病毒和噬菌体载体的基本介绍
病毒主要有DNA(或RNA)和外壳蛋白组成,经包装后成为病毒颗粒。通过感染,病毒颗粒进入宿主细胞,利用宿主细胞的合成系统进行DNA(或RNA)复制和壳蛋白的合成,实现病毒颗粒的增殖。把感染细菌的病毒专门称为噬菌体,由此构建的克隆载体则称为噬菌体克隆载体。 噬菌体作为载体,可插入长10～20kb甚至更大的一些外源DNA片段,又由于噬菌体有较高的增殖能力,有利于目的基因的扩增,从而成为当前基因工程研究的重要载体之一。 野生型的噬菌体必须经过改造,才能成为比较理想的基因工程载体。噬菌体中首先被改造成为载体的是λ噬菌体,此外还有单链噬菌体载体、黏性质粒载体等。λ噬菌体由头和尾构成,其基因组是长约49kb的线性双链DNA分子,组装在头部蛋白质外壳内部,其序列已被全部测出。λ噬菌体感染时,通过尾管将基因组DNA注入大肠杆菌,而将其蛋白质外壳留在菌外。DNA进入大肠杆菌后以其两端12bp的互补单链黏末端环化成环状双链,可以两种不同的方......阅读全文
病毒和噬菌体载体的基本介绍
病毒主要有DNA(或RNA)和外壳蛋白组成,经包装后成为病毒颗粒。通过感染,病毒颗粒进入宿主细胞,利用宿主细胞的合成系统进行DNA(或RNA)复制和壳蛋白的合成,实现病毒颗粒的增殖。把感染细菌的病毒专门称为噬菌体,由此构建的克隆载体则称为噬菌体克隆载体。 噬菌体作为载体,可插入长10～20kb
构建λ噬菌体载体的基本途径介绍
构建λ噬菌体载体的基本途径如下： ①抹去某种限制性内切酶在λDNA分子上的一些识别序列,只在非必需区保留1～2个识别序列； ②用合适的限制性内切酶切去部分非必需区,但是由此构建的λDNA载体不应小于38kb； ③在λDNA分子的合适区域插入可供选择的标记基因。值得指出的是,没有适用于克隆所
关于病毒载体的基本介绍
病毒载体可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入其他细胞，进行感染的分子机制。可发生于完整活体（in vivo）或是细胞培养（in vitro）中。可应用于基础研究、基因疗法或疫苗。
关于M13噬菌体载体的基本介绍
M13噬菌体是一类特异的雄性大肠埃希菌噬菌体，基因组为一长度6.4kb的且彼此同源性很高的单链闭环DNA分子。只感染雄性大肠埃希菌，但M13噬菌体DNA可以转传导进入雌性大肠埃希菌。M13子代噬菌体通过细胞壁挤出，并不杀死细菌，但细菌生长速度缓慢。 该类噬菌体作为克隆载体，可以通过质粒提取技术
病毒载体的基本信息介绍
可供利用的病毒可分为逆转录病毒、慢病毒与腺病毒。 1.分为： 噬菌体载体、杆状病毒载体、动物病毒载体、植物病毒载体 2. 优点：转导效率高、复杂的装配过程由细胞完成、不同病毒载体具有不同表达特点 3.根据病毒载体在主细胞中的存在情况分为瞬时表达病毒载体和稳定表达病毒载体 3-1瞬时表达病
腺相关病毒载体的基本介绍
腺相关病毒载体是利用天然存在的腺相关病毒某些特性经过基因工程改造后产生的一种可供人工转基因的载体。腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）是简单的非致病性单链DNA病毒，需要辅助病毒参与生活周期，辅助病毒通常为腺病毒（Ad）或者单纯疱疹病毒（HSV）。基因组两端为末端反
腺病毒载体的基本信息介绍
腺病毒是无包膜的线性双链DNA病毒，在自然界分布广泛，至少存在100种以上的血清型。其基因组长约36kb，两端各有一个反向末端重复区（ITR），ITR内侧为病毒包装信号。基因组上分布着4个早期转录元（E1、E2、E3、E4）承担调节功能，以及一个晚期转录元负责结构蛋白的编码。早期基因E2产物是晚
关于腺相关病毒载体的基本介绍
腺病毒相关病毒(adeno-associated virus，AAV)是一类单链线状DNA缺陷型病毒。其基因组DNA小于5 kb，无包膜，外形为裸露的20面体颗粒。AAV不能独立复制，只有在辅助病毒（如腺病毒、单纯疱疹病毒、痘苗病毒）存在时，才能进行复制和溶细胞性感染，否则只能建立溶源性潜伏感染
腺相关病毒载体的基本构建介绍
1、AAV病毒的感染细胞 AAV载体对于骨骼肌、视网膜、肝细胞、心脏平滑肌细胞、神经元细胞、胰岛B细胞、关节滑膜细胞等具有良好的感染效果，而对于淋巴细胞、造血干细胞、神经胶质细胞、成纤维细胞等感染效果较差。 2、病毒的加样量 病毒量为10-10V.P/Cell时最佳。如果太低，基本检测不出
关于慢病毒载体的基本信息介绍
慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞， 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使
腺相关病毒载体的基本信息介绍
腺相关病毒载体是利用天然存在的腺相关病毒某些特性经过基因工程改造后产生的一种可供人工转基因的载体。腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）是简单的非致病性单链DNA病毒，需要辅助病毒参与生活周期，辅助病毒通常为腺病毒（Ad）或者单纯疱疹病毒（HSV）。基因组两端为末端反
关于慢病毒载体的介绍
慢病毒载体（Lentiviral vector）较逆转录病毒载体有更广的宿主范围，慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达shRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达shRNA，实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定
腺病毒载体的分类介绍
第一代腺病毒载体：一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体称为第一代腺病毒载体，此类型载体在未经过纯化时可引发机体产生较强的炎症反应和免疫反应，纯化后可以安全使用，体内表达周期可达4周。 第二代腺病毒载体：E2A或E4基因缺失的腺病毒载体被称为第二代腺病毒载体，产生的免疫反应较弱其载体容量和安全性
