有机沉淀法总蛋白提取
从植物叶片提取的植物总蛋白不但是家养类动物生长发育的重要营养物质,而且是具有潜力的新一代营养保健食品,因而掌握植物叶蛋白的提取方法至关重要,让我们一起了解这整个实验原理和过程吧。 一、实验目的 熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法,了解其意义及其应用价值。 二、实验原理 植物叶蛋白或称绿色蛋白浓缩物(leaf protein concentration,简称LPC),是从新鲜植物叶片中提取的高质量浓缩蛋白质,不仅是畜禽生长发育和生产畜产品的主要营养物质,而且目前也正成为人类的保健营养理想食品之一。天然蛋白存在于为数甚多的植物体内,对其分离应依据人们的利用目的及提取蛋白含量和品质加以考虑。 天然蛋白质一般在溶液中呈稳定的亲水胶体状态,故LPC 亦称叶蛋白胶。其特点是: (1)水化作用 即蛋白质分子表面附有能有效防止蛋白质分子沉淀析出的水化膜; (2)电荷排斥作用 水化膜外还有电荷层(具阴、阳......阅读全文
有机沉淀法总蛋白提取
从植物叶片提取的植物总蛋白不但是家养类动物生长发育的重要营养物质,而且是具有潜力的新一代营养保健食品,因而掌握植物叶蛋白的提取方法至关重要,让我们一起了解这整个实验原理和过程吧。 一、实验目的 熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法,了解其意义及其应用价值。 二、实验原理 植
有机沉淀法总蛋白提取实用小教程
从植物叶片提取的植物总蛋白不但是家养类动物生长发育的重要营养物质,而且是具有潜力的新一代营养保健食品,因而掌握植物叶蛋白的提取方法至关重要,让我们一起了解这整个实验原理和过程吧。 一、实验目的 熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法,了解其意义及其应用价值。 二
有机溶剂沉淀法浓缩蛋白质实验——有机溶剂沉淀法
实验方法原理将有机溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白质溶液时,和高浓度盐类似产生沉淀,这是因为它们能够降低蛋白质的溶解度。在温度为 10 ℃ 左右时蛋白质在有机溶剂中容易变性,所以在沉淀时必须特别注意冷却溶液和离心转头(0 ℃~4 ℃ 为佳),建议离子强度为 0.05~0.2 mol/L。有机溶剂的浓度按体
有机溶剂沉淀法浓缩蛋白质实验
有机溶剂沉淀法 实验方法原理 将有机溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白质溶液时,和高浓度盐类似产生沉淀,这是因为它们能够降低蛋白质的溶解度。在温度为 10 ℃ 左
有机溶剂沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 将有机溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白质溶液时,和高浓度盐类似产生沉淀,这是因为它们能够降低蛋白质的溶解度。在温度为 10 ℃ 左右时蛋白质在有机溶剂中容易变性,所以在沉淀时必须特别注意冷却溶液和离心转头(0 ℃~4 ℃ 为佳),建议离子强度为 0.05~0.2 mol/L。有机溶剂
蛋白质沉淀方法有机溶剂沉淀法介绍
多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化 有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数,导致具有表面水层的生物大分子脱水,相互聚集,最后析出。 该法优点在于: 1)分辨能力比盐析法高,即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀; 2)沉淀不用脱盐,过滤较为容易; 3)在生化制备中应
有机溶剂沉淀法的影响因素
(一)有机溶剂的选择 在实际生产中,常用的有机溶剂有乙醇、丙酮、异丙醇、氯仿等。丙酮的介电常数小,沉淀能力强;而乙醇无毒,广泛应用于药品生产中。 (二)温度的控制 有机溶剂沉淀时,温度是重要的控制指标。根据沉淀对象不同,采用的温度不同,为防止生物大分子在较高温度时发生变性,一般要求在低温下进行
影响有机溶剂沉淀法的因素分析
(一) 有机溶剂沉淀法的因素— 有机溶剂的选择 在实际生产中,常用的有机溶剂有乙醇、丙酮、异丙醇、氯仿等。丙酮的介电常数小,沉淀能力强;而乙醇无毒,广泛应用于药品生产中。 (二) 有机溶剂沉淀法的因素— 温度的控制 有机溶剂沉淀时,温度是重要的控制指标。根据沉淀对象不同,采用的温度不同,为防止
