淀粉酶的诱导、提取和活性测定实验
实验方法原理大麦(或小麦)种子萌发时,种胚产生GA3扩散到胚乳的糊粉层细胞(被称为GA3反应的“靶细胞”),刺激其合成或激活α-淀粉酶,然后进入胚乳,使贮藏的淀粉被水解为还原酶,因此,无胚种子不能释放GA3,也不能形成与激活α-淀粉酶。外加的GA3也可代替胚的释放作用,从而诱导α-淀粉酶的合成。在一定范围内,由去胚的吸胀大麦产生的还原糖量,与外加GA3浓度的对数成正比,由此可说明GA3对α-淀粉酶的诱导形成。实验步骤一、 材料与用品1. 材料:大麦(或小麦)种子;2. 仪器:721分光光度计;超净工作台(或灭菌箱);温箱;摇床;恒温水浴;高压灭菌锅;棉塞;牛皮纸;刀片;镊子;烧杯;培养皿;试管;移液管;玻璃棒。3. 药品:10-3mol/L乙酸缓冲液(pH 4.8)[每ml含链霉素硫酸盐1mg(或氯霉素40μg)]. 10 mg/L GA310 mg,加少量95%乙醇溶解,用蒸馏水定容至1000ml. 淀粉溶液(称取可溶......阅读全文
α淀粉酶测定方法的比较
α-淀粉酶(EC3.2.1.1)测定方法很多,尚难以标准化。碘淀粉比色法、因底物和产物不确定,线性差而不能满足准确性要求。最近IFCC批准了用亚乙基封闭的G7-pNP作底物的酶偶联法(EPS法)作为临时推荐方法,但该法需工具酶,延迟时间长,还不是最理想的参考方法。使用2-氯-4-硝基苯
α淀粉酶测定方法的比较
α-淀粉酶(EC3.2.1.1)测定方法很多,尚难以标准化。碘淀粉比色法、因底物和产物不确定,线性差而不能满足准确性要求。最近IFCC批准了用亚乙基封闭的G7-pNP作底物的酶偶联法(EPS法)作为临时推荐方法,但该法需工具酶,延迟时间长,还不是最理想的参考方法。使用2-氯-4-硝基苯-麦牙三糖
淀粉酶(AMY)测定的简介
淀粉酶(AMY)测定:淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称,通常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料,由于淀粉酶的高效性及专一性,酶退浆的退浆率高,退浆快,污染少,产品比酸法、碱法更柔软,且不损伤纤维。淀粉酶的种类很多,根据织物不同,设备组合不同,工艺流程也不同,目前所用的退浆方法有浸渍法、堆置法、卷
α淀粉酶测定方法的比较
α-淀粉酶(EC3.2.1.1)测定方法很多,尚难以标准化。碘淀粉比色法、因底物和产物不确定,线性差而不能满足准确性要求。最近IFCC批准了用亚乙基封闭的G7-pNP作底物的酶偶联法(EPS法)作为临时推荐方法,但该法需工具酶,延迟时间长,还不是最理想的参考方法。使用2-氯-4-硝基苯-麦牙
尿淀粉酶的测定意义
淀粉酶(AMY)主要来源于胰腺和腮腺,人血清淀粉酶易通过肾小球滤膜而出现于尿中。测定尿液淀粉酶的临床意义主要有:1.急性胰腺炎:尿液淀粉酶活性一般于发病12~24h开始增高,比血清淀粉酶迟6~10h,但由于肾脏对淀粉酶的清除率增强,尿淀粉酶活性可高于血清一倍以上,多数在持续3~10天后恢复正常。2.
