NCBI使用方法之二：如何查找连续的mRNA、cDNA、蛋白序列
1、进入NCBI主页在search后面选择Gene，在for后面填写需要查找的基因的名字。点击“Go”，出现了很多基因序列，在每个序列的右边还有“Order cDNA clone” 的链接，这些序列中有些序列是跟你的目的基因同名的，有些是别名（Other Aliases）与你的目的基因一致，根据每个序列的介绍认真选择你的目的基因。上图中我需要的IL6是标号为2的序列。2.1、查找cDNA序列2.1.1、点击Order cDNA clone, 出现目的页面如图所示：2.1.2、点击Clone Sequence后面的链接即可得到cDNA序列。点击后如图所示（只抓取其中一部分）：2.2、查找mRNA、蛋白序列回到步骤1点击“Go”之后出现的页面，点击目的基因的名字，出现以下页面(只抓取相关部分)：页面的下半部分，即可以获取mRNA和蛋白序列的部分：找到“NCBI Reference Sequences (RefSeq)”，它......阅读全文
应用mRNA反转录扩增cDNA（RTPCR）
RT-PCR技术可应用于：（1）构建大容量cDNA文库；（2）鉴 定已转录序列是否发生突变及呈现多态性；（3）测定基因表达的强度。实验方法原理酶促催化使RNA反 转 录 为cDNA第一链。 一 条寡聚脱氧核苷酸引物先 与 mRNA杂交，然 后 由RNA依赖的DNA聚合酶催化合成相应互补的cDNA拷贝
应用mRNA反转录扩增cDNA（RTPCR）
实验方法原理 反转录 PCR ( reversetranscriptase'PCR，RT-PCR ) 是一种从 RNA 扩增 cDNA 拷贝的方法。RT-PCR 对于获得与克隆 mRNA 的5'、3' 末端序列和从非常少量的 mRNA 样品构建大容量的 cDNA 文库
如何查找载气不纯的原因？
如何查找载气不纯的原因？可更换载气（氮气）钢瓶，若基线变好，说明是气体纯度不够，若没有变化，则查看载气净化器是否已经失效、过载，可更换为新的气体净化器，若基线短时间内稳定，说明气体净化器过载需更换，如基线噪声没有明显变化，则说明气体管路被污染，需清洗或更换管路等。
如何检测cDNA
一般都可以用电泳检测是否合成适当大小片段的带，如果你是想看它的大小肯定可以，如果想看他碱基有没有出错当然还是测序或者使用探针检测，就是比较麻烦
如何获得cDNA
cDNA的获取方法：1.用亲和层析法得到 mRNA 后，根据 mRNA 分子的 3' 端有 poly (A) 尾结构的原理，用 12~20 个核苷酸长的 oligo 与纯化的 mRNA 混合， oligo （ dT ）会与 poly (A) 结合作为反转录酶的引物，随机引物法合成的产物也是
关于cDNA文库的筛选鉴定的介绍
1．核酸杂交 是最常用，最可靠的方法之一，可大规模地分析文库的克隆子。 1．同源探针：至少含有所需cDNA克隆的一部分确切序列，常用于以一个部分克隆分离cDNA文库中的全长克隆。 2．部分同源探针：探针的序列与所要筛选的cDNA克隆的序列相关但不相同，常用于克隆家族基因。 3．总cDNA
用原位筛选法分离编码序列特异性DNA结合蛋白的cDNA
放射性标记DNA探针的制备l 聚丙烯酰胺凝胶的制备1．按照（三）中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小，200bp左右的片段需要4～5％的凝胶，小于100bp的片段应灌制6～8％的凝胶。 l DN
EST技术及其在基因全长cDNA克隆上的应用策略
第二军医大学细胞生物学教研室；上海200433 何志颖；姚玉成（综述）；胡以平（审校）关键词：EST技术；“电子”基因克隆；生物信息学；基因摘要： 随着人类基因组计划的顺利进行，EST技术被广泛应用于基因识别、绘制基因表达图谱、寻找新基因等研究领域。利用人类基因组研究不断产生的数据，从ESTs即cD
关于双顺反子mRNA的侧翼序列的介绍
侧翼序列包括前导区、尾部区、调控区，调控区又包括启动子、增强子、终止子等： 1、前导区和尾部区 此二区被转录并参与成熟mRNA的组成，但不被翻译，前者位于转录起始点和第一外显子之间，相当于mRNA5’端的非翻译区(5’UT)；后者位于最末外显子和终止子之间，相当于mRNA3’端非翻译区(3&#
一步一步教你使用NCBI数据库资源
相关专题随着ncbi 数据库各种资源的涌现，NCBI已经成为科研工作者必不可少的资料查找，数据分析的工具。那么NCBI数据如何使用，新手入门一步一步教你认识和使用NCBI数据库。一 综合数据库NCBI数据库集美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology
如何提取mrna
1 细胞总RNA的提取1）、6孔板细胞（CNE-2）汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂（Gibco公司） 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5分钟（观察：液体变粘稠,细胞脱壁）.2）、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml E
RACEPCR克隆基因的几点建议
摘 要： RACE是一种快速克隆cDNA末端的方法，目前, 该方法被广泛应用于未知碱基序列基因的克隆，尤其是SMART RACE技术更为人们所青睐。本文总结了我们实验室用SMART RACE技术克隆基因的一些心得体会，希望对用RACE方法克隆基因的同行有些帮助。关键词： RACE; RNA提取;
cDNA文库的构建和筛选—在外界环境压力条件
实验步骤 一、材料 所有化学试剂均为分子生物学级纯度。所用塑料和玻璃制品，包括瓶子和移液器吸头均经高压蒸气灭菌。涉及核酸的操作均需带手套。 1.总 RNA提取 （1）无 RNase 水。加 I mL 焦 炭 酸 二 乙
逆转录PCR(RTPCR)
实验四 逆转录PCR (RT-PCR )【实验目的】1．了解用逆转录PCR 法获取目的基因的原理。2．学习和掌握逆转录PCR 的技术和方法。【实验原理】聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延伸的多个循环来扩增DNA序列。因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，是一个指数增长的
