琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪载体概述
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪用于分离、鉴定和纯化DNA段,是分子克隆的核心技术之一。该技术操作简单,迅速,能分离用其它方法如密度梯度离心等不能满意分离的DNA段。此外,凝胶中DNA的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭直接观察到,甚至含量少至20pg的双链DNA在紫外线激发下也能直接检测到。这些分离的DNA条带可以从凝胶中回收,用于各种各样的目的。 琼脂糖凝胶的分离范围很大,50bp至百万bp长的DNA都可以在不同浓度和构型的琼脂糖凝胶中电泳分离。小片段DNA(50~20000bp)zui适合在恒定强度和方向的电场中水平方位的琼脂糖凝胶中电泳分离。在这些条件下,DNA的泳动速度通常随DNA段长度的增加而减少,与电场强度成正比。但此相关性当DNA段长度超过最大极限值时会立即被破坏,这主要是由于凝胶的构成和电场强度决定的。当线状双螺旋DNA的半径超过凝胶的孔径时,就达到分辨率的极限。此时,DNA不再被凝胶按其大小筛分......阅读全文
载体小件的概念和应用特点
中文名称载体小件英文名称vectorette定 义人工合成的长几十个核苷酸对的寡核苷酸双链体。链末端带有突出的黏端,能方便于待检测的DNA片段插入。载体小件上含有特有序列互补的引物,能与待检的DNA配对,可用聚合酶链反应技术扩增该DNA片段并随之进行测序。适用于只有一个引物可用的DNA片段的扩增,
重组疫苗载体的概念和作用
中文名称重组疫苗载体英文名称recombined vaccine vector定 义用于携带重组疫苗抗原编码基因的已有病毒或细菌的疫苗株。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫预防(三级学科)
真核载体的概念和应用
中文名称真核载体英文名称eukaryotic vector定 义能携带插入的外源核酸序列进入真核细胞中复制的载体。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
生物载体的定义和应用特点
载体(Vector) ,指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。在实际生活中,胰岛素就可以通过使用载体将已插入胰岛素基因片段的质粒放入大肠杆菌内。经过插入基因片段的质粒就称作载体。该质粒在细菌内可
取代型载体的概念和应用
中文名称取代型载体英文名称replacement vector定 义在插入外源DNA时需要去除载体上一段长度相当的序列,以维持一定范围的DNA分子长度,才能够组装成有转染活性的噬菌体的一类噬菌体克隆载体。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
谷胱甘肽琼脂糖凝胶的使用方法
实验概要本实验介绍了谷胱甘肽琼脂糖凝胶的使用方法。Pgex载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶溶合,因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。Pgex是一类以谷胱甘肽(γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸)作为底物,通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚豪摩尔级的,因此谷胱甘肽
离子交换色谱仪琼脂糖离子交换剂
离子交换色谱仪琼脂糖离子交换剂主要以交联琼脂糖CL-6B为基质,通过化学方法引入电荷基团制成的。一、按引入电荷基团的性质分类:1、阳离子交换琼脂糖:CM-Sepharose CL-6B等。2、阴离子交换琼脂糖:DEAE-Sepharose CL-6B等。二、特点:具有硬度大、性质稳定、网孔大、流速好
聚合酶链反应构建重组DNA
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE无水乙醇DNA聚合酶CTP仪器、耗材 电泳仪离心机PCR仪实验步骤 1. 制备模板DNA,如DNA不是经氯化铯梯度纯化的,100℃煮沸10 min 以灭活核酸酶。 2. 制备寡核苷酸引物,若PCR产物要进行平端克隆,就应该对引物的5’端羟基进行磷酸化处理。 图一
低熔点琼脂糖的特性和应用
低熔点琼脂糖是经过化学修饰的琼脂糖,具有更高的筛过特性,更透明。是理想的DNA和RNA电泳产品,也适合组织培养细胞的克隆和病毒空斑分析。多糖链上引入羟乙基、甲氧基等基团后的琼脂糖。由于其能在30℃左右成胶,约65℃熔化,熔化温度低于大多数双链DNA熔点。利用低熔点琼脂糖的这种性质可以从凝胶中回收天然
琼脂糖凝胶的制备方法和作用
把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,冷却制成的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤,若使用5%以下浓度的凝胶,也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点,有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。
琼脂糖凝胶的制备方法和作用
制备方法把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,冷却制成的凝胶。作用制成的小颗粒用于凝胶过滤。适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤,若使用5%以下浓度的凝胶,也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点,有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支
琼脂糖胶和PAGE胶制备方法
一、琼脂糖凝胶的特点 天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫
琼脂糖胶和PAGE胶制备方法
一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫酸根可与
琼脂糖的基本概念和功效
琼脂糖是一种有机物,化学式C24H38O19,是一种白色或黄色珠状凝胶颗粒或粉末,为线性的多聚物,基本结构是1,3连结的β-D-半乳糖和1,4连结的3,6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链 。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解,温度下降到35-40℃时
