毛细管电泳色谱仪分析基因突变的方法
基因突变分析是遗传性疾病基因诊断和致病基因分离鉴定的基础,突变是一个或多个脱氧核糖核苷酸的构成、复制或表形功能的异常变化,即遗传物质结构改变引起遗传信息改变。随着对疾病病因和发病机制研究的不断深入,人类对疾病的认识逐渐深入到基因诊断的水平,传统技术多用琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离野生型DNA分子和突变DNA分子,但费时、费力,不适合自动化,而毛细管电泳色谱仪(CE)可快速获得基因突变模式的信息。CE分析基因突变的方法有单链构象多态性分析、限制片段长度多态性分析、异双聚体DNA多态性分析、双脱氧指纹谱图分析和毛细管电泳分子信标技术等。一、毛细管电泳-单链构象多态性分析:单链构象多态性分析检测基因突变的原理是将DNA变性形成单链,由于核苷酸不同而形成不同的二级空间构象。在毛细管电泳-单链构象多态性分析中,迁移速度主要取决于其二级空间构象,不同单链的DNA的迁移速度不同。如果基因的某些位点发生碱基突变,会引起单链DNA二级空......阅读全文
毛细管电泳(Capillary-electrophoresis,CE)——分离分析方法
毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)--分离分析方法CE是在传统的电泳技术基础上于本世纪60年代末由Hjerten发明的,其利用小的毛细管代替传统的大电泳槽,使电泳效率提高了几十倍。此技术从80年代以来发展迅速,是生物化学分析工作者与生化学家分离、定性抗原肽与蛋白
毛细管电泳色谱仪的分离模式
毛细管电泳色谱仪(CE)的分离模式有毛细管区带电泳、毛细管胶束电泳色谱、毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦电泳、毛细管等速电泳、毛细管阵列电泳和毛细管芯片电泳等。一、毛细管区带电泳(CZE):CZE又称毛细管自由电泳,由于操作简单、多样化,是目前CE中最基本、应用最广泛的一种分离模式。在CZE中,毛细
毛细管电泳色谱仪的检测技术
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。由于CE溶质区带的
毛细管电泳色谱仪的操作步骤
毛细管电泳色谱仪是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,一般操作流程是预平衡、进样、分离、检测和数据处理等。典型的操作步骤如下:一、将运行缓冲液充满毛细管。二、移去进样端缓冲液池,用样品池代替。三、用电动进样或压力进样方式进样。四、将进样端缓冲
毛细管电泳分析方法的工作原理介绍(一)
毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE)又叫高效毛细管电泳(HPCE), 是近年来发展最快的分析方法之一。1981年Jorgenson和Lukacs首先提出在75μm内径毛细管柱内用高电压进行分离, 创立了现代毛细管电泳。1984年Terabe等建立了胶束毛细
毛细管电泳分析方法的工作原理介绍(二)
CE现有六种分离模式,分述如下: 1. 毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis, CZE), 又称毛细管自由电泳, 是CE中最基本、应用最普遍的一种模式。前述基本原理即是CZE的基本原理。 2. 胶束电动毛细管色谱 (micellar elect
色谱仪分析方法(二)
第二节 色谱仪定量校正因子 色谱仪定量分析的依据是样品中各组分的量与其峰面积成正比,但峰面积的大小与组分的质量和性质有关,当两个质量相同的不同组分在相同条件下使用同一检测器进行测定时,所得的峰面积不相同。因此,样品中某一组分的百分含量并不等于该组分的峰面积在各组分峰面积总和中所占的百分率。这样就不能
色谱仪分析方法(一)
第一节 色谱仪定性分析方法 本节主要阐述气相色谱仪定性分析方法。气相色谱仪定性分析就是要确定各色谱峰所代表的化合物。由于各种物质在一定色谱条件下均有确定的保留值,保留值可作为一种定性指标,目前各种色谱定性方法都是基于保留值定性的。但不同物质在同一色谱条件下,可能具有相似或相同的保留值,即保留值并非专
色谱仪分析方法(四)
第三节 色谱仪定量分析方法 色谱仪定量分析方法有归一化法、内标法、内标标准曲线法和外标法。一、归一化法:归一化法是将样品中所有组分的含量之和定为100%,计算其中某一组分百分含量的定量方法。1、计算方法:Ci% =(mi/m)×100% = fi′Ai/(∑fi′Ai)×100%式中:Ci%为被测组
色谱仪分析方法(三)
3、基团截面积法:一般情况下,醇、醛、酮、醚、酯和卤素等极性化合物的相对摩尔响应值等于构成该化合物各个基团的相对摩尔响应值之和。用此法估算的数值与一般实验值吻合良好,误差约3%。部分基团的相对摩尔响应值Sm:(1)CH3-:12(2)-CH2-:11(3)-CH:10(4)-C-:9(5)F:57(
毛细管电泳色谱仪分离系统
毛细管电泳色谱仪是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,毛细管是分离的关键。一、毛细管材质:理想的毛细管必须是化学和电惰性,能透过紫外和可见光,有一定的韧性,富有弹性,易于弯曲,耐用而且便宜。目前使用的材质有聚四氟乙烯、玻璃和石英等,其中石英最
毛细管电泳色谱仪分离类型
毛细管电泳色谱仪分离类型有电泳型、色谱型、联用型和其它型。一、电泳型:1、毛细管区带电泳:毛细管内只填充pH缓冲液。2、毛细管凝胶电泳:毛细管内填充聚丙烯酰胺等凝胶。3、毛细管等电聚焦电泳:毛细管内填充pH梯度介质。4、毛细管等速电泳:通常采用不连续(自由溶液)电泳介质。二、色谱型:1、填充毛细管电
毛细管电泳色谱仪特点归纳
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。CE分离模式有毛细
毛细管电泳色谱仪检测系统
