PCR剪接VHCDR3基因文库和VL基因构建scFv基因文库
[器材和试剂]Winard PCR纯化试剂盒 （Promega）PCR试剂和设备用于连接scFv和pHENl DNA以及将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备 FDSEQ引物扩增的VHCDR3基因文库和VL基因，[方法]1. 配制4个25ulPCR反应液，包含：去离子水，10.25ul10×Vent缓冲液，2.5ul20×dNTP（每种5mmol/L）， 1.25ulVH文库DNA（200ng），l 0ulVL基因DNA（200ng）， 5.0ulVentDNA聚合酶（2单位），1.0ul在有加热盖PCR仪中以94℃1.5分钟、65℃1.5分针、72℃1,5分钟无扩增循环7次，连接片段。2. 7次循环后，保持在94℃，添加含有旁侧引物的25ul混合液：去离子水，15.2ul10×Vent缓冲液，2.5ul20×dNTP（每种5mmol/L）， 1.3ulFdSEQ引物 （10pmol/u......阅读全文
PCR剪接VHCDR3基因文库和VL基因构建scFv基因文库
[器材和试剂]Winard PCR纯化试剂盒 （Promega）PCR试剂和设备用于连接scFv和pHENl DNA以及将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备 FDSEQ引物扩增的VHCDR3基因文库和VL基因，[方法]1. 配制4个25ulPCR反应液，包含：去离子水，10.25ul1
PCR剪接VHCDR3基因文库和VL基因构建scFv基因文库
[器材和试剂]Winard PCR纯化试剂盒 （Promega）PCR试剂和设备用于连接scFv和pHENl DNA以及将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备 FDSEQ引物扩增的VHCDR3基因文库和VL基因，[方法]1. 配制4个25ulPCR反应液，包含：去离子水，10.25ul1
人VL基因文库的构建
[器材和试剂]● PCR试剂和设备● cFv基因文库单链模板DNA,制备自pHENl中的天然scFv文库（10ng/u1）● Gelleclean试剂盒（Qbiogene）● Wtzard PCR纯化试剂盒（ProlneSa）● RJHl/2Xho引物： 5'-GGC ACC C
VHCDR3基因文库与VL基因的扩增
[器材和试剂]● PCR试剂和设备● Geneclean试剂盒（Qbiogene）● VHFOR随机引物（见下文），10pmol/ul● LMB3引物● VHBACK引物； 5,-TTT GAC TAC TGG GGCCAG GG-3', 10pmol/u1● FdSEQ 引物： 5'
人VL基因文库（genomic－library）的构建
[器材和试剂] ● PCR试剂和设备 ● cFv基因文库单链模板DNA,制备自pHENl中的天然scFv文库（10ng/u1） ● Gelleclean试剂盒（Qbiogene） ● Wtzard PCR纯化试剂盒（ProlneSa） ● RJHl/2Xho引物： 5'-GGC ACC CT
用突变的VlCDR3构建SCFv基因文库
实验概要本实验用突变的VlCDR3构建了SCFv基因文库。主要试剂1. 去离子水(Millipore)2. VentDNA聚合酶和缓冲液(NEB)3. 20XdNTP(每种浓度5mmol/L)(NEB)4. 琼脂糖胶盒5. Geneclean试剂盒(QbiOgene)6. 含有起始scFv基因的质粒
NGS基因文库构建大比拼（二）
随着测序技术的发展，科学界也开始越来越多地应用测序技术来解决生物学问题。在过去的十年里，新一代测序技术—第二代测序(NGS)迅猛发展，越来越多测序实验室的采用NGS技术作为测序主要手段。而且NGS高通量的特点，使之成为研究DNA和RNA的主要工具。在NGS过程中，构建基因文库是整个测序进程中第一个步
