DNA足迹法介绍
DNA足迹法,中文名称:DNA足迹法英文名称:DNA footprinting定义:检测DNA序列中DNA结合蛋白识别部位的一种方法。......阅读全文
DNA足迹法介绍
DNA足迹法,中文名称:DNA足迹法英文名称:DNA footprinting定义:检测DNA序列中DNA结合蛋白识别部位的一种方法。
DNA足迹法的原理介绍
DNA被蛋白质结合后,由于蛋白质的构象保护,DNaseI不能降解这一结合位点,如果对该DNA进行一端的末端标记,并控制好DNaseI的酶量和作用时间,可将该DNA切割成大小不等的DNA片断而蛋白质保护区域不被酶解,这段区域到标记末端的片断是缺失的,对其电泳,可找出蛋白质结合位点的精确位置。
DNA酶足迹法的功能介绍
DNA酶足迹法是一种用来测定DNA-蛋白质专一性结合的方法。用于检测与特定蛋白质结合 的DNA序列的部位,可展示蛋白质因子同特定DNA片段之间的结合区域。
DNA酶足迹法的原理介绍
DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解,在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区),从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移出与蛋白质结合的DNA后,又可测出被结合处DNA的序列。
DNA酶I足迹分析法
实验方法原理 实验材料 含有DNA结合位点的质粒DNA试剂、试剂盒 适当的限制性内切核酸酶100%乙醇及冰冷的70%乙醇TE缓冲液[α-32P] dNTP (3000〜6000 Ci mmol)水溶液1O× Klenow片段缓冲液E. coli DNA聚合酶1的Klenow片段5 mmol
DNA酶I足迹分析法实验——粗制品的DNA酶足迹分析法
实验方法原理DNA酶足迹分析常用来寻找粗制品中的蛋白质,因而提供了一种在纯化过程中采用的分析方法。通过改变条件,如在反应体系中加入大量的竞争性DNA,或增加反应中盐的浓度,可抑制非特异性的DNA结合蛋白结合到标记的DNA上。实验材料含有DNA结合位点的质粒DNA试剂、试剂盒适当的限制性内切核酸酶10
DNA酶I足迹分析法实验——NA酶I足迹分析法
本分析方法用来检测DNA上特异的蛋白质结合位点。位点上结合的蛋白质可保护 D N A 的 磷 酸 二 酯 键 骨 架 免 于 受 D N A 酶 I 催 化 的 水 解 。 水 解 后 D N A 片 段 在 变 性DNA测序胶上分离,通过放射自显影可使结合位点显示出来。足迹法已进一步发展成为确定D
DNA酶足迹法的原理和应用
DNA酶足迹法是一种用来测定DNA-蛋白质专一性结合的方法。用于检测与特定蛋白质结合 的DNA序列的部位,可展示蛋白质因子同特定DNA片段之间的结合区域。其原理为:DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解,在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区),从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移
DNA足迹法的基本原理
原理:DNA被蛋白质结合后,由于蛋白质的构象保护,DNaseI不能降解这一结合位点,如果对该DNA进行一端的末端标记,并控制好DNaseI的酶量和作用时间,可将该DNA切割成大小不等的DNA片断而蛋白质保护区域不被酶解,这段区域到标记末端的片断是缺失的,对其电泳,可找出蛋白质结合位点的精确位置。
DNA酶I足迹分析法实验
DNA酶I足迹分析法 用光密度及数值分析法决定蛋白质结合的平衡常数 粗制品的DNA酶足迹分析法 实验方法原理
足迹法
High Resolution Genetic Footprinting (Stanford)Genetic footprinting is a technique for high-resolution mapping of the functional organization of a clo
DNA酶I足迹分析法实验2
实验材料含有DNA结合位点的质粒DNA试剂、试剂盒适当的限制性内切核酸酶100%乙醇及冰冷的70%乙醇TE缓冲液[α-32P] dNTP (3000〜6000 Ci mmol)水溶液1O× Klenow片段缓冲液E. coli DNA聚合酶1的Klenow片段5 mmol L 4dNTP 混合液脱氧
DNA酶足迹法的基本原理
原理为:DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解,在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区),从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移出与蛋白质结合的DNA后,又可测出被结合处DNA的序列。
足迹法(Footprinting)
Footprinting Procedures· DNase I Footprinting (Mike A. Dyer)· DNase I footprintingDetermining the site of binding for a protein on a D
DNA-酶-I-足迹分析实验
DNA 酶 I 足迹分析实验 试剂、试剂盒 32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针 酚 氯仿
DNA-酶-I-足迹分析实验
试剂、试剂盒 32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针酚 氯仿乙醇聚乙烯醇竞争 DNA 缓冲液 Z'(或缓冲液 Ze)DNA 酶 IMgCl2(10 mmol L) CaCl2(5 mmol L)DNA 酶 I 终止液蛋白酶 K甲酰胺加样缓冲液实验步骤 材料32P-标记 DNA 酶 I 足迹探