气相色谱仪概述
气相色谱仪是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术,是一种新的分离分析技术。一、基本结构:由气路系统、进样系统、分离系统、温控系统、检测系统和数据处理系统等组成。二、工作原理:利用混合物各组分在固定相和流动相中溶解、分配或吸附等化学作用性能的差异,使各组分在作相对运动的两相中反复多次受到上述各作用力
痕量烃色谱仪概述
为石油、化工、钢铁和气体工业等检测碳氢化合物的过程控制仪表,对难分离物质(C1~C4)分离度高,检测灵敏度高(乙炔:0.01ppm),满足国家标准中相关规定要求。 概述: GS-101A型在线自动痕量烃色谱仪 ,可以在线自动连续地进行液氧、 二氧化碳及其它惰性气体中痕量碳氢化合物的定量分析。
凝胶渗透色谱仪概述
凝胶渗透色谱仪是一种用于材料科学、化学、化学工程领域的仪器,于2004年12月31日启用。 技术指标 流动相溶剂:THF 测量温度:室温~50 ℃ 分子量范围:100~1000000 操作系统:Empower 软件。 主要功能 Waters 1525/2414:根据高分子溶液流体力学体积
高速逆流色谱仪概述
高速逆流色谱法(High-speed Countercurrent Chromatography,简称HSCCC),于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术,与其它色谱技术不同的是它不需任何固态载体,因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污
高效液相色谱仪概述
高效液相色谱仪是近几十年发展起来的一种高效、快速的分离分析技术,是现代分离检测的重要工具。高效液相色谱仪是以经典液相色谱仪为基础,引入气相色谱仪的理论和实验方法,将流动相改为高压输送,采用高效固定相和在线检测等手段,发展而成的分离分析技术。一、基本结构:由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据
液相色谱仪系统概述
主要功能 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中做相对运动时,经过反复多次的吸附 -解吸的分配过程,
离子交换色谱仪的固定相和流动相概述
离子交换色谱仪以离子交换树脂为固定相,以无机酸或无机碱的水溶液为流动相,各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力不同而得到分离。一、固定相:离子交换树脂固定相上具有固定离子基团和可交换的离子基团,当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时,组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆交换。1、按结构
定点诱变实验——基本方案
定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征,是基因研究工作中一种非常有用的手段。实验材料DNA试剂、试剂盒TE寡核
聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪的优点
聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪是以聚丙烯酰胺凝胶为载体,不仅能分离含有各种大分子的混合物,而且可以研究生物大分子的特性如电荷、分子量、等电点和分子构型等。一、孔径大小与生物大分子具有相似的数量级,具有良好的分子筛效应。二、孔径大小可调节,可用于分离多种生物分子。三、机械强度好,弹性大,电渗低、分辨率高。四
聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪的类型
聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪根据有无浓缩效应可分为连续凝胶电泳色谱仪和不连续凝胶电泳色谱仪。一、连续凝胶电泳色谱仪:采用相同孔径的凝胶和相同的缓冲液(样品缓冲液、凝胶缓冲液和电极缓冲液),在pH恒定和离子强度相同的条件下进行电泳。 1、分离效应:主要靠电荷效应和分子筛效应实现分离。 2、特点:(1)
聚合酶链反应构建重组DNA
2016年09月12日 15:27 来源:上海江林生物科技有限公司>>进入该公司展台 实验材料DNA试剂、试剂盒TE无水乙醇DNA聚合酶CTP仪器、耗材电泳仪离心机PCR仪实验步骤1. 制备模板DNA,如DNA不是经氯化铯梯度纯化的,100℃煮沸10 min 以灭活核酸酶。 2. 制备寡核苷
异源载体疫苗的概念和作用
中文名称异源载体疫苗英文名称heterologous carrier vaccine定 义一种新型疫苗。即将疫苗附着在大分子载体上,以增强其免疫原性。所用载体一般是具有免疫原性的大分子蛋白质或减毒的活病毒、细菌。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫预防(三级学科)
病毒和噬菌体载体的基本介绍
病毒主要有DNA(或RNA)和外壳蛋白组成,经包装后成为病毒颗粒。通过感染,病毒颗粒进入宿主细胞,利用宿主细胞的合成系统进行DNA(或RNA)复制和壳蛋白的合成,实现病毒颗粒的增殖。把感染细菌的病毒专门称为噬菌体,由此构建的克隆载体则称为噬菌体克隆载体。 噬菌体作为载体,可插入长10~20kb
载体疫苗的作用特点和功能优势
载体疫苗将抗原基因通过无害的微生物这种载体进入体内诱导免疫应答。它的特点是组合了减毒活疫苗强有力的免疫原性和亚单位疫苗的准确度两个优势。这种活载体疫苗的一个显著好处是可以有效在体内诱导细胞免疫,这在目前诱导细胞免疫方法还不够好、细胞免疫在一些疾病又特别重要的背景下显得很有前景。在试验中使用的重要载体
离子载体的作用和主要类型
大多数离子载体是细菌产生的抗生素,它们能够杀死某些微生物,其作用机制就是提高了靶细胞膜通透性,使得靶细胞无法维持细胞内离子的正常浓度梯度而死亡,所以离子载体并非是自然状态下存在于膜中的运输蛋白,而是人工用来研究膜运输蛋白的一个概念。根据改变离子通透性的机制不同,将离子载体分为两种类型:通道形成离子载
化学领域中的载体概念和应用
载体(vector) ,能载带微量物质共同参与某种化学或物理过程的常量物质。在气态物质的分离过程中也称为载气。放射化学研究中核衰变和核反应过程生成的元素的量通常极少,大约为10-8~10-12克,这些物质即使在溶液中可以生成某些难溶化合物,但由于数量少而不能形成独立相,它可能吸附于器壁或其他颗粒的表