α淀粉酶测定方法的比较
α-淀粉酶(EC3.2.1.1)测定方法很多,尚难以标准化。碘淀粉比色法、因底物和产物不确定,线性差而不能满足准确性要求。最近IFCC批准了用亚乙基封闭的G7-pNP作底物的酶偶联法(EPS法)作为临时推荐方法,但该法需工具酶,延迟时间长,还不是最理想的参考方法。使用2-氯-4-硝基苯-
酶活性测定条件的选择和限定2
曲线A:V对pH作图曲线B:酶先在pH5及pH8预孵育后,在pH6.8测活性 氢离子可以通过多种途径影响酶催化反应。如在脱氢酶反应中往往需要氢离子参加,也可能产生氢离子,从理论上可以将氢离子看成是该反应的底物和产物之一。此外,当pH变化时,可影响到底物、酶、酶-底物复合物的解离状态和构型,甚至还
血浆因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性测定原理
原理:一期法是将待测血浆分别与乏FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ基质血浆混合,进行APTT测定。将正常人混合血浆与乏因子血浆混合,测定APTT,作出标准曲线。从各自的标准曲线中分别计算出受检血浆中FⅧ:C、FⅨ:C、FⅪ:C和FⅫ:C相当于正常人的百分率(%)。
质粒DNA的大量提取和纯化实验
实验材料 细菌试剂、试剂盒 STE酚 氯仿NaClPEG乙醇仪器、耗材 离心管离心机抽干机实验步骤 1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的细菌培养液250 ml,4 ℃下5000 g离心15分钟,弃上清,将离心管倒置使上清液全部流尽。2、将细菌沉淀重新悬浮于50 ml用冰预冷的STE中(此步可省略
质粒DNA的大量提取和纯化实验
碱法 实验材料 细菌 试剂、试剂盒 ST
胰岛素受体的溶解及活性测定实验
试剂、试剂盒 纯化的鼠肝质膜牛血清白蛋白 [125I] 胰岛素猪胰岛素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 B 溶液 C 结合缓冲液仪器、耗材 Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管实验步骤 材料与设备纯化的鼠肝质膜(得自实验 1)Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管牛血清白蛋白(BSA,1%)[125
由歧化作用测定的-PDHC-总活性实验
实验方法原理 实验材料 酶样品试剂、试剂盒 磷酸钾MgCl2丙酮酸二磷酸硫胺二硫赤藓糖醇辅酶 ANAD+磷酸转乙酰酶乳酸脱氢酶羟胺FeCl3 试剂仪器、耗材 分光光度计实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」0.98 ml 实验混合物0.02 ml 酶样品30 ℃ 培养 15 min 后将样品放于冰
胰岛素受体的溶解及活性测定实验
试剂、试剂盒纯化的鼠肝质膜牛血清白蛋白[125I] 胰岛素猪胰岛素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 B溶液 C结合缓冲液仪器、耗材Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管实验步骤材料与设备纯化的鼠肝质膜(得自实验 1)Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管牛血清白蛋白(BSA,1%)[125I] 胰岛素
由歧化作用测定的-PDHC-总活性实验
实验材料酶样品试剂、试剂盒磷酸钾MgCl2丙酮酸二磷酸硫胺二硫赤藓糖醇辅酶 ANAD+磷酸转乙酰酶乳酸脱氢酶羟胺FeCl3 试剂仪器、耗材分光光度计实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」0.98 ml 实验混合物0.02 ml 酶样品30 ℃ 培养 15 min 后将样品放于冰中,然后加入 0.2
胰岛素受体的溶解及活性测定实验
胰岛素受体的溶解及活性测定实验 试剂、试剂盒 纯化的鼠肝质膜 牛血清白蛋白 [125I]
由歧化作用测定的-PDHC-总活性实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 酶样品
淀粉酶(AMY)测定方法
(1)碘-淀粉比色法测定。 (2)对-硝基苯麦芽七糖苷法。 PNP(对硝基苯酚)的生成引起405nm处吸光度的上升,上升速率与AMY的活力成正比。 (3)2-氯-4-硝基苯麦芽三糖苷法。
淀粉酶(AMY)测定方法
(1)碘-淀粉比色法测定。(2)对-硝基苯麦芽七糖苷法。PNP(对硝基苯酚)的生成引起405nm处吸光度的上升,上升速率与AMY的活力成正比。(3)2-氯-4-硝基苯麦芽三糖苷法。
淀粉酶的固态发酵实验