DNA-酶-I-足迹分析实验
试剂、试剂盒32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针酚 氯仿乙醇聚乙烯醇竞争 DNA 缓冲液Z'(或缓冲液 Ze)DNA 酶 IMgCl2(10 mmol L) CaCl2(5 mmol L)DNA 酶 I 终止液蛋白酶 K甲酰胺加样缓冲液实验步骤材料32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针酚/
RNA足迹法的定义
中文名称RNA足迹法英文名称RNA footprinting定 义分析RNA链与其他分子特异结合部位的方法。将标记的RNA与待研究的物质(如某种蛋白质或药物)进行结合反应后,用RNA酶清除未被结合的部分,再用电泳显示RNA链上结合位置的多寡和长度。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二
DNA-酶-I-足迹法对-DNA-上的蛋白质结合位点作图实验
实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分试剂、试剂盒 细胞匀浆缓冲液细胞重悬缓冲液细胞淋洗缓冲液乙醇Ficoll 400甲酰胺染色液MgCl2 CaCl2 溶液NaClNonidetP-40酚:氯仿磷酸盐缓冲液聚乙烯醇终止液组织匀浆液组织重悬缓冲液台盼蓝染料DNA 酶 I
DNA-酶-I-足迹法对-DNA-上的蛋白质结合位点作图实验
本方案介绍在放射性标记的 DNA 片段上确定蛋白质结合位点的作图方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羟自由基断裂 DNA。如果希望得到优化足迹法反应的建议,请参见本方案最后部分的疑难解析以及优化 DNA 酶 I 足迹法反应的栏目。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)
DNA-酶-I-足迹法对-DNA-上的蛋白质结合位点作图实验
DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验 实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分
DNA-酶-I-足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒 TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇(3-甲基-1-丁醇)乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵 乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩器
DNA-酶-I-足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇(3-甲基-1-丁醇)乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材SpeedVac 旋转浓缩器实验步骤
DNA-酶-I-足迹探针的制备实验
DNA 酶 I 足迹探针的制备实验 试剂、试剂盒 TE 牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷
RNA足迹法的原理和应用
中文名称RNA足迹法英文名称RNA footprinting定 义分析RNA链与其他分子特异结合部位的方法。将标记的RNA与待研究的物质(如某种蛋白质或药物)进行结合反应后,用RNA酶清除未被结合的部分,再用电泳显示RNA链上结合位置的多寡和长度。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二
RNA足迹法的基本概念
中文名称RNA足迹法英文名称RNA footprinting定 义分析RNA链与其他分子特异结合部位的方法。将标记的RNA与待研究的物质(如某种蛋白质或药物)进行结合反应后,用RNA酶清除未被结合的部分,再用电泳显示RNA链上结合位置的多寡和长度。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二
关于DNA印迹法的基本介绍
Southern印迹法(Southern Blot)是将基因组 DNA经限制性内切酶酶解、琼脂糖凝胶电泳分离,使DNA片段按分子量大小排列在琼脂糖凝胶上。经碱处理凝胶使DNA变性(使双链DNA变成单链),通过具有一定盐离子浓度溶液的毛细管作用,将凝胶中变性的单链DNA片段原位地吸印到硝酸纤维素滤
DNA指纹法
DNA Fingerprinting (David F. Betsch)the theory, procedures and applications · DNA Fingerprinting (Polyarylamide Gel) (Caltech)BAC DNA sample
DNA印迹法所需的仪器试剂介绍
1电热真空干燥箱 2硝酸纤维素滤膜或尼龙膜 3大方瓷盘、带盖方盘、玻璃板 4滤纸、吸水纸、保鲜膜、蜡膜Parafilm、一次性手套等5刀片、刻度吸管、镊子、剪刀、lkg重物 二、材料 电泳分离DNA的琼脂糖凝胶
荧光法DNA测序的方法介绍
中文名称荧光法DNA测序英文名称fluorescencebased DNA sequencing定 义通过四种不同荧光试剂分别标记四种双脱氧核苷酸进行DNA测序的方法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)