关于有机溶剂沉淀法的原因分析
有机溶剂沉淀法:利用与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇、丙酮等)能使蛋白质在水中的溶解度显著降低而沉淀的方法,称为有机溶剂沉淀。 有机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因是加入有机溶剂使水溶液的介电常数降低,因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力,促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。有机溶剂引起蛋白质沉淀的另
用酸沉淀法浓缩蛋白质实验——丙酮沉淀法
实验材料含蛋白质的样品试剂、试剂盒丙酮(或其他有机溶剂如乙醇或甲醇)仪器、耗材Eppendorf 管(小塑料离心管)Eppendorf 管离心机(小型台式离心机)混旋器实验步骤1. 加 1 ml冷丙酮(-20℃)至 200 ul 样品溶液,混匀。2. -20℃: 放置 10 min。3. 小型台式离
用酸沉淀法浓缩蛋白质实验——三氯醋酸沉淀法
实验材料含蛋白质的样品试剂、试剂盒100%三氯醋酸(TCA)0.1N NaOH(400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸馏水)实验步骤1. 在 1ml 样品中至少要含有 5mg 蛋白质。加 100 ul 100% 的三氯醋酸(TCA),混匀;2. 将蛋白质在冰浴中沉淀 30 min (或在冷冻
如何提取总蛋白?
大家目前最常用的方法是利用溶液法进行蛋白提取(如 RIPA 裂解液),但是往往会在蛋白质提取中产生两个不同的组分,即 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶性组分。通常 RIPA 不可溶性组分被我们直接丢弃忽略。但是已经有文章证实许多蛋白质存在于被丢弃的 RIPA 不可溶性组分中。也就是说
蛋白沉淀法的优缺点分析
优点: 操作简单,无需特殊装置缺点:1.非特异性的沉淀反应可能使微量的分析物随着基质蛋白质共同沉淀而损失。2.净化效果较弱,检测灵敏度和可靠性低。
表达蛋白检测实验_免疫沉淀法
实验方法原理使用强大的晚期基因启动子表达的重组蛋白可以用放射性氨基酸标记,再用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。当使用早期或晚期基因启动子时,利用标记蛋白免疫沉淀能提高灵敏性和特异性。试剂、试剂盒磷酸缓冲液(PBS)细胞裂解液[35S]蛋氨酸或[35S]半胱氨酸仪器、耗材完全 MEM-5 培养基(含和不含蛋氨
有机物中总氮的测定
在此有机物中N是怎么存在的呢?酰胺或氨基机构的直接用凯式定氮,偶氮或肼需先加Zn粉还原后再消解,杂环氮需先用氢碘酸或红磷还原后再消解,对于含碳量较高的(大于百分之10)的在消解液中加入少量多碳化合物。
组织总蛋白提取原理
关键词:脑组织 目的:熟练进行脑组织蛋白质的提取 背景知识:无 原理:无 具体内容: 脑组织总蛋白质提取方法 1.将低温保存的样本称重。 2.加入裂解液。样本与组织比例=1:3~3.5 w/v,一般为150~170mg:500μl。加入50×Cocktail蛋白酶抑制剂。可利用振荡器、加样器,将组织
组织总蛋白提取原理
关键词:脑组织 目的:熟练进行脑组织蛋白质的提取 背景知识:无 原理:无 具体内容: 脑组织总蛋白质提取方法 1.将低温保存的样本称重。 2.加入裂解液。样本与组织比例=1:3~3.5 w/v,一般为150~170mg:500μl。加入50×Cocktail蛋白酶抑制剂。可利用振荡器、加样器,将组织
脑脊液总蛋白测定实验
实验方法原理磺基水杨酸为生物碱试剂,能沉淀蛋白质,但对白Pr的沉淀能力比球Pr强,加入Na2SO4后,同样浓度的ALB和球Pr呈浊,趋于一致,与标准Pr浓度对比定量测定.试剂、试剂盒磺基水杨酸-硫酸钠试剂Pr标准液实验步骤1. 取4支试管,分别标明标本管,标本空白管标准管,试剂空白管,向标本管和标本
血清总蛋白测定原理
1.双缩脲法 蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用形成的紫红色的反应相似,故称之为双缩脲反应。这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比,与同样处理的蛋白质标准液比较,即可求得蛋白质含量。 2.微量凯氏定
组织总蛋白提取原理