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。由于CE溶质区带的
毛细管电泳色谱仪检测技术
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用带电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。CE的毛细管极细,
色谱仪的定性分析方法
色谱仪定性分析的依据是物质的保留行为,定性分析方法主要有利用物质的保留行为定性、利用化学反应定性、与质谱和红外结合定性等。一、利用物质的保留行为定性:1、用已知对照定性:(1)比较保留值法:在相同色谱条件下,比较样品中各组分与已知物的保留值。(2)峰高增加法:把已知物加到样品中,看组分峰的增高来定性
液相色谱仪分析的定量方法
液相色谱仪分析的定量方法有归一化法、外标法和内标法等。一、归一化法:归一化法要求所有组分都能分离并有响应,由于液相色谱常用的检测器为选择性检测器,对很多组分没有响应,因此,液相色谱定性较少使用归一化法。二、外标法:外标法就是常用的标准曲线法。具体做法:将被测组分的纯物质配制成浓度与被测组分十分相近的
色谱仪分析的展开方法
色谱仪分析的展开方法有洗脱法、顶替法和迎头法。一、洗脱法:1、工作原理:组分与固定相之间的作用力>流动相与固定相之间的作用力。流动相在固定相上的吸附或溶解能力比样品组分中任何一个组分的吸附或溶解能力要弱得多。由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力不同,被流动相冲洗出来的次序也不同,从而使各组分得到分离
液相色谱仪分析的定性方法
液相色谱仪分析过程中影响溶质迁移的因素较多,同一组分在不同色谱条件下的保留值相差很大,即便在相同的操作条件下,同一组分在不同色谱柱上的保留也可能差别很大,因此,液相色谱与气相色谱相比,定性的难度更大。液相色谱仪分析中常用的定性方法有利用已知标准样品定性、利用检测器的选择性定性和利用紫外检测器全波长扫
毛细管电泳色谱仪的主要特点
毛细管电泳色谱仪是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度和分配系数的差异进行分离。由于毛细管的散热性能良好,允许在小内径毛细管两端加高达30kV的高电压,可在很短的时间内达到很高的分离效率,具有以下特点: 一、分离速度快。二、分离效率高。三、运行成本低。四、样品和试剂消
毛细管电泳色谱仪分离模式的发展
毛细管电泳色谱仪简称毛细管电泳仪(CE),是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用带电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。
气相色谱仪的分析依据和分析方法
气相色谱仪的色谱分析包括色谱定性分析和定量分析:1,气相色谱仪的分析依据:气相色谱主要功能不仅是将混合有机物中的各种成分分离开来,而且还要对结果进行定性及定量分析。所谓定性分析就是确定分离出的各组分是什么有机物质,而定量分析就是确定分离组分的量有多少。色谱在定性分析方面远不如其它的有机物结构鉴定技术
毛细管电泳色谱仪与液相色谱仪的性能特点比较
毛细管电泳色谱仪是(简称毛细管电泳仪)以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。毛细管
糖分析色谱仪分类方法
糖分析色谱仪种类有多种。1、按分离目的可分:实验室糖分析色谱仪和工业糖分析色谱仪。2、按产地可分:国产糖分析色谱仪和进口糖分析色谱仪。3、按灵敏性可分:微量糖分析色谱仪和痕量糖分析色谱仪。4、按分离规模可分:小型糖分析色谱仪和大型糖分析色谱仪。5、按应用范围可分:专用型糖分析色谱仪和通用型糖分析色谱
气体分析色谱仪分类方法
气体分析色谱仪种类有多种。1、按分离目的可分:实验室气体分析色谱仪和工业气体分析色谱仪。2、按色谱柱形状可分:填充柱气体分析色谱仪和毛细管柱气体分析色谱仪。3、按分离规模可分:微型气体分析色谱仪、小型气体分析色谱仪和大型气体分析色谱仪。4、按作用可分:气体分析定量色谱仪和气体分析定性色谱仪。5、按分
毛细管电泳色谱仪主要特点
毛细管电泳色谱仪(HPCE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度和分配系数的差异进行分离,具有三高二少的特点。一、高灵敏度:紫外检测器的检测下限可达10ˉ1~10ˉ15mol,激光诱导荧光检测器可达10ˉ19~10ˉ21mol。二、高分辨率:每米理论塔板数为几十万,高
毛细管电泳色谱仪整体柱制备
毛细管电泳色谱仪整体毛细管柱是采用有机和无机方法在毛细管中进行原位自由基聚合反应或固化,形成连续床固定相,不用柱塞,简化了柱制备过程。通过改变单体可引入多种官能团,有更好的多孔性和渗透性,对流动相阻力小,溶质在固定相和流动相之间快速分配,有利于实现高速分离。整体毛细管柱按基质不同可分为无机基质整体毛
毛细管电泳色谱仪基本概念
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以电渗流为驱动力,利用带电粒子之间的电泳淌度差异和分配系数差异进行分离。CE基本概念包括电泳现象和电渗现象等。一、电泳现象:1、电泳:电泳是指带电粒子在电场的作用下,向着与其电性相反的电极方向移动的现象。2、电泳技术:电泳技术是指利用电泳现象对混合物进
毛细管电泳色谱仪填充柱技术
毛细管电色谱仪(CEC)填充毛细管柱是将固定相填充到毛细管中,通过两端烧结柱塞将固定相保持在毛细管中而成。其zui大优点是可利用众多的HPLC固定相,根据化合物与固定相的作用不同实现分离,在CEC中应用zui广泛。一、固定相:固定相是影响填充毛细管柱分离选择性、柱效和分离速度的重要因素,是发展新型C
毛细管电泳色谱仪性能特点归纳
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。CE分离模式有毛细