流式细胞计量术（基于荧光的蛋白质分析）实验
活细胞表面抗原的荧光染色（直接免疫荧光） 活细胞表面抗原的荧光染色（间接免疫荧光） 实验材料 细胞 初始抗体 试剂、试剂盒 PBS 溶液 叠氮化钠 实验步骤 1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，轻摇，收获细胞。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA......阅读全文
蛋白质的内源荧光与荧光探针
利用荧光光谱法研究蛋白质一般有两种方法。一是测定蛋白质分子的自身荧光(内源荧光)，另一种是当蛋白质本身不能发射荧光时，通过非共价吸附或共价作用向蛋白质分子的特殊部位引入外源荧光(也称荧光探针)，然后测定外源荧光物质的荧光。 蛋白质的内源荧光 含有芳香族氨基酸(色氨酸(tryptophan ,Trp
流式细胞计量术（基于荧光的蛋白质分析）实验
活细胞表面抗原的荧光染色（直接免疫荧光） 活细胞表面抗原的荧光染色（间接免疫荧光） 实验材料 细胞
流式细胞计量术（基于荧光的蛋白质分析）实验
活细胞表面抗原的荧光染色（直接免疫荧光） 活细胞表面抗原的荧光染色（间接免疫荧光） 实验材料 细胞
流式细胞计量术（基于荧光的蛋白质分析）实验
活细胞表面抗原的荧光染色（直接免疫荧光）实验材料细胞初始抗体试剂、试剂盒PBS 溶液叠氮化钠实验步骤1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，轻摇，收获细胞。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1
蛋白质的内源性荧光与荧光探针
利用荧光光谱法研究蛋白质一般有两种方法。一是测定蛋白质分子的自身荧光(内源荧光)，另一种是当蛋白质本身不能发射荧光时，通过非共价吸附或共价作用向蛋白质分子的特殊部位引入外源荧光(也称荧光探针)，然后测定外源荧光物质的荧光。 蛋白质的内源荧光 含有芳香族氨基酸(色氨酸(tryptophan
流式细胞计量术（基于荧光的蛋白质分析）实验2
活细胞表面抗原的荧光染色（间接免疫荧光）实验材料细胞试剂、试剂盒PBS 溶液叠氮化钠实验步骤1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，收获细胞。此程序比通常的胰蛋白酶消化时间长。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。操作始终在冰上进行。2. 用 4
荧光造影分析
1．臂一视网膜循环时间（arm-retina circulation time ,A-Rct ）荧光素从肘前静脉注射后，经右心→左心→主动脉→颈总动脉→颈内动脉→眼动脉而到眼底，为时7～12秒（但亦有长达15～30秒者），两眼相差不能超过0.5～1秒。2．视网膜血循环的分期及荧光形态荧光素钠经眼动脉
激光荧光分析
激光荧光分析采用发射光强度大，波长更纯的激光作光源，该光源大大提高了荧光分析方法的灵敏度和选择性。利用激光光源的相干性可以产生非常理想的辐射，以激光为光源可以使仪器仅仅使用一个单色器，加上利用可调谐激光器的可调功能获取激发光谱发射光谱。目前，激光诱导荧光分析法已经成为分析超低浓度物质的灵敏而有效的方
同步荧光分析
同步荧光分析由Lloyd首先提出，它与常用荧光测定最大的区别是同时扫描激发和发射两个单色器波长，由测得的荧光强度信号与对应的激发波长(或发射波长)构成光谱图，即同步荧光光谱。按光谱扫描方式的不同，同步荧光分析可以分为恒(固定)波长法、恒能量法、可变角法和恒基体法。同步荧光分析具有光谱简单，谱带窄、分
荧光分析特点
（1）分子荧光光谱分析的主要特点是灵敏度高、选择性好，荧光分析的灵敏度要比吸收光谱测量高2-3个数量级。分光光度法通常在 10-7 级 ，而荧光的灵敏度达10-9。（2）强选择性强，荧光物质具有两种特征光谱：激发光谱和吸收光谱，相对于分光光度法单一的吸收光谱来说，荧光光谱可根据激发光谱和发射光谱来鉴
低温荧光分析