关键词:脑组织 目的:熟练进行脑组织蛋白质的提取 背景知识:无 原理:无 具体内容: 脑组织总蛋白质提取方法 1.将低温保存的样本称重。 2.加入裂解液。样本与组织比例=1:3~3.5 w/v,一般为150~170mg:500μl。加入50×Cocktail蛋白酶抑制剂。可利用振荡器、加样器,将组织
血清总蛋白测定原理
1.双缩脲法蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用形成的紫红色的反应相似,故称之为双缩脲反应。这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比,医学教育网搜|集整理经与同样处理的蛋白质标准液比较,即可求得蛋白质含量。
血清总蛋白测定方法
凯氏定氮法:是血浆总蛋白测定的参考方法。双缩脲比色法:是推荐方法,用于常规检测。原理:蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与Cu2+作用生成紫红色络合物,颜色深浅在一定范围内与蛋白含量成正比。经与同样处理的蛋白标准液比较,即可求得蛋白质含量。优点是清、球蛋白的反应性相近,操作简单,重复性好,干扰物质少,(
脑脊液总蛋白测定实验
实验方法原理 磺基水杨酸为生物碱试剂,能沉淀蛋白质,但对白Pr的沉淀能力比球Pr强,加入Na2SO4后,同样浓度的ALB和球Pr呈浊,趋于一致,与标准Pr浓度对比定量测定.试剂、试剂盒 磺基水杨酸-硫酸钠试剂Pr标准液实验步骤 1. 取4支试管,分别标明标本管,标本空白管标准管,试剂空白管,向标本管
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理通过免疫沉淀,用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物,第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌,以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物,蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说,纯化的蛋白质
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
免疫沉淀法 实验方法原理 通过免疫沉淀,用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物,第二步加入经化学固定
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 通过免疫沉淀,用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物,第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌,以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物,蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说,纯化的蛋
用酸沉淀法浓缩蛋白质实验
三氯醋酸沉淀法 丙酮沉淀法 实验方法原理 实验材料 含蛋白质的样品
用酸沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 实验材料 含蛋白质的样品试剂、试剂盒 100%三氯醋酸(TCA)0.1N NaOH(400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸馏水)实验步骤 1. 在 1ml 样品中至少要含有 5mg 蛋白质。加 100 ul 100% 的三氯醋酸(TCA),混匀;2. 将蛋白质在冰浴中沉淀 30
硫酸铵沉淀法浓缩蛋白质实验——硫酸铵沉淀法
实验方法原理当高浓度盐存在时,蛋白质往往凝聚并析出沉淀。这一技术称为「盐析」。不同的蛋白质在不同浓度的盐中形成沉淀,所以盐析常用于蛋白质的分离纯化。几种因素如 pH 、温度、蛋白质纯度在测定各种蛋白质的盐析时起着重要作用。选择硫酸铵是因为它具有一些优良性质,如盐析的有效性、pH 范围广、溶解度高、溶
怎样检测土壤中总氮和有机碳
土壤样品样品从Lodi附近的PoValley的一个长期试验田中收集,pH为6.2的砂质土壤。比较了5种不同的轮作方式,分别代表了不同的作物强化程度的饲用作物体系:(1)1年连续的双作物轮作,意大利黑麦草(loliummultiflorumLam.) 青贮玉米(zeamaysL.);(2)3年轮作,意