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方案20.1 冷冻细胞 实验方法原理 细胞生长至对数晚期，以培养基制备高浓度细胞悬液，加入细胞保护剂，等份转移至冻存管中，缓慢冷冻（图 20.8）。 细胞用胰酶消化后，加入含有细胞保护剂的培养基，分装至冻存管中，然后将其夹到铝条上，用纸质管包裹，放入隔热储存管中。将储存管及其内容物于-70℃或-80℃存放4h或过夜，最后将含有冻存管的纸质管置入液氮罐的储存管中。 实验步骤 材料无菌准备冻存的细胞（如果是贴壁细胞：配制无菌PBSA和0.25%的粗胰蛋白酶）生长培养基（血清能促进冷冻后细胞的存活；血清浓度可达5......阅读全文
复苏技术1. 细胞复苏的原则在实际操作中，冻存细胞要进行复苏，再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。2. 细胞复苏的主要操作步骤（1）佩戴眼镜和手套，从液氮罐中取出安瓿或冷冻管。（2）迅速放入38℃水浴中，并不时摇动
1 储存温度 生物样本的长期储存通常使用尽可能低的温度来降低样本内的生化反应提高样本内各种成分的稳定性。生物大分子、细胞、组织和器官的常用储存温度有-80℃(超低温冰箱), -140℃(液氮气相或深冷冰箱)以及-196℃(液氮液相)，温度越低样本的稳定保存时间越长。0～-60℃是水的结晶温度，
细胞冷冻离心机分类方法有多种。1、按分离目的可分：实验室细胞冷冻离心机和工业细胞冷冻离心机。2、按结构可分：细胞台式冷冻离心机和细胞立式冷冻离心机。3、按容量可分：细胞微量冷冻离心机和细胞大容量冷冻离心机。4、按产地可分：国产细胞冷冻离心机和进口细胞冷冻离心机。5、按速度可分：细胞低速冷冻离心机和细
程序降温/分步降温（programmed freezing/stepwise freezing） 通过控制样本的降温速度可以尽量减少冰晶损伤和溶液损伤。降温速度的控制可通过在不同的温度下分阶段降温（stepwise freezing）或者程序控制降温（pr
低温保护剂诸如二甲基亚砜（DMSO）、甘油和丙二醇等已经被广泛用于冷冻保存细胞和组织。DMSO是细胞保存中最常用的渗透型冷冻剂，但它对细胞也存在一定的毒性，常温下能使胞内蛋白变性。DMSO导致的不良反应在动物实验中已被证实。在一些临床治疗案例中，注射了含有DMSO的造血干细胞的病人表现出恶心、头痛、
细胞培养所用玻璃及塑料制品的清洗与消毒 清洗 在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感。微生物产品附带杂物，上次细胞残留物及非营养成分的化学物质，均能影响培养细胞的生长。因此对新使用玻璃器 皿和重新使用的培养器皿都要严格彻底的清洗，且要根据器皿的组成材料不同，选择不同 的清
消化液：分离组织和分散细胞。常用的有胰蛋白酶和二乙胺四乙酸二钠 (EDTA) 两种溶液。可以 单独使用，也可以混合使用。（1）胰蛋白酶溶液胰蛋白酶（简称胰酶）是一种黄白色粉末，易潮解，应放置冷暗干燥处保存。目前应用的胰蛋白酶主要来自牛或猪的胰腺。胰酶的主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞相
细胞台式冷冻离心机分类方法有多种。1、按速度可分：细胞台式冷冻低速离心机和细胞台式冷冻高速离心机。2、按分离规模可分：小型细胞台式冷冻离心机和大型细胞台式冷冻离心机。3、按分离目的可分：细胞化验室台式冷冻离心机和细胞工业台式冷冻离心机。4、按分离功能可分：分析型细胞台式冷冻离心机和制备型细胞台式冷冻
由于体外受精-胚胎移植的高昂费用、有限成功率和多余胚胎的存在，以及政策和伦理对胚胎移植数目的限制，从最大限度地保护患者利益出发，应尽可能提高每一取卵周期的临床妊娠率，因而胚胎冷冻技术极为重要。胚胎冷冻造成细胞损伤机制胚胎冷冻对活组织和细胞进行冷冻保存时，冷冻过程将可能对细胞造成损伤。主要的损伤机制包
一、细胞冷冻保存 1、材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO（Sigma D-2650）、无菌塑料冷冻保存管（Nalgene 5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球计数盘与盖玻片、等
细胞培养所用玻璃及塑料制品的清洗与消毒清洗在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感。微生物产品附带杂物，上次细胞残留物及非营养成分的化学物质，均能影响培养细胞的生长。因此对新使用玻璃器 皿和重新使用的培养器皿都要严格彻底的清洗，且要根据器皿的组成材料不同，选择不同 的清洗方法。玻璃器皿的清
一、细胞冷冻保存1、材料：生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO（Sigma D-2650）、无菌塑料冷冻保存管（Nalgene 5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球计数盘与盖玻片、等速降温机（KRYO10SeriesI
14、DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO 等级， 必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)， 其本身即为无菌状况， 第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于4°C， 避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质，
1 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？&
