影响凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素
影响凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素有样品的物理性质、支持物介质、电场强度和缓冲液等。一、样品的物理性质:1、分子大小:线状双链DNA分子长度(碱基对数目bp)的常用对数与迁移距离成反比,以此来测定DNA片段(线性双链)的分子量准确且方便。当DNA分子大小超过20kb时,普通琼脂糖凝胶很难将它们分开,此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小。因此,用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时,分子大小不宜超过20kb。2、分子的空间构型:即使分子量相同,而空间构型不同,迁移率也不同。DNA分子的空间构型对迁移率的影响很大,如DNA分子迁移率的大小顺序为共价闭环DNA>直线DNA>开环双链DNA。3、带电量:核酸分子是两性解离分子,当pH = 3.5时,碱基上的氨基解离,而三个磷酸基团中只有一个磷酸解离,所以核酸分子带正电,在电场中向负极泳动。当pH = 8~8.3时,碱基几乎不解离,而磷酸基团解离,所以核酸分子带负电,在电场中向正极泳动。不同核酸分子的......阅读全文
影响凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素
影响凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素有样品的物理性质、支持物介质、电场强度和缓冲液等。一、样品的物理性质:1、分子大小:线状双链DNA分子长度(碱基对数目bp)的常用对数与迁移距离成反比,以此来测定DNA片段(线性双链)的分子量准确且方便。当DNA分子大小超过20kb时,普通琼脂糖凝胶很难将它们分开,
影响琼脂糖凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素
影响琼脂糖凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素有DNA分子大小、DNA构象、凝胶浓度、琼脂糖种类、电泳缓冲液、嵌入染料的存在和使用电压等。一、DNA分子大小:DNA分子大小迁移速度与logN成反比(N为碱基对数目)。分子越大,摩擦力越大,同时大分子通过凝胶孔的效率低于较小的分子,所以大分子的迁移速度慢。
影响电泳迁移率的因素
由电泳迁移率的公式可以看出,影响电泳分离的因素很多,下面简单讨论一些主要的影响因素:1. 待分离生物大分子的性质待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说,分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳迁移速度越快。2. 缓冲液的性质缓冲液的 pH 值会影响待分
影响电泳迁移率的因素
影响电泳迁移率的外界因素:①电场强度 ②溶液的pH值 ③溶液的离子强度 ④电渗现象 影响电泳迁移率的内在因素:①质点所带净电荷的量 ②质点的大小和形状
影响电泳迁移率的因素介绍
由电泳迁移率的公式可以看出,影响电泳分离的因素很多,下面简单讨论一些主要的影响因素: 1. 待分离生物大分子的性质 待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说,分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳迁移速度越快。 2. 缓冲液的性质
影响电泳迁移率的因素有哪些?
⒈电场强度 电场强度是指单位长度(cm)的电位降,也称电势梯度。如以滤纸作支持物,其两端浸入到电极液中,电极液与滤纸交界面的纸长为 20cm,测得的电位降为 200V,那么电场强度为200V/20cm=10V/cm。当电压在500V以下,电场强度在 2-10v/cm 时为常压电泳。电压在 500V
凝胶电泳仪影响因素
琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定: 1、 DNA的分子大小: 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在
凝胶电泳仪的影响因素
琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定: 1、 DNA的分子大小: 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难
影响DNA凝胶电泳结果的因素
电流强度与释放出热量(Q)之间的关系可列成如下公式,则越慢;t为电泳时间.因此、焦耳热.在电场作用下影响电泳泳动度的因素:1.反之,则降低颗粒的泳动速度、筛孔.3.公式表明.一般来说颗粒带净电荷量越多,带电颗粒的泳动速度越快,常常会有一些离子基团如羧基,在筛孔大的凝胶中溶质颗粒泳动速度快,此溶液层会
影响凝胶电泳的因素有哪些?
DNA分子提取得到以后,需要通过电泳技术来检测其数量和质量。自从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶被引入核酸研究以来,按相对分子质量大小分离DNA的凝胶电泳技术,已经发展成为一种分析鉴定DNA分子的重要实验手段。琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是基因操作的核技术之一,它能够用于分离、鉴定和纯化DNA片段。该技术操
进口电泳仪的电泳迁移率受何因素影响?