通常荧光分析都在室温下进行，荧光光谱为带光谱，由于各种变宽因素，谱带往往较宽。自然界有许多有机化合物，其化学结构颇为接近，而且各存在着多种同分异构体和衍生物，它们的光谱往往相互重叠，难以鉴别表征以及定量测定。环境因素对分子荧光会产生显著的影响，温度是其中一个主要因素。随着温度的降低，介质黏度增大，荧
荧光免疫分析
免疫分析是基于蛋白抗原和抗体之间、或者小分子半抗原与抗体之间的特异反应的分析方法，是生物分析化学的重要内容之一。其中，用荧光物质作为标记的免疫分析即为荧光免疫分析。作为荧光标记物，应具有高的荧光强度，其发射的荧光与背景荧光有明显区别；它与抗原或抗体的结合不破坏其免疫活性，标记过程要简单、快速；水溶性
偏振荧光分析
任何物质都处于不断运动中，液体环境中的荧光分子也不例外。因此当受到偏振光激发时，荧光分子的运动状态(如旋转或翻转)、荧光分子与其他因子相互作用(如相互结合或排斥)、其所处环境的性质(如溶液的黏度、温度_等因素都可能对荧光分子受激发后发出的偏振光的性质产生影响。对此进行分析比较，就可能揭开物质活动的内
荧光光谱仪的偏振荧光分析和时间分辨荧光分析
1、偏振荧光分析。荧光体的荧光偏振与荧光各向异性值的测定，能够提供与荧光体在激发态寿命期间动力学相关的信息，因此荧光偏振技术被广泛应用于研究分子间的作用，例如蛋白质与核酸、抗原与抗体、蛋白质与多肽的结合作用等。 2、时间分辨荧光分析。由于不同分子的荧光寿命不同，可在激发与检测之间延缓一段时间，
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析—凝胶蛋白质激酶分析
试剂、试剂盒Tris-HClDTT盐酸胍尿素激酶分析缓冲液仪器、耗材SDS-PAGE实验步骤1. 准备下列材料：SDS-PAGE 要用到的所有试剂50 mmol/L Tris-HCl，室温（pH 8.0)，1 mmol/L DTT6 mol/L 盐酸胍，50 mmol/L Tris-HCl，室温（p
蛋白质的荧光激发波长如何选择？
荧光蛋白的波长组指定激发发射适用于UV - 紫外线360 - 380nm415nm长波通DapiVI - 紫罗兰400 - 415nm450nm长波通蓝色荧光蛋白青色荧光蛋白RB - 皇家蓝440-460nm500nm长波通绿色荧光蛋白RB - 皇家蓝440-460nm500 - 560nm
蛋白质分析技术(WesternBlot－ELISA免疫荧光与免疫组化技术)3
（一）细胞膜蛋白分子的检测原理：细胞膜表面的抗原或受体可特异地与相应的抗体或配体结合，将针对细胞表面抗原的抗体或配体用不同的荧光素标记，根据不同荧光物质的最大激发和发射波长的不同，即可准确定量每种荧光物质的强度，从而推出相应细胞表面抗原表达量1 直接法：细胞＋荧光素标记的抗CD分子的抗体→4ºC反应
蛋白质分析技术(ELISA、Western－Blot、免疫荧光与免疫组化技术)
一 Western Blot1 原理：将通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或PVDF膜上，然后与能特异性识别待检蛋白的抗体进行反应，洗涤去除没有结合的特异性抗体后，加入标记的、能识别特异性抗体的种属特异性抗体，反应一段时间后再次洗涤去除非特异性结合的标记抗体，加入适合标记物的检测试剂
蛋白质分析技术(Western－Blot、ELISA、免疫荧光与免疫组化技术)
1 原理：将通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或PVDF膜上，然后与能特异性识别待检蛋白的抗体进行反应，洗涤去除没有结合的特异性抗体后，加入标记的、能识别特异性抗体的种属特异性抗体，反应一段时间后再次洗涤去除非特异性结合的标记抗体，加入适合标记物的检测试剂进行显色或发光等，观察有无特
蛋白质分析技术(WesternBlot－ELISA免疫荧光与免疫组化技术)2
2 类型（1）间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体，检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。 常用于临床血清中自身抗体的检测，以及杂交瘤上清特异性抗体的筛选。如血清中PDCD5自身抗体的检测。(2) 双抗体夹心法测抗原是检测抗原最常用的方法。只要获得针对受检抗原的特