一、细胞冷冻保存1、材料：生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO（Sigma D-2650）、无菌塑料冷冻保存管（Nalgene 5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球计数盘与盖玻片、等速降温机（KRYO10S
大容量冷冻细胞离心机的类型有多种。1、按分离目的可分：实验室大容量冷冻细胞离心机和工业大容量冷冻细胞离心机。2、按分离功能可分：大容量冷冻细胞分析离心机和大容量冷冻细胞制备离心机。3、按结构可分：台式大容量冷冻细胞离心机和落地式大容量冷冻细胞离心机。4、按转子结构可分：水平转子大容量冷冻细胞离心机和
细胞台式冷冻离心机分类方法有多种。1、按速度可分：细胞台式冷冻低速离心机和细胞台式冷冻高速离心机。2、按分离规模可分：小型细胞台式冷冻离心机和大型细胞台式冷冻离心机。3、按分离目的可分：细胞化验室台式冷冻离心机和细胞工业台式冷冻离心机。4、按分离功能可分：分析型细胞台式冷冻离心机和制备型细胞台式冷冻
细胞株(系)的使用，为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的，长期连续传代的细胞，不仅消耗大量的人力和物力，而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化，因而细胞失去原有的遗传特性，有时还会由于细胞污染而造成传代中断，种子丢失。因此，在实际工作中常需冻存一定数量的细胞，以备替换使用。
含DMSO的冻存液DMSO是最常用的渗透性冷冻保护剂，广泛应用于细胞的冷冻保存。在细胞水平，DMSO除了是一种DNA致畸因子外，还可渗入细胞内，分子中S=O键可能与细胞内蛋白发生化学反应，致使蛋白变性。因此，有些细胞和组织细胞对DMSO敏感，使用含DMSO的细胞冷冻液会降低细胞复苏后活性，进而影响细
16 细胞欲冷冻保存时， 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial， 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。17 应如何避免细胞污染?细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室
近日，明星徐静蕾接受专访时表示，她早在2013年就在美国冷冻了自己的9颗卵子，从而将冰冻卵子的话题再一次推进大众视野，引发了社会对“冻卵“的关注和讨论。 八月十一日，发表在国际著名医学期刊《JAMA》（美国医学会杂志）的一项研究表明，相比较使用新鲜的卵母细胞（卵子），用2013年收集冷藏（冻）
大容量冷冻细胞专用离心机类型有多种。1、按分离目的可分：化验室大容量冷冻细胞专用离心机和工业大容量冷冻细胞专用离心机。2、按分离功能可分：分析型大容量冷冻细胞专用离心机和生产型大容量冷冻细胞专用离心机。3、按分离方法可分：大容量冷冻细胞专用浓缩离心机和大容量冷冻细胞专用澄清离心机。4、按速度可分：低
大容量冷冻细胞专用离心机类型有多种。1、按分离目的可分：化验室大容量冷冻细胞专用离心机和工业大容量冷冻细胞专用离心机。2、按分离功能可分：分析型大容量冷冻细胞专用离心机和生产型大容量冷冻细胞专用离心机。3、按分离方法可分：大容量冷冻细胞专用浓缩离心机和大容量冷冻细胞专用澄清离心机。4、按速度可分：低
大容量冷冻细胞专用离心机类型有多种。1、按分离目的可分：化验室大容量冷冻细胞专用离心机和工业大容量冷冻细胞专用离心机。2、按分离功能可分：分析型大容量冷冻细胞专用离心机和生产型大容量冷冻细胞专用离心机。3、按分离方法可分：大容量冷冻细胞专用浓缩离心机和大容量冷冻细胞专用澄清离心机。4、按速度可分：低
44、细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15 ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附
11 欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速?欲回收动物细胞， 其离心速率一般为300xg (约1,000rpm)，5 - 10 分钟， 过高之转速， 将造成细胞死亡。12 细胞之接种密度为何?依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生
26、PFHM-II 和HYBRIDOMA-SFM之间有什么差别？ PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白质的单克隆抗体生产培养基。如果作为杂交瘤生产培养基使用，PFHM-II可能需要补充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM即是杂交瘤生产培养
日本的一个研究小组首次证明了在没有冷冻保护剂（CPA）的情况下保存冷冻动物细胞。为了使细胞存活，所有传统的冷冻方法都需要添加CPA，但CPA可能具有潜在毒性，并与细胞损伤和死亡有关。 新方法只依赖于超快速冷却——或者说真正的快速冷冻——在冷冻过程中保持细胞和重要的生命物质。没有CPA的安全冷冻
一、细胞冷冻保存1、材料：生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO（Sigma D-2650）、无菌塑料冷冻保存管（Nalgene 5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球计数盘与盖玻片、等速降温机（KRYO10SeriesII）。2
细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少人力、经费，减少污染，减少细胞生物学特性变化。一、冻存和复苏的原则：慢冻快融当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相