NatNeurosci|复旦马兰组解密可卡因记忆中的印迹细胞

Southern印迹技术

实验原理:Southern印迹是将DNA片断从电泳凝胶上直接转移至膜支持物（如硝酸纤维素膜、尼龙膜）上，使DNA片断固定的技术。先将DNA经限制性内切酶消化成一系列片段，进行琼脂糖凝胶电泳，各片段因分子量不同而彼此分开，然后经碱处理凝胶，使DNA的片段被变性、中和并通过毛细作用在高盐缓冲液中在原位将

Southern－印迹实验

实验方法原理 本方案是专门为将琼脂糖凝胶印迹至不带电荷或带正电荷的尼龙膜上而设计的，稍作修改后同样可用于硝酸纤维素膜方法。实验材料 DNA试剂、试剂盒 HClNaClTrisNaOHSSC溴化乙锭仪器、耗材 电泳仪紫外透射仪实验步骤 一、向上毛细管转移法的转移叠层系统：：图一、向上毛细管转移法的转移

Southern－印迹实验

印迹法 碱性缓冲液法 向下毛细管转移法 电转印法             实验方法原理 本方案是专门为将琼脂糖凝胶印迹至不带电荷或带正电荷的尼龙膜上而设

Western印迹法

这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。仪器：高压锅、玻璃匀浆

蛋白质免疫印迹悬浮细胞蛋白提取简介

　　1）所需器材：制冰机、标记笔、两套1.5ml EP管（最好高温高压处理）、两个大冰盒、长满细胞的培养瓶、10ml离心管、手套、移液枪、吸头（最好高温高压处理）、滤纸、保存于4℃冰箱的PBS（最好高温高压处理）、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一种蛋白酶抑制剂，剧毒）、离心机、烧杯、4×SD

Northern印迹和总RNA杂交实验——Northern印迹分析

试剂、试剂盒甲醛凝胶溶液RNA 电泳缓冲液仪器、耗材凝胶模梳齿凝胶用具实验步骤1. 用肥皂和水彻底清洗凝胶模，梳齿和凝胶用具。2. 准备甲醛凝胶溶液。甲醛凝胶溶液（300 ml 1％ 琼脂糖凝胶）：琼脂糖，3.0 g10x RNA 电泳缓冲液，30 ml     Milli-Q 或用玻璃器皿蒸馏过的

Westernblotting－蛋白质印迹（免疫印迹）

蛋白质免疫印迹实验悬浮细胞蛋白提取相关

　　悬浮细胞蛋白提取　　1）所需器材：制冰机、标记笔、两套1.5ml EP管（最好高温高压处理）、两个大冰盒、长满细胞的培养瓶、10ml离心管、手套、移液枪、吸头（最好高温高压处理）、滤纸、保存于4℃冰箱的PBS（最好高温高压处理）、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一种蛋白酶抑制剂，剧毒）、离

蛋白质免疫印迹实验贴壁细胞蛋白提取

　　贴壁细胞蛋白提取（细胞蛋白含量一般约为1x10-9mg/细胞）　　1）所需器材：制冰机、细胞刮刀、标记笔、两套1.5ml EP管（最好高温高压处理）、两个大冰盒、手套、长满细胞的培养瓶、保存于4℃冰箱的PBS、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一种蛋白酶抑制剂，剧毒）、移液枪、吸头（最好高温

家乐福蛋糕成分标注现可卡因－向顾客致歉

　　法国连锁零售商家乐福阿根廷分公司6日因一家蛋糕供应商在食品成分中标注“12克可卡因”向顾客致歉。 　　家乐福在阿根廷开设500多家店面。这家企业说，为这个“低俗的玩笑”抱歉。法新社报道，这显然是蛋糕供应商的一名员工所为。 　　家乐福发表声明说：“我们家乐福阿根廷公司想让顾客安心，家乐福品牌蛋

免疫检测法检测可卡因的特点介绍

　　免疫检测法（mimunoassay）具有操作简便、高效、灵敏、特异、适合大规模检测等优点,但要采用这种,必须获得具有抗原活性的可卡因全抗原。通常分子量低于1000的物质不具有免疫原性,进入机体不能产生抗体,必须与载体蛋白偶联形成全抗原,方能具有免疫原性。载体蛋白中含有的活性基团主要有羧基、氨基、

蛋白质Rac1触发可卡因成瘾

　　纽约西奈山医疗中心一项新的研究表明：反复接触可卡因会降低大脑中枢系统的正常运作所必需的蛋白质的活性，从而提高了中枢对可卡因的依赖性，从而导致成瘾发生。相关研究论文发表在4月22日的Nature Neuroscience杂志上，该研究揭示了可卡因是如何改变小鼠模型中大脑神经元中枢形状和大小的。

质检总局再次通报－国产红牛均未检出可卡因

　　国家质检总局昨天再次通报，对海南红牛饮料有限公司生产的5个批次的红牛维生素功能饮料进行了检测，均未检出可卡因。 　　此前，按照质检总局的部署，北京市、湖北省分别对红牛维他命饮料有限公司、红牛维他命饮料(湖北)有限公司生产的红牛饮料进行了可卡因含量专项检测，均未检出可卡因。至此，质检总局进出口食

