反向PCR(inversePCR)实验步骤

inverse-PCR是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多,而Inverse-PCR一般只要有特异条带,基本上就是目的片段。基本步骤如下:1、反向PCR(Inverse PCR)原理:反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。a. 选择合适的限制性内切酶位点。并在T-DNA的边界(左边界、右边界均可)和酶切位点附近设计引物P1、P2;b. 回收DNA,T4连接酶连接,使酶切后的DNA片段环化;c. 回收连接后的DNA,用引物P1、P2做PCR,就可扩增到两端为T-DNA插入序列,中间为侧翼序列的片段。2、限制性内切酶消化:选择合适的限制性内切酶,基因组一定要切成弥散性的条带。在酶切之前,应对基因组DNA定量。根据T-DNA的左边界序列选择合适的酶切位点EcoRI,BamHI和HindIII/PstI,并在酶切位点上游附近设计引物Z1,Z2,Z3和Z4,然后用这些内切酶分......阅读全文

液相色谱柱的正反向

液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚

反向色谱流动相的pH值

  在以反相液相分离极性和离子型化合物时常采用缓冲溶液作为流动相。缓冲溶液应具有足够高的离子强度,这样可以避免出现不对称峰和峰分裂。    缓冲液应具有以下特征:    1 在pH=2~8之间要有足够大的缓冲容量;    2与检测器匹配;    3可以与为了改善分离添加的有机溶剂混溶;    4 能

液相色谱柱的正反向

液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。本

液相色谱柱的正反向

液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。本

如何反向冲洗液相色谱柱

主要针对的反向色谱柱而讲!1.色谱柱简介最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性添充剂,以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用,辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等)也有使用,正相色谱系统使用极性填充剂,常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交

细胞化学词汇末端反向重复[序列]

中文名称:末端反向重复[序列]英文名称:inverted terminal repeat;ITR定  义:排列顺序相反的、等同的或密切相关的核苷酸序列。常出现于某些转座子的末端。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

反向聚合酶链反应的定义

中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定  义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶,切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段,将切出的DNA区段环化,然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学

泛发性反向银屑病病例分析

1 临床资料 患者男, 22 岁,全身红斑鳞屑伴瘙痒反复6 个 月,复发3 周。患者6 个月前因“扁桃体炎”后在头 皮、胸背部四肢伸侧出现散在分布的硬币大小红斑 片,伴瘙痒,就诊于当地医院,考虑“寻常性银屑 病”,给予静滴头孢呋辛、口服雷公藤多甙片及外用 复方氟米松软膏等治疗 3 周左右,皮疹基本消

反向平行[核苷酸]链的定义

中文名称反向平行[核苷酸]链英文名称antiparallel strand;antiparallel nucleotide chain定  义DNA双螺旋结构中相互平行、方向相反的两条链,其中一条链的5'端对应于另一条链的3'端。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

伴反向-Gottron-丘疹的皮肌炎病例分析

皮肌炎是一种主要累及皮肤和肌肉的自身免疫性结缔组织病,常见特征性皮损包括Heliotrope征、Gottron丘疹、Gottron征等,反向Gottron 丘疹少见。反向Gottron丘疹指皮肌炎患者掌侧出现形态不一、扁平丘疹,类似经典的Gottron丘疹,亦累及指掌侧中部、关节皮肤,在近指

一例反向银屑病诊治经验

反向银屑病,是一种特殊部位的寻常性银屑病,常累及腹股沟、外阴、腋窝、乳房下褶、臀及其他褶皱部位,又称为褶皱部位或屈侧银屑病。皮损呈界限明显的炎性红斑,鳞屑少或无鳞屑。由于患部潮湿多汗及经常摩擦,皮损表面湿润而呈湿疹样变化。熊喜喜等报道一例采用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗的反向银屑病。