实验方法原理 淀粉酶有催化淀粉水解的作用,能从淀粉分子非还原性末端开始,分解a-1,4-葡萄糖苷键生成葡萄糖。在碱性条件下,还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热,3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色深
酶活性和质量测定方法及其评价
酶测定包括酶量测定和酶活性测定。酶在体液中含量极微,因此临床上大都采用酶活性测定,以酶活性间接表示酶量。酶活性的概念:酶活性指酶催化反应的能力即酶促反应速度。反应速度是指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量。1.酶活性测定方法(1)按反应时间分类法1)定时法:(两点法) 通过测定酶反应开
酶活性和质量测定方法及其评价
1.酶活性测定方法 (1)按反应时间分类法:20世纪50年代以前大都使用固定时间法。这种方法是以酶催化反应的平均速度来计算酶的活性,现多已不用。20世纪50年代中期开始采用连续监测法。这种方法在自动生化分析仪上完成,可以测酶反应的初速度,其结果比固定时间法准确,在高浓度标本尤为明显,但本法也受
血浆因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ的促凝活性测定的原理
原理:将待测血浆分别与缺乏FⅡ、FⅤ、FⅦ和FⅩ基质血浆混合,进行PT测定。将正常人混合血浆与乏因子血浆混合,测定PT,作出标准曲线。从各自的标准曲线中分别计算出受检血浆中FⅡ:C、FⅤ:C、FⅦ:C和FⅩ:C相当于正常人的百分率(%)。
核酸-活性多肽及递质的提取方法
核酸分为两大类:一类为核糖核酸(RNA),另一类为脱氧核糖核酸(DND)。核酸的分子量极大,人数万致亿万。核酸是两性化合物,在一定的等电点。溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有机溶剂。细胞内的核酸常和蛋白质结合成核蛋白。核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白在不同浓度的电解质溶液中的溶解度有显著区别,有一定浓
核酸-活性多肽及递质的提取方法
核酸分为两大类:一类为核糖核酸(RNA),另一类为脱氧核糖核酸(DND)。核酸的分子量极大,人数万致亿万。核酸是两性化合物,在一定的等电点。溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有机溶剂。细胞内的核酸常和蛋白质结合成核蛋白。核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白在不同浓度的电解质溶液中的溶解度有显著区别,有一定
蒲公英提取物的活性成分介绍
蒲公英全草含蒲公英甾醇、胆碱、菊糖、果胶等。根中含蒲公英醇、蒲公英赛醇、ψ-葡公英甾醇、蒲公英甾醇、β-香树脂醇、豆甾醇、β-谷甾醇、胆碱、有机酸、果糖、蔗糖、葡萄糖、葡萄糖甙以及树脂、橡胶等。叶含叶黄素、蝴蝶梅黄素、叶绿醌、。花中含山金车二醇、叶黄素和毛莨黄素。花粉中含β-谷甾醇、5z-豆甾-
常山提取物的活性成分介绍
常山含有效成分黄常山碱,简称常山碱,主要为黄常山碱甲、乙及丙,三者为互变异构体。还含黄常山定以及4-喹唑酮、伞形花内酯等。从根及叶中分离出的退热碱和异退热碱,相应地就是黄常山碱乙和黄常山碱甲。叶含生物碱总置约0.5%,其中黄常山碱的含量比根中的多10~20倍。另含少量三甲胺。根含总生物碱约0.1
白芍提取物的活性成分介绍
根含芍药甙(paeoniflorin)、氧化芍药甙(oxypaeoniflorin)、芍药内酯甙(albiflorin)、苯甲酰芍药甙(benzoylpaeoniflorin)、芍药甙元酮(paeoniflorigenone)、丹皮酚原甙(paeonolide)、丹皮酚(paeonol);尚含苯
白芸豆提取物的活性介绍
白芸豆中含有的芸豆蛋白是一种天然的淀粉酶抑制剂,其效果优于小麦及别的农作物中提取的,其主要用于治疗肥胖症和糖尿。 白芸豆提取物的功效成份菜豆素(又名芸豆蛋白,英文Phaseolin)是一种天然的α-淀粉酶抑制剂(α-amylase inhibitor)。 淀粉酶抑制剂是一种纯天然生物活性物质
转氨酶活性的测定
实验概要本实验介绍了转氨酶活性测定的原理及方法等。实验原理转氨酶是体内重要的一类酶。转氨酶催化α–氨基酸的α–氨基与α–酮酸的α–酮基之间的相互转化,从而生成一种新的氨基酸与一种新的酮酸,这种作用称为转氨基作用。它在生物体内蛋白质的合成、分解等中间代谢过程中,在糖、脂及蛋白质三大物质代谢的相互联系、
转氨酶活性的测定
(一)原理转氨酶是体内重要的一类酶。转氨酶催化α–氨基酸的α–氨基与α–酮酸的α–酮基之间的相互转化,从而生成一种新的氨基酸与一种新的酮酸,这种作用称为转氨基作用。它在生物体内蛋白质的合成、分解等中间代谢过程中,在糖、脂及蛋白质三大物质代谢的相互联系、相互制约及相互转变上都起着很重要的作用。在动物机