Yeast基因文库的分类和选择
自1995 年成立以来，Dharmacon 提供各种用于批量研究基因功能的工具，支持最多从全基因组范围到信号通路、基因家族方面研究基因与疾病、表型、分子机理对应的关系。近年来随着高端酶标仪、高通量显微镜、自动化流式细胞仪、高内涵等设备的普及和技术更新，Dharmacon 文库在各个领域中
Yeast基因文库的分类和选择
文库种类Dharmacon酵母资源包括多个酵母基因组文库，包括ORF文库、基因敲除（Knock Out）菌株、蛋白质相互作用文库、突变菌株和各种筛选文库等。除此之外，Dharmacon 针对Saccharomyces cerevisiae 研究领域提供了Zoonome siRNA 文库。酵母
基因文库制备仪简介
基因文库制备仪是一种用于基础医学领域的分析仪器，于2015年11月1日启用。 技术指标 通量为10M，100M和1G测序芯片可以任意选择；标准测序时间为2~3小时；使用无标记的核苷酸及酶进行测序。 主要功能 新一代测序技术，基因组DNA序列测定（微生物基因组测序、线粒体测序、靶向测序）、
创建轻链改组噬菌体文库
[器材和试剂]● PCR试剂和设备● 含有起始scFV基因的载体pHENl单链模板DNA（50ng/ul）● Geneclean试剂盒● Wlzard PCR纯化试剂盒● scFvJHL2XhoFOR引物：5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC
抗原抗体反应抗体基因文库
抗体基因文库（antibody recombination library）是将不同的重链和轻链基因随机组合，克隆到合适的表达载体中，在原核细胞表达不同的抗体，形成一个抗体库，从这个抗体库中，用抗原可以筛选到相应的抗体基因。抗体基因来源于杂交瘤细胞或动物B细胞（免疫或未免疫）的DNA和mRNA。
E.coli基因文库的分类和选择
自 1995 年成立以来，Dharmacon 在生物信息学，RNA 生物学和合成化学方面的专长 , 使我们能够开发出一整套研究基因功能的产品。作为 RNA 定制合成的leader，Dharmacon 公司是 RNA 干扰新发现领域的早期参与者，并且在若干重要的科学发现中，以及确保沉默效率的
C.elegans基因文库的分类和选择
自 1995 年成立以来，Dharmacon 在生物信息学，RNA 生物学和合成化学方面的专长 , 使我们能够开发出一整套研究基因功能的产品。作为 RNA 定制合成的领导者，Dharmacon 公司是 RNA 干扰新发现领域的早期参与者，并且在若干重要的科学发现中，以及确保沉默效率的 siRNA
C.elegans基因文库的分类和选择
自 1995 年成立以来，Dharmacon 在生物信息学，RNA 生物学和合成化学方面的专长 , 使我们能够开发出一整套研究基因功能的产品。作为 RNA 定制合成的领导者，Dharmacon 公司是 RNA 干扰新发现领域的早期参与者，并且在若干重要的科学发现中，以及确保沉默效率的 siRNA
E.coli基因文库的分类和选择
文库种类Dharmacon 大肠杆菌资源库包括大肠杆菌Keio基因敲除文库，监测基因表达的启动子-GFP融合文库，以及用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的标记ORF文库。大肠杆菌（E.coli）基因cDNA&ORF文库 （1）大肠杆菌Keio基因敲除文库（E.coli Keio Knockout Col
构建人VH基因节段文库
构建人VH基因节段文库[器材和试剂]● PCR试剂和设备● 自pHENl中天然scFv文库制备的scFv基因文库模板DNA（单链和双链DNA 10ng/ul）● Genecle&n试剂盒（Qbiogene）● PVH3FoR1引物： 5'-TCG CGC GCA GTA ATA CAC GG
再扩增VH基因文库添加3‘限制性位点并克隆创建VH基因节...