简述腺相关病毒载体的基本特点
一、优点 在辅助腺病毒存在下，AAV可以高效定点整合至人染色体中；而现在的AAV载体已经不需要腺病毒辅助，不插入宿主的基因组，而是游离于宿主细胞基因之外，呈卫星状稳定表达。 腺相关病毒载体（AAV）体内的感染效率极高。不同血清型可以相对特异性的感染心脏，肝脏，骨骼肌等。 腺相关病毒是RG1
微载体的基本介绍
自Van Wezel用DEAE-Sephadex A 50 研制的第一种微载体问世以来，国际市场上出售的微载体商品的类型已经达十几种以上，包括液体微载体、大孔明胶微载体、聚苯乙烯微载体、PHEMA微载体、甲壳质微载体、聚氨酯泡沫微载体、藻酸盐凝胶微载体以及磁性微载体等。常用商品化微载体有三种：Cyt
关于λ噬菌体的基本介绍
λ噬菌体是一种温和噬菌体，它通过尾管将基因组DNA注入大肠杆菌，其蛋白质外壳留在菌外。进入细菌后的DNA以两端12bp互补单链黏性末端连成双链环状，能以两种不同的方式增殖。 1951年J. Lederberg的妻子Esther Lederberg证明了J. Lederberg和Tatum用来杂
λ噬菌体的载体表达实验
实验材料 表达载体试剂、试剂盒 SDSLB仪器、耗材 培养箱分光光度计离心机实验步骤 1. 将表达载体转化携有温度敏感突变的抑制基因的大肠杆菌溶源菌。转化物涂布于LB/抗生素平皿上，32℃下温育。2. 于抗生素培养基中，32℃培养转化菌。 3. 以≥1：20的比例将过夜培养物稀释往新鲜的LB/
λ噬菌体的载体表达实验
基本方案1 基本方案2 实验材料 表达载体 试剂、试剂盒
关于λ类噬菌体载体的概述
构建λ噬菌体载体的基本原理是多余限制位点的删除，按照这一基本原理构建的λ噬菌体的派生载体，可以归纳成两种不同的类型：一种是插入型载体（insertionvectors），只具有一个可供外源DNA插入的克隆位点，另一种是替换型载体（rePlacementvectors），具有成对的克隆位点，在这两
简述慢病毒载体的基本原理
慢病毒载体系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。 1、包装成分 由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白。包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型
关于慢病毒载体的概念介绍
慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在
关于慢病毒表达载体的介绍
慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中
腺病毒载体的应用优势介绍
腺病毒载体转基因效率高，体外实验通常接近100%的转导效率；可转导不同类型的人组织细胞，不受靶细胞是否为分裂细胞所限；容易制得高滴度病毒载体，在细胞培养物中重组病毒滴度可达（10E+11）/ml；进入细胞内并不整合到宿主细胞基因组，仅瞬间表达，安全性高。因而，腺病毒载体在基因治疗临床试验方面有了
LITMUS39载体载体载体的基本信息和质粒图谱
LITMUS39载体载体基本信息载体名称LITMUS39载体抗性Ampicillin载体长度2817 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Evans PD, Cook SN, Riggs PD, Noren CJ.拷贝数High copy number5'引物M13
病毒包装技术1——病毒与非病毒载体介绍
基于转化医学的研究理念，锐赛知道，每一项临床疾病的致病源头或表象最初都是由个体体内某个基因的突变导致了。所以每一项临床疾病的研究，整体课题项目开展的最初源头也必须从一个基因开始。 锐赛在多年的转化医学研究中，在于各个临床医师的整体项目合作中，探讨得出的不仅是转化医学临床研究课题的整体思路，
病毒包装技术5——腺病毒载体的制备介绍
1 菌液的准备 1.1. 取含目的质粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超净台用接种环划线于氨苄抗性的平板上，37℃倒置培养12-16h。待平板长出菌落，挑选生长状态良好的单克隆菌落。若无目的质粒的菌液，则需取库存质粒进行转化，然后挑单克隆摇菌。 1.2. 将单
细菌疫苗载体的基本介绍
中文名称细菌疫苗载体英文名称bacterial vaccine vector定 义作为疫苗载体的细菌性疫苗株。如卡介苗菌。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫预防（三级学科）
重组疫苗载体的基本介绍
中文名称重组疫苗载体英文名称recombined vaccine vector定 义用于携带重组疫苗抗原编码基因的已有病毒或细菌的疫苗株。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫预防（三级学科）
关于质粒载体的基本介绍
质粒是小型环状DNA分子，在基因工程中作为最常用，最简单的载体，必须包括三部分：遗传标记基因，复制区，目的基因。 质粒在所有的细菌类群中都可发现，它们是独立于细菌染色体外自我复制的DNA分子。自然界中，质粒是在营养充足时出现的，它在结构、大小、复制方式，每个细菌的拷贝数，在不同的细菌体内的繁殖力
关于烈性噬菌体的基本介绍
烈性噬菌体也称为毒性噬菌体，噬菌体的繁殖一般分为5个阶段，即吸附、侵入、增殖（复制与生物合成）、成熟（装配）和裂解（释放）。凡在短时间内能连续完成以上5个阶段而实现其增殖的噬菌体，称为烈性噬菌体（virulent phage）