反向高效液相色谱柱使用及维护

反相高效液相色谱(RP-HPLC)是一种基于溶质表面、极性流动相和非极性固定相之间疏水作用的色谱模型。任何有机分子的结构中都有非极性疏水部分。零件越大,一般保留值越高。它广泛应用于高效液相色谱。在生物大分子的反相液相色谱(RP-LC)条件下,大多数流动相为酸性、低离子强度的水溶液,含有一定比例的有机

什么是正相色谱,什么是反向色谱

反相还是正相,是根据流动相相对于固定相的极性而言的。流动相极性强于固定相的,称作反相色谱;流动相极性弱于固定相的,称作正相色谱。反相色谱流动相的极性强,容易带着极性分子走,而留下非极性分子。这主要用于非极性样品的分离。

什么是正相色谱,什么是反向色谱

反相还是正相,是根据流动相相对于固定相的极性而言的。流动相极性强于固定相的,称作反相色谱;流动相极性弱于固定相的,称作正相色谱。反相色谱流动相的极性强,容易带着极性分子走,而留下非极性分子。这主要用于非极性样品的分离。

芯片反向技术干货:FIB芯片电路修改(一)

  在各类应用中,以线路修补和布局验证这一类的工作具有最大经济效益,局部的线路修改可省略重作光罩和初次试作的研发成本,这样的运作模式对缩短研发到量产的时程绝对有效,同时节省大量研发费用。封装后的芯片,经测试需将两条线路连接进行功能测试,此时可利用聚焦离子束系统将器件上层的钝化层打开,露出需要

钢筋反向弯曲试验夹具的使用说明

钢筋反向弯曲试验装置 钢筋反向弯曲试验夹具 新款钢筋反向弯曲试验装置一、钢筋反向弯曲试验装置简介:钢筋反向弯曲试验装置、钢筋反向弯曲试验夹具适用于《GB/T1499.2-2018钢筋混凝土用钢 第2部分:热轧带肋钢筋》是一种结构简单,工作稳定可靠的,能提供准确且足够承载力的反向弯曲支点的夹具 。二、

什么叫反向振荡器放大器-

人们用的最熟悉和用得最多的音频处理电路就是普通的运算放大器。一般可将运放简单地视为:具有一个信号输出端口(Out)和同相、反相两个高阻抗输入端的高增益直接耦合电压放大单元,因此可采用运放制作同相、反相及差分放大器运算放大器是用途广泛的器件,接入适当的反馈网络,可用作精密的交流和直流放大器、有源滤波器

lncRNA反向遗传学研究的典型案例

研究背景长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)普遍被认为是一类不能编码蛋白的长链RNA。由于其序列较长,所以可以有较大的潜力形成多种复杂构象,从而通过不同生物学途径发挥其作用。此外,由于其不具备蛋白编码能力,因此此类RNA也主要由其碱基序列形成的高级结构来执行生物

钢筋正反向弯曲试验机操作步骤

GW-40A型钢筋弯曲试验机是对钢筋进行平面反向弯曲试验和冷弯试验的测试设备,其主要技术参数符合YB/T5126-93和GB1499-1998 的标准要求,为钢厂和建筑单位检验罗纹钢筋反弯性能和冷弯性能必不可少的试验设备,同时适用于建筑行业现场钢筋弯曲,达到试验与施工一机两用。一、基本要求1.电

反向色谱法分离效果的影响因素

影响因素(1)柱长有机小分子和肽类的分辨率随柱长的增加而增加.但是柱长增加并不能使蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率显著增加.它们在较短的柱子上往往也有很好的分离效果。(2)流动相的流速。有机小分子和肽类的分辨率对流动相流速非常敏感。而蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率则不然。流速越小,柱子越长,色谱峰

现在有哪几种PCR的方法

Qβ复制酶反应Kacian等于1972年首次报报Qβ复制酶催化RNA模板的自我复制功能,它能在常温30min,将其天然MDV扩增至109.1986年Chu等报道用生物标记的靶序列特异性探针,可与亲和素联接的MDV杂交,经洗脱未被结合的MDV后,再加入Qβ复制酶,扩增复制MDV拷贝,然后用溴乙锭染色检