再扩增VH基因文库添加3‘限制性位点并克隆创建VH基因节段文库[器材和试剂]● PCR试剂和设备● Wlzard PCR纯化试剂盒（Promega）● PVHlOR2引物： 5'-GAG TCA TTC TCG ACT TGC GGC CGC TCG CGC GCA GTA ATA CAC
云南建立三种野生稻基因文库
云南省农科院生物技术与种质资源研究所目前已为该省分布的三种野生稻建立了基因文库。 云南省农科院生物技术与种质资源研究所副所长程在全博士接受新华社记者专访时表示，在优异种质基因发掘研究方面，研究所首次构建了普通野生稻、疣粒野生稻和药用野生稻cDNA文库，并从中发现和分离获得一大批野生稻重要功能基因
目的基因的获取1
基因工程的主要目的是使优良性状相关的基因聚集在同一生物体中，创造出具有高度应用价值的新物种。为此必须从现有生物群中，根据需要分离出用于克隆的此类基因。这类基因称之为目的基因，即准备要分离、改造、扩增或表达的基因。目前目的基因的获取方法主要有以下2类：（1）已知基因的获得：PCR分离法和化学合成法等（
目的基因获取的方法
目的基因的获取方法主要有以下2类（1）已知基因的获得 PCR分离法和化学合成法等（2）未知基因的获得 直接分离法和基因文库分离法等直接分离法1、限制性内切酶法用限制性内切酶把基因组DNA切成不同大小的片断应用对象 适合于从简单的基因组中分离目的基因 如质粒或病毒的大小只有几千碱基 大的也超不过几十万
基因分离克隆的方法
1 基因芯片技术分离目的基因生物芯片是高密度固定在固相支持介质上的生物信息分子的微列阵。列阵中每个分子的序列及位置都是已知的，并按预先设定好的顺序点阵。基因芯片是生物芯片的一种，其上固定的是核算类物质，主要用于DNA、RNA分析。分为DNA芯片和微点阵两种。分离目的基因是是指从基因组中发现或找出某个
分子克隆实验载体DNA的选择
①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松弛型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以下的
如何提取目的基因
1.从基因文库中获取目的基因（俗称：鸟枪法）：将含有某种生物的许多dna片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物不同的基因，称为基因文库。当需要某一片段时，根据目的基因的有关信息，如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mrna，以及基因的表达产物蛋白
分子克隆化载体DNA的选择介绍
①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松弛型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以
影响土壤细菌的因素有哪些？
有研究表明，长期施肥会显著影响土壤细菌。稻田土壤是"迷失碳"的重要吸纳场所之一，也是温室气体（CH4和N2O等）的重要排放源。大气温室气体的动态变化与土壤碳氮转化的微生物过程紧密相关。以湖南桃江国家级稻田肥力变化长期定位试验点为平台。采用PCR-克隆测序和实时荧光定量PCR技术。研究不施肥（CK
mRNA差异显示技术(mRNA－differetial－display)(2)
6.技术路线 mRNA 差异显示技术 The fluoroDD System •Builds on the HIEROGLYPH™ system –TMR-labeled anchored primers –Increased primer concentrations –I
应用混合寡核苷酸引物引导的cDNA扩增（MOPAC）
对于仅仅知道某种蛋白质的部分序列，而要克隆其基因的最佳方法是，利用已知氨基酸序列设计相应的寡核苷酸，用此寡核苷酸作为探针去筛选基因文库钓取全长基因或者用寡核苷酸作为引物进行 PCR 扩增靶基因。这两种方法都会遇到寡核苷酸所编码的 遗传密码子的简并性问题。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译
什么是反向－PCR？反向－PCR的特点
常规 PCR 是扩增两引物之间的 DNA 片段,反向 PCR(reverse PCR)是用引物来扩增两引物以外的 DNA 片段。一般先用限制性内切酶酶解 DNA(目的基因中不存在该酶的酶切位点,且片段应短于2～3kb),然后用连接酶使带有黏性末端的靶片段自身环化,最后用一对反向引物进行 PCR,得到
常用的植物目的基因克隆技术
1、通过已知基因产物的分析和鉴定这类技术主要通过生物化学和病理学研究分离鉴定有关基因的蛋白产物，并对蛋白质氨基酸顺序进行分析，推断出编码该蛋白质的基因序列，然后通过抗体、寡聚核苷酸探针或PCR制备的探针对文库进行筛选来分离目的基因。如植物抗病虫基因工程中常用的苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因（Bt基因）、