原理介绍
DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解,在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区),从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移出与蛋白质结合的DNA后,又可测出被结合处DNA的序列。
DNA酶足迹法的功能介绍
DNA酶足迹法是一种用来测定DNA-蛋白质专一性结合的方法。用于检测与特定蛋白质结合 的DNA序列的部位,可展示蛋白质因子同特定DNA片段之间的结合区域。
DNA-酶-I-足迹探针的制备实验
DNA 酶 I 足迹探针的制备实验 试剂、试剂盒 TE 牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷
DNA酶足迹法的原理和应用
DNA酶足迹法是一种用来测定DNA-蛋白质专一性结合的方法。用于检测与特定蛋白质结合 的DNA序列的部位,可展示蛋白质因子同特定DNA片段之间的结合区域。其原理为:DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解,在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区),从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移
DNA-酶-I-足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒 TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇(3-甲基-1-丁醇)乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵 乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩器
DNA-酶-I-足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇(3-甲基-1-丁醇)乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材SpeedVac 旋转浓缩器实验步骤
DNA酶足迹法的基本原理
原理为:DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解,在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区),从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移出与蛋白质结合的DNA后,又可测出被结合处DNA的序列。
DNA足迹法介绍
DNA足迹法,中文名称:DNA足迹法英文名称:DNA footprinting定义:检测DNA序列中DNA结合蛋白识别部位的一种方法。
DNA足迹法的原理介绍
DNA被蛋白质结合后,由于蛋白质的构象保护,DNaseI不能降解这一结合位点,如果对该DNA进行一端的末端标记,并控制好DNaseI的酶量和作用时间,可将该DNA切割成大小不等的DNA片断而蛋白质保护区域不被酶解,这段区域到标记末端的片断是缺失的,对其电泳,可找出蛋白质结合位点的精确位置。
DNA-酶-I-足迹法对-DNA-上的蛋白质结合位点作图实验
实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分试剂、试剂盒 细胞匀浆缓冲液细胞重悬缓冲液细胞淋洗缓冲液乙醇Ficoll 400甲酰胺染色液MgCl2 CaCl2 溶液NaClNonidetP-40酚:氯仿磷酸盐缓冲液聚乙烯醇终止液组织匀浆液组织重悬缓冲液台盼蓝染料DNA 酶 I
DNA-酶-I-足迹法对-DNA-上的蛋白质结合位点作图实验
DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验 实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分
DNA-酶-I-足迹法对-DNA-上的蛋白质结合位点作图实验
本方案介绍在放射性标记的 DNA 片段上确定蛋白质结合位点的作图方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羟自由基断裂 DNA。如果希望得到优化足迹法反应的建议,请参见本方案最后部分的疑难解析以及优化 DNA 酶 I 足迹法反应的栏目。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)
DNA足迹法的基本原理
原理:DNA被蛋白质结合后,由于蛋白质的构象保护,DNaseI不能降解这一结合位点,如果对该DNA进行一端的末端标记,并控制好DNaseI的酶量和作用时间,可将该DNA切割成大小不等的DNA片断而蛋白质保护区域不被酶解,这段区域到标记末端的片断是缺失的,对其电泳,可找出蛋白质结合位点的精确位置。
DNA酶保护分析的方法用途
中文名称DNA酶保护分析英文名称DNase protection assay定 义主要用来检测染色质结构与功能状态的方法。当染色质结构致密,DNA被组蛋白压缩很紧时,基因是不表达的,同时也对DNA酶不敏感。反之,结构蓬松、活跃进行基因表达的染色质,则易遭DNA酶的降解。应用学科生物化学与分子生物学
DNA限制性内切酶酶切分析
一、原理限制性内切酶和基因载体是DNA重组技术中的两个极其重要的方面。限制性内切酶是首先在大肠杆菌中发现的能够分解外来DNA的核酸酶。与核酸外切酶相比,该酶可从DNA双链内部特异的核苷酸序列处将DNA双链切断,产生带有粘性或平头末端的DNA片段。把要克隆的外来DNA和载体DNA用同一种限制性内切酶切
RNA足迹和修饰干扰分析实验
实验方法原理 RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA
RNA足迹和修饰干扰分析实验
RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA 足迹试验的理论基础,它们都是建立在变性、半变性或自然条件下采用碱基特异性
RNA足迹和修饰干扰分析实验
实验方法原理 RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA 足迹试验的理论基础,它们都是建立在变性、半变性或
可以DNA结合的酶DNA连接酶
DNA连接酶:是能够使用来自ATP或NAD的化学能将先前切割或断裂的DNA链聚集在一起的酶。连接酶在DNA滞后链复制中特别重要,因为它们将冈崎碎片组合成DNA链。连接酶在DNA修复和基因重组中也发挥重要作用。
DNA的限制性内切酶酶切分析
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割 DNA分子,
足迹法
High Resolution Genetic Footprinting (Stanford)Genetic footprinting is a technique for high-resolution mapping of the functional organization of a clo
DNA酶切
一、 DNA酶切反应 1、 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶液集中在