全长cDNA文库的构建—SMART技术
真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3'末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5'端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利
SMART技术
真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3’末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5’端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cD
SMART技术简介
真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3’末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5’端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA
RACE技术的原理和操作
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cD
RACE技术的原理和操作
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA
RACE技术的原理和操作
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA
GenBank数据库概述（二）
FTP GenBank and Daily Updates：1. GenBank普通文件格式 — 参见GenBank记录样本和在GenBank公布通知中的详细描述，下载大多数最近的完全公告和日常积累或非积累更新数据。 2. ASN.1格式 — 摘要句法记号1，国际标准组织（ISO）数据表示格式，下载
安捷伦怎么连续跑两个序列
在新建完整方法下建立一个新的方法即可。首先，新建方法需要在新建完整方法下建立一个新的方法，然后在序列中选择这个新建的方法即可。如果此方法未曾在序列中调用过，可在方法选择下拉菜单中点击浏览，找到想要加入的新方法的文件夹，选择新建立的方法即可将新方法加入到序列中。
简并引物设计方法及原则
相关专题简并引物设计简并引物常用于从已知蛋白到相关核酸分子的研究及用于一组引物扩增一类分子。简并引物设计方法（1）利用NCBI搜索不同物种中同一目的基因的蛋白质或cDNA编码的氨基酸序列 因为密码子的关系，不同的核苷酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的
GenBank数据库概述（一）
1. GenBank属于一个序列数据库的国际合作组织，包括EMBL和DDBJ。是NIH遗传序列数据库，一个所有可以公开获得的DNA序列的注释过的收集。GenBank同日本和欧洲分子生物学实验室的DNA数据库共同构成了国际核酸序列数据库合作。唯一人类基因序列集合（UniGene），人类基因组基因图
基因工程操作技术及原理之基因克隆
1．克隆已知序列的基因根据已知基因的序列设计引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同种属之间，基因编码区序列的同源性高于非编码区的序列。在某种植物的同源基因被克隆的条件下，可先构建eDNA文库或基因组文库，然后以该基因(或部分序列)为探针来筛选目的基因的克隆。2．功能克隆根据基因的产物
基因工程操作技术及原理之基因克隆
1．克隆已知序列的基因 根据已知基因的序列设计引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同种属之间，基因编码区序列的同源性高于非编码区的序列。在某种植物的同源基因被克隆的条件下，可先构建eDNA文库或基因组文库，然后以该基因(或部分序列)为探针来筛选目的基因的克隆。 2．功能克隆 根据基
cDNA文库的构建和筛选
材料许多生物是疾病研究或探索使细胞和机体应对和存活于不同刺激下的分子适应机制的优良模型。 cDNA 文库的构建和随后目的基因的筛选可促使研究者发现在调节和响应某些外部特定环境压力中有重要作用，而在其他体系中可能不表达或者不存在的新基因。确定这些新基因的可读框，进一步分析其编码蛋白质的功能可以开创全新
PCR技术（十七）：用PCR扩增cDNA库中的特异序列
最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库，然后用抗体或 DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因，但建立和筛 选CDNA库是一项非常耗时．费力的工作，而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋 白质序列结构的资料。聚合酶链的反应（PCR）方法可使一种特异DNA扩增
GenBank数据库概述（四）
NCBI站点地图---其他基因组数据介绍：1、 小鼠基因组 1) 小鼠基因组资源向导 ：把从各个中心来的各种小鼠相关的资源整合在一起，包括序列，图谱，和克隆信息以及指向小鼠种系和突变资源的指针。 2) 小鼠基因组测序：小鼠基因组计划的测序进展，HTG序列contigs（可以用大小和染色体号来浏览）由
核酸序列的一般分析流程
1.1 核酸序列的检索 http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/entrez/query.fcgi?db=Nucleotide 1.2 核酸序列的同源性分析 1.2.1 基于NCBI/Blast软件的核酸序列同源性分析 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/b