现在有哪几种PCR的方法

Qβ复制酶反应Kacian等于1972年首次报报Qβ复制酶催化RNA模板的自我复制功能,它能在常温30min,将其天然MDV扩增至109.1986年Chu等报道用生物标记的靶序列特异性探针,可与亲和素联接的MDV杂交,经洗脱未被结合的MDV后,再加入Qβ复制酶,扩增复制MDV拷贝,然后用溴乙锭染色检

反向弯曲试验机的操作流程简析

 开机时请先把换向阀向上提起使活塞上升到极限,保压数分钟使油液温度适当升高后把换向阀向下按至“止”,此时电机空转,再按试件的尺寸把弯曲支座的距离调整好,选择适当直径弯心安装到活塞下端,首先放平试件到弯心支座,然后打开弯曲机仪表,按O 键(清零)后开始试验,把换向阀向下按至“下”,速度可以用手动送油阀

反向微柱的准备Preparation-of-ReversedPhase-Microcolumns

INTRODUCTIONOne versatile strategy for sample cleanup prior to MALDI-MS analysis uses microscale columns designed for direct sample elution onto the M

色谱柱正向使用反向冲洗优势和原理

首先说说柱子能不能反冲的问题,色谱柱到底能不能反冲?如果色谱柱两端的筛板孔径相同反冲是不会有什么问题的,从填料流失的角度来说,粒径为5um,而筛板孔径为2um,这种情况下正冲反冲都不会造成填料的流失;此外,从柱子装填的角度来说,装柱时是按照与柱身箭头相反的方向装填的,与反冲时的液体流

色谱柱正向使用反向冲洗优势和原理

先说说柱子能不能反冲的问题,色谱柱到底能不能反冲?如果色谱柱两端的筛板孔径相同反冲是不会有什么问题的,从填料流失的角度来说,粒径为5um,而筛板孔径为2um,这种情况下正冲反冲都不会造成填料的流失;此外,从柱子装填的角度来说,装柱时是按照与柱身箭头相反的方向装填的,与反冲时的液体流路方向相同,装柱时

双胎反向动脉灌注序列症临床特点分析

单绒毛膜双胎( monochorionic twin,MC Twin) 由 于受精卵分裂及发育过程的特殊性,可发生诸多复杂的双胎特有并发症,其中以“双胎之一无头-无心畸 形”为临床特点的双胎反向动脉灌注序列症( twin reversed arterial perfusion seque

辉瑞反向收购艾尔建成为世界最大药厂

  今天辉瑞以1600亿美元收购艾尔健,新公司将成为世界最大药厂。这次名义上是艾尔健收购辉瑞,但辉瑞是艾尔健两倍,新公司还保留辉瑞的名字,如果不成交辉瑞得交40多亿美元分手费。所以这叫反向收购,前几年默沙东收购先灵也是这个模式。艾尔健和辉瑞股东分别占有新公司的44%和56%。新辉瑞市值达到3300亿

色谱柱正向使用反向冲洗优势和原理

首先说说柱子能不能反冲的问题,色谱柱到底能不能反冲?如果色谱柱两端的筛板孔径相同反冲是不会有什么问题的,从填料流失的角度来说,粒径为5um,而筛板孔径为2um,这种情况下正冲反冲都不会造成填料的流失;此外,从柱子装填的角度来说,装柱时是按照与柱身箭头相反的方向装填的,与反冲时的液体流路方向相同,装柱

高效液相色谱仪正相与反向的区别

正相和负相取决于固定相的极性高于流动相的极性。如果反流动相的极性高于固定相的极性,则称之为反相。流动相的极性低于固定相的极性,称之为正相。看看色谱柱的固定相填料是什么?正相色谱使用极性固定相(如聚乙二醇、氨基和腈键合相);流动相是相对非极性的疏水溶剂(烷烃,如正己烷和环己烷)。经常加入乙醇、异丙醇、