蛋白质分析技术(WesternBlot－ELISA免疫荧光与免疫组化技术)4
四免疫组织化学技术原理：是指酶标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的成色反应，对相应的抗原进行定性、定位和定量测定的一项技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙的结合起来，借助显微镜（包括荧光显微镜、电子显微镜等）的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质（如蛋
概述荧光分析的分析方法
直接测定法 利用物质自身发射的荧光进行测定分析。 间接测定法 不管是直接测定，还是间接测定，一般的采用标准工作曲线法，取各种已知量的荧光物质，配成一系列的标准溶液，测定出这些标准溶液的荧光强度，然后给出荧光强度对标准溶液的浓度的工作曲线。在同样的仪器条件下，测定未知样品的荧光强度，然后从标
荧光分析的特点
荧光分析是一种先进的分析方法，它比电子探针法、质谱法、光谱法、极谱法等都应用的较广泛和普及，这同荧光分析具有很多优点分不开的。荧光分析所用的设备较简单，如目测荧光仪和荧光光度计构造非常简单完全可以自己制造。比起质谱仪、极谱仪和电子探针仪来它在造价上要便宜很多倍，而且荧光分析的最大特点是：分析灵敏
荧光分析新技术
常规的荧光分析技术主要是直接或间接对无机化合物、有机化合物等进行定性和定量分析，因其高灵敏度和选择性，得到了较为广泛的应用。然而，在实际情况中由于分析物质的复杂性、所处环境的多样性等，常规的荧光分析法收到了极大限制。许多新型的荧光技术，例如同步荧光分析、偏振荧光分析、三维荧光分析、时间分辨荧光分析、
荧光免疫分析原理
荧光免疫检测技术具有专一性强、灵敏度高、实用性好等优点，因此它被用于测量含量很低的生物活性化合物，例如蛋白质（酶、接受体、抗体）、激素（甾族化合物、甲状腺激素、酞激素）、药物及微生物等 作为免疫分析法的一种，FIA同样存在两种模式，即竞争型和夹心型。其中竞争型（以标记抗原的竞争型为例）的测定原
什么是荧光分析
荧光分析法是指利用某些物质被紫外光照射后处于激发态，激发态分子经历一个碰撞及发射的去激发过程所发生的能反映出该物质特性的荧光，可以进行定性或定量分析的方法。由于有些物质本身不发射荧光（或荧光很弱），这就需要把不发射荧光的物质转化成能发射荧光的物质。例如用某些试剂（如荧光染料），使其与不发射荧光的
荧光分析的原理
使激发光的波长和强度保持不变，而让荧光物质所发生的荧光通过发射单色器照射于检测器上,调节发射单色器至各种不同波长处,由检测器测出相应的荧光强度，然后以荧光波长为横坐标，以荧光强度为纵坐标作图，即为荧光光谱，又称荧光发射光谱。让不同波长的激发光激发荧光物质使之发生荧光，而让荧光以固定的发射波长照射到检
时间分辨荧光分析
由于不同分子的荧光寿命不同，可在激发与检测之间延缓一段时间，使具有不同荧光寿命的物质得以分别检测，即时间分辨荧光分析。采用带时间延迟设备的脉冲光源和带有门控时间电路的检测器件，可以在固定延迟时间后和门控宽度内得到时间分辨荧光光谱。选择合适的延迟时间，可以把待测组分的荧光和其他组分或杂质的荧光以及仪器
什么是荧光分析？
荧光分析就是基于物质的光致发光现象而产生的荧光的特性及其强度进行物质的定性和定量的分析方法。目前，也广泛地作为一种表征技术来研究体系的物理、化学性质及其变化情况，例如生物大分子构象及性质的研究。 荧光光谱适用于固体粉末、晶体、薄膜、液体等样品的分析。根据样品分别选配石英池（液体样品）或固体样品
荧光分析的仪器
进行荧光分析的仪器称为荧光分光光度计。它由以下五部分组成。 是从复合光色散出窄波带宽度光束的装置，由狭缝、镜子和色散元件组成。色散元件包括棱镜和光栅。荧光分光光度计有两个单色器：激发单色器和发射单色器。绘制三维荧光光谱（图4 ）时则采用正交多色器。所谓多色器系单色器去掉出射狭缝，正交指两个多色器的入