进口电泳仪的电泳迁移率受何因素影响? 进口电泳仪又称毛细管电泳,是一种新型液相分离分析技术,以弹性石英毛细管为分离通道,以高压直流电场产生的电渗流为驱动力,根据试样中各组分之间电泳淌度和分配行为的差异实现分离。 进口电泳仪进行实验室哪些因素会影响电泳迁移率呢? DNA分子大小迁移速率与log
琼脂糖凝胶电泳及其影响因素
琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DN
单细胞凝胶电泳技术影响因素的分析
单细胞凝胶电泳(SCGE)又称“彗星”法,是一种操作简便、快速、敏感性高的DNA损伤与修复的检测技术。尽管此法无需复杂的实验条件,但在建立过程中可能受诸多因素的影响而难以得到较理想的结果,我们就其主要的影响因素作如下分析。1.琼脂糖凝胶薄板的制备:该实验需要制备两层琼脂糖凝胶薄板,应注意琼脂糖的浓度
影响色谱仪柱容量的因素
色谱仪的柱容量是指色谱峰没有明显变形,样品能够进入到色谱仪色谱柱中的大允许量。影响柱容量的因素有:1、固定液膜厚。2、固定相的选择性。3、柱内径。4、温度。5、样品量。如果过载,可导致色谱峰变宽、不对称或前延。
实验室分析仪器影响电泳迁移率的因素
⒈电场强度 电场强度是指单位长度(cm)的电位降,也称电势梯度。如以滤纸作支持物,其两端浸入到电极液中,电极液与滤纸交界面的纸长为 20cm,测得的电位降为 200V,那么电场强度为200V/20cm=10V/cm。当电压在500V以下,电场强度在 2-10v/cm 时为常压电泳。电压在 500
琼脂糖凝胶电泳迁移速率的影响因素
1、DNA的分子大小及构型 不同构型DNA的移动速度次序为:供价闭环DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝
琼脂糖凝胶电泳迁移速率的影响因素
1、 DNA的分子大小及构型: 不同构型DNA的移动速度次序为:共价闭环DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越
关于DNA酶切及凝胶电泳的影响因素分析
1、 DNA的分子大小: 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中蠕行,因而迁移得越慢。 2、 琼脂糖浓度 一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶
影响高效色谱仪柱容量的因素
高效色谱仪的柱容量是指色谱峰没有明显变形,样品能够进入到高效色谱仪色谱柱中的最大允许量。影响柱容量的因素有:1、固定液膜厚。2、固定相的选择性。3、柱内径。4、温度。5、样品量。如果过载,可导致色谱峰变宽、不对称或前延。
影响液相色谱仪梯度洗脱的因素
液相色谱仪进行梯度洗脱时,选定溶剂A、B之后,设定梯度速度和梯度时间,确定梯度曲线形状,要以最经济的梯度洗脱程序,实现样品的最佳化分离。影响梯度洗脱的因素有:1、溶剂的纯度要高,否则会使梯度洗脱的重现性变坏。2、梯度混合的溶剂互溶性要好,应防止不互溶的溶剂进入色谱柱。3、注意溶剂的粘度和密度对混合流
影响高速逆流色谱仪的使用因素
1、固定相的保留值 在逆流色谱中,留在管中固定相的量是影响溶质峰分离度的一个重要因素,高保留量将会大大改进峰分离度。 仪器对保留值的影响(外因) 研究表明:螺旋管支持件的自转半径r与公转半径R之比B值是一个影响两相互不混溶溶剂在旋转螺旋管内保留的关键因素。用大直径的支持件使值进一步提高,能导
影响顶空气相色谱仪的因素
(1)加热温度的影响:要保证挥发物质从试样中挥发出来,并达到稳定的动态平衡。加热温度愈高,逸出的干扰测定的其他挥发物质越多,选择合适的温度,减少干扰。另外,样品如处于高温恒温器里,在室温下注射会使沸点较高的组分冷凝。 (2)活度系数的影响:在样品中加入电解质或非电解质,可以增大活度系数有利测定。
影响凝胶色谱仪分离特性的因素
影响凝胶色谱仪分离特性的因素有样品分子量、凝胶类型、凝胶粒径、进样体积、样品浓度和流动相流速等。一、样品分子量:根据样品分子量选择分级范围较小的凝胶,以提高分离度和处理量。二、凝胶类型:1、软质凝胶:如交联葡聚糖等,水相分离生化体系,适合低中压操作。2、半刚性凝胶:较高交联度的苯乙烯和二乙烯苯共聚物
影响色谱仪色谱峰带宽的因素
影响色谱仪色谱峰带宽的因素有柱内因素和柱外因素。一、柱内因素:1、动力学因素:(1)涡流扩散:由于组分分子受到固定相颗粒的阻碍,在流动过程中不断改变运动方向,同一组分的不同分子通过填料的时间不一致,引起谱带展宽。(2)分子纵向扩散:由于待测组分在色谱柱中存在浓度差,产生分子纵向扩散。(3)流动相传质
影响液相色谱仪分离度的因素
影响液相色谱仪分离度的因素有色谱柱填充性能、流动相和流速等。一、色谱柱填充性能:液相色谱柱的分离性能由固定相粒度、柱长和柱压降(由柱内径和柱填充状况决定)决定,这三个参数度也决定了样品组分的保留时间。保留时间不仅与色谱过程的热力学因素k有关,还与决定柱效和分离度的柱性能参数及流动相的粘度有关,这些
电渗对电泳迁移率的影响
电渗是指在电场的作用下,涂膜中的大量水分从涂膜中渗析到槽液,使涂膜脱水形成几乎连电流也通不过的含水率极低的、电阻很高的致密涂膜。随着电泳时间,电阻越来越高,电流越来越低,场强E越来越小,电流越来越小,电泳迁移率也越来越小,最终达到平衡
凝胶电泳基本原理和影响电泳的外界因素
凝胶电泳基本原理和影响电泳的外界因素电泳基本原理:物质分子在正常情况下一般不带电,即所带正负电荷量相等,故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下,某些物质分子会成为带电的离子(或粒子),不同的物质,由于其带电性质、颗粒形状和大小不同,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,因
凝胶电泳基本原理和影响电泳的外界因素
电泳基本原理:物质分子在正常情况下一般不带电,即所带正负电荷量相等,故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下,某些物质分子会成为带电的离子(或粒子),不同的物质,由于其带电性质、颗粒形状和大小不同,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,因此可使它们分离。若溶液里一电量为Q的带
凝胶电泳基本原理和影响电泳的外界因素
凝胶电泳基本原理和影响电泳的外界因素电泳基本原理:物质分子在正常情况下一般不带电,即所带正负电荷量相等,故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下,某些物质分子会成为带电的离子(或粒子),不同的物质,由于其带电性质、颗粒形状和大小不同,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,因此
气相色谱仪的发展及影响因素
气相色谱法是近20余年迅速发展起来的一种新型的分离分析方法,已逐渐成为一门专门的科学气相色谱法。其zui早应用于分离分析石油产品,目前已被广泛应用于石油、化工、有机合成、医药及食品等工业的科学研究和生产等方面,不仅如此气相色谱法还可应用于生物化学、临床诊断和药理等方面的研究,特别在环境保护方面,对于