RO5263397：治疗可卡因成瘾的潜在药物

　　可卡因（Cocaine）又称为古柯碱，是一种由古柯叶中提练出的莨菪烷型生物碱，分子式C17H21NO4。它是最强的天然中枢兴奋剂，其化学名为苯甲基芽子碱（化学结构式见图1所示），国际理论与应用化学联合会（IUPAC ）对其系统命名为methyl (1R, 2R, 3S, 5S)-3 -(benz

关于常见的可卡因类及制剂的介绍

　　（1）古柯叶（古柯灌木的叶子,是提炼可卡因的原料,也是南美地区含微量可卡因饮品食品来源）,南美地区千年历史已经证明咀嚼古柯叶不会上瘾,因为叶子中可卡因含量极低,按秘鲁库斯科的风俗折算每天摄入量不超过0.5mg；　　（2）可卡膏（称为basulea,一种灰白、奶白或米色的粉状物,颗粒较粗,为潮湿的

细胞系的多位点DNA指纹检测——细胞系－Southern－印迹－DNA－制备

实验方法原理细胞中提取的 DNA 经限制性酶消化，利用 Southern 印迹技术将消化产物固定在尼龙膜上 [ Ausubel et al.，1996，2002 ]，与来自 M 13 噬菌体的标记 DNA 进行杂交。实验材料D-PBSHinfI酶及其缓冲液琼脂糖凝胶5×TBE储存液EDTA二钠盐6×

免疫印迹定义

　　免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏

免疫印迹法

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被

免疫印迹优点

　　免疫印迹法是一项分析抗原、抗体的技术。它具有下列优点：　　1、 湿的固定化基质膜柔韧, 易于操作；　　2 、固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近, 不会象凝胶那样受孔径阻隔；　　3、 免疫印迹分析只需少量试剂；　　4、 孵育、洗涤的时间明显减短；　　5、可同时制作多个拷贝, 用于多种分析

Northern－印迹分析实验

            试剂、试剂盒 琼脂糖凝胶 菌落裂解缓冲液 蒸馏水 甲醛 甲酰胺预杂交 杂交液 HotPrime cDNA Labeling Kit

Northern－印迹分析实验

试剂、试剂盒 琼脂糖凝胶菌落裂解缓冲液蒸馏水甲醛甲酰胺预杂交 杂交液HotPrime cDNA Labeling Kit矿物油MOPS 缓冲液MOPS乙酸钠EDTAPCR 缓冲液SSCNaClSDSNaClNaH2PO4[a-32P]dATPLgh Rgh 引物鲑鱼精 DNATaq DNA

Northern－印迹分析实验

为了确认所选择 cDNA 确实是差异表达的，建议使用 Northern 印迹分析，而不要用其他的确认技术，比如反向 Northern 杂交（Zhangetal.1996) 或定量 RT-PCR。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒琼脂糖凝胶菌落裂解缓冲液蒸馏水甲

Southern印迹杂交

 实验原理核酸分子杂交技术是分子生物学领域中zui常用的具体方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图谱。但为

Western免疫印迹

 Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。一、原理    与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝

Western－免疫印迹

实验概要Western免疫印迹（Western   Blotting）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但Western   Blot采用的是聚丙烯

印迹膜的用途

中文名称印迹膜英文名称blotting membrane定　　义在印迹时接受被转移样品的膜介质。如硝酸纤维素膜、尼龙膜等。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）

RNA印迹杂交

RNA印迹杂交1）       Northern印迹的制备预备：1．按下述步骤，每泳道加10～20μg总RNA或0.5～1μg poly(A)+RNA进行甲醛/琼脂糖凝胶电泳，将凝胶放在紫外线透照仪上，旁边置一标尺进行拍照。a. 总RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃温育5min：总RNA（1

RNA印迹(Northern－Blot)

【实验原理】将RNA变性及电泳分离后，转移到固相支持物上，用于与DNA探针杂交以鉴定其中特定 RNA分子的大小与含量。基本原理与Southern印迹相同，但RNA变性方法与DNA不同，不能用碱变性，因为碱会导致RNA的水解。Northern印迹主要用于组织细胞靶基因表达水平的研究以及对同一组织细胞的

蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）——Western印迹法

实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒裂解液PBSG 250考马斯亮蓝溶液NaClSDS上样缓冲液电泳缓冲液转移缓冲液丽春红染液封闭液TBSTTBS洗脱抗体缓冲液显影液定影液抗体化学发光试剂仪器、耗材高压锅玻璃匀浆器高速离心机分光光度仪-20℃低温冰箱垂直板电泳转移装置恒温水浴摇床多用脱色摇床实验步骤一、操

outhern印迹及基因组DNA杂交技术实验——Southern－印迹

实验方法原理硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强，当电泳后凝胶经过DNA变性处理，覆以上述滤膜，再于其上方压上多层干燥的吸水纸，借助它对深盐溶液的上吸作用，凝胶上的单链DNA将转移到滤膜上。转移是原位的，即DNA片段的位置保持不变。转移结束后，经过80℃烘烤的DNA，将原位